Способ обнаружения фальсификации молочных продуктов растительными жирами или маслами

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ФАЛЬСИФИКАЦИИ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ РАСТИТЕЛЬНЫМИ ЖИРАМИ ИЛИ МАСЛАМИ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Филонов Валерий Петрович Тимофеева Ольга Николаевна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(56) СТБ ГОСТ Р 51471-2008. Жир молочный. Метод обнаружения растительных жиров газожидкостной хроматографией стеринов. ЧМИЛЕНКО Ф.А. и др. // Методы и объекты химического анализа. - 2009. Т. 4. -1. - С. 60-66. ЧМИЛЕНКО Ф.О. и др. // Харчова промисловсть. - 2008. -7. - С. 20-23... //. 2007. - . 102. - . 113-117.2279071 2, 2006.2188418 1, 2002.2220414 1, 2003.(57) Способ обнаружения фальсификации молочных продуктов растительными жирами или маслами с помощью газожидкостной хроматографии, включающий отбор пробы, экстракцию из нее молочного жира, его щелочной гидролиз с выделением стеринов и последующий анализ на хроматографической капиллярной колонке, отличающийся тем, что молочный жир экстрагируют гексаном и проводят гидролиз без нагревания, к гидролизату добавляют дистиллированную воду, проводят хроматографический анализ гексанового слоя на неполярной высокотемпературной капиллярной колонке длиной 60 м с жидкой фазой 100 диметилсилоксана, внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной пленки жидкой фазы 0,25 мкм и при обнаружении на хроматограмме пиков со временем удерживания, характерным для одного или нескольких фитостеринов, делают вывод о наличии в пробе растительных жиров или масел. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также к пищевой промышленности. Известен способ обнаружения растительных жиров в молочном жире газожидкостной хроматографией стеринов, основанный на гидролизе молочного жира, выделении стеринов и разделении их с помощью газожидкостной хроматографии на хроматографической колонке 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Общими признаками для заявляемого способа и прототипа являются гидролиз молочного жира, выде 16763 1 2013.02.28 ление стеринов и их последующее разделение на хроматографической колонке. Однако указанный способ имеет недостатки. Во-первых, общее время пробоподготовки образцов составляет 13,5 ч. Во-вторых, при его применении необходимо использовать большое количество дорогостоящих реактивов, в том числе для получения производных стеринов дигитонин, стоимость которого на один анализ составляет 153 тыс. рублей. В последнее время молоко и молочные продукты фальсифицируют растительными жирами и маслами, в связи с чем возникает необходимость в проведении экспресс-анализа такой продукции. Выявление фальсификации молочной продукции возможно по обнаружению в молочном жире фитостеринов, соединений, присутствующих в растительных жирах и маслах. Задачей заявляемого изобретения является сокращение времени обнаружения растительных жиров или масел в молочном жире и удешевление способа. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ обнаружения фальсификации молочных продуктов растительными жирами или маслами с помощью газожидкостной хроматографии, включающий отбор пробы, экстракцию из нее молочного жира, его щелочной гидролиз с выделением стеринов и последующий анализ на хроматографической капиллярной колонке, когда молочный жир экстрагируют гексаном и проводит гидролиз без нагревания, к гидролизату добавляют дистиллированную воду, проводят хроматографический анализ гексанового слоя на неполярной высокотемпературной капиллярной колонке длиной 60 м с жидкой фазой 100 диметилсилоксана, внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной пленки жидкой фазы 0,25 мкм и при обнаружении на хроматограмме пиков со временем удерживания, характерным для одного или нескольких фитостеринов, делают вывод о наличии в пробе растительных жиров или масел. Предварительное растворение молочного жира в гексане позволяет провести осаждение свободных стеринов спиртовым растворомбез нагревания и получения производных с дорогостоящим дигитонином, что значительно сокращает время пробоподготовки, а применение неполярной высокотемпературной капиллярной колонки длиной 60 м с жидкой фазой 100 диметилсилоксана позволяет качественно разделить пики фитостеринов. Время пробоподготовки образцов составляет 20 мин. На фиг. 1 представлена хроматограмма натурального сливочного масла, на которой обнаружен только холестерин (стерин молочного жира). На фиг. 2 представлена хроматограмма натурального рапсового масла, на которой обнаружены фитостерины - кампестерин, стигмастерин, -ситостерин. На фиг. 3 представлена хроматограма стеринов масла сливочного, фальсифицированного растительными жирами или маслами. Пример. Обнаружение фальсификации молочного жира растительными жирами или маслами. 1. Гидролиз, выделение. Навеску образца 0,10-0,30 г помещают в пробирку вместимостью 15 см 3 с пришлифованной пробкой, добавляют 2 см 3 гексана, встряхивают, после полного растворения навески приливают 5 см 3 16 этанольного раствора , встряхивают 1 мин. Затем в пробирку добавляют 5 см 3 дистиллированной воды и встряхивают 10 с. После разделения слоев из верхнего гексанового слоя отбирают микрошприцем 2,0 мкл и вводят в хроматограф. 2. Газохроматографический анализ. Газохроматографический анализ проводят на газовом хроматографе с пламенноионизационным детектором и неполярной высокотемпературной капиллярной колонкой. Для анализа используют колонку -1 с жидкой фазой 100 диметилсилоксана длиной 16763 1 2013.02.28 60 м, внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной пленки жидкой фазы 0,25 мкм, газноситель - гелий. Добавление газа-носителя на входе в колонку 180 кПа. Деление потока газа-носителя 115. При анализе используют программирование температуры колонки со 150 до 280 С со скоростью 30 С/мин. Температура испарителя 295 С, детектора - 290 С. Время выхода пиков холестерина - 13,2 мин, кампестерина 15,1 мин, стигмастерина - 15,7 мин, -ситостерина - 17,0 мин предварительно установлено при анализе стеринов в контрольных образцах - реальных натуральных продуктах (масло сливочное - фиг. 1, масло рапсовое - фиг. 2, масло сливочное фальсифицированное - фиг. 3), пробоподготовка и хроматографирование которых осуществлялась аналогично молочному жиру. 3. Обработка результатов. Если на хроматограмме, кроме холестерина, наблюдают пики с временем удерживания, характерным для одного или нескольких фитостеринов - кампестерин, стигмастерин,-ситостерин, то это подтверждает их наличие в анализируемой пробе. Присутствие на хроматограмме пика одного или нескольких фитостеринов подтверждает наличие в пробе продукта растительных масел или жиров. Время пробоподготовки, количество и расход реактивов при анализе молочного жира на стерины представлены в таблице. Время пробоподготовки, количество и расход реактивов при анализе фальсификации растительными жирами или маслами молочного жира предлагаемым и известным способами Время пробоподго- Количество используеВремя нагревания Расход реактивов товки образца мых реактивов при гидролизате по предлагаемому способу гексан 2 см 3 25 5 см 3 20 мин без нагревания 0,8 г 2 дист. 5 см 3 по известному способу (прототип) 10 г 25 280 см 3 дигитонин 0,3 г диэтиловый эфир 50 см 3 13,5 ч 1 ч 15 мин формамид 0,5 см 3 диметилформамид 0,5 см 3 пентан 2,5 см 3 2 160 см 3 Таким образом, достигаемый технический результат заявляемого способа заключается в том, что по сравнению с прототипом время пробоподготовки снижается в 40,5 раза, в 2 раза сокращается количество используемых реактивов, исключается использование дорогостоящего дигитонина для получения производных стеринов, а пики стеринов при этом разделяются хорошо и дают возможность четкого обнаружения фальсификации молочных продуктов. Источники информации 1. СТБ ГОСТ Р 51471-2008 Жир молочный. Метод обнаружения растительных стеринов. Введ. 01.03.2009. - Минск Госстандарт, 2008. - 7 с. (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4