Способ обнаружения личинок и яиц гельминтов, ооцист и цист простейших в молочных продуктах

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ЛИЧИНОК И ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ,ООЦИСТ И ЦИСТ ПРОСТЕЙШИХ В МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ(71) Заявитель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Автор Скрипова Лариса Викторовна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(56) КОТЕЛЬНИКОВ Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. - М. Колос, 1984. С. 94-95.1308900 1, 1987.1748757 1, 1992.(57) Способ обнаружения личинок и яиц гельминтов, ооцист и цист простейших в молочных продуктах, заключающийся в том, что пробу продукта разбавляют 0,5 -ным раствором жидкого моющего жирорастворяющего средства при объемном соотношении пробы и раствора 1(1-4), отстаивают в течение 15-20 мин, сливают надосадочную жидкость, прибавляют к ней дистиллированную воду при их объемном соотношении 1(1-10), центрифугируют, из полученного осадка готовят препараты для микроскопирования и микроскопируют. Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторному обнаружению личинок и яиц гельминтов, ооцист и цист простейших. Санитарными правилами не допускается присутствие в молочной продукции личинок и яиц гельминтов, ооцист и цист патогенных простейших. Известны способы исследования молока и молочных продуктов на наличие яиц и личинок гельминтов 1. Способ 1. Пробу молока разбавляют 11 дистиллированной водой, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин, надосадочную жидкость сливают, а осадок исследуют по методу флотации к осадку добавляют флотационный раствор нитрата натрия, смешивают осадок с ним и через 15 мин поверхностную пленку микроскопируют. Осадок, полученный при центрифугировании, без обработки исследуют на наличие личинок нематод. Способ 2. Пробу творога заливают водой 110 и встряхивают каждые 30 мин в течение 5 мин, выдерживают 2-3 часа. Затем массу творога удаляют, жидкость отстаивают 1-1 ч, надосадочную жидкость или отсасывают пипеткой, или осторожно сливают. Осадок взбалтывают, переливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 5-10 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок смывают флотационным раствором нитрата натрия в стаканчики объемом 50-100 мл, доливают раствор до полного объема 11959 1 2009.06.30 и оставляют на 20-30 мин. Поверхностную пленку снимают металлической петлей на предметное стекло и микроскопируют. Способ 3. Исследование сливочного масла проводят так же, но флотационный раствор подогревают до 37-38 С, для того чтобы облегчить отделение яиц гельминтов от всплывающего на поверхность жира. Недостатками способов являются недостаточное отделение яиц гельминтов и цист, ооцист простейших из молочного белка флотирующими реагентами потери возбудителей при снятии поверхностной пленки для микроскопии, образовавшейся после применения флотационного раствора длительность исполнения методики до 5 часов 15 минут низкая эффективность обнаружения яиц и личинок гельминтов до 26 невыявляемость цист и ооцист простейших из-за их деструкции (разрушения) после действия флотационного раствора нитрата натрия. Задачей изобретения является разработка способа с эффективностью обнаружения личинок и яиц гельминтов, цист и ооцист простейших в молоке и молочных продуктах до 96 , снижение трудоемкости и экономическая выгода. Технический результат достигается в способе обнаружения личинок и яиц гельминтов, ооцист и цист простейших в молочных продуктах, заключающемся в том, что пробу продукта разбавляют 0,5 -ным раствором жидкого моющего жирорастворимого средства при объемном соотношении пробы и раствора 1(1-4), отстаивают в течение 15-20 минут,сливают надосадочную жидкость, прибавляют к ней дистиллированную воду при их объемном соотношении 1 (1-10), центрифугируют, из полученного осадка готовят препараты для микроскопирования и микроскопируют. Технический результат выражается в том, что раствор жидкого моющего, жирорастворимого средства действует в качестве растворителя молочного белка любой жирности,при этом выделившиеся личинки и яйца гельминтов, цисты и ооцисты простейших находятся во взвешенном состоянии, а появившиеся молочные хлопья оседают на дно емкости. Представленное действие способствует эффективности обнаружения возбудителей до 98,6 . Время на исследование сокращено в 4-5 раз в сравнении с существующими методами. Преимущества предлагаемого способа растворяет молочный белок и обезжиривает, что способствует отделению личинок и яиц гельминтов, ооцист и цист простейших обнаруживаются ооцисты и цисты простейших исключается потеря возбудителей и их деструкция (разрушение) сокращается время проведения методики исследования молочных продуктов упрощается метод исследования (смешение с жирорастворимым средством, центрифугирование, микроскопия осадка) удешевление анализа за счет исключения применения химреактивов, уменьшения затрат времени на проведение исследования. Сущность изобретения иллюстрируется примерами. Пример 1 Санитарно-паразитологическое исследование молока. Молоко в количестве 10 мл разбавляют 10 мл 0,5 раствора жидкого моющего, жирорастворимого средства (например, которое используется для мытья посуды) и отстаивают 15-20 мин. Надосадочную жидкость с отделившимися возбудителями сливают в чистую пробирку. Для осаждения возбудителей добавляют такое же количество дистиллированной воды, размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 5 мин при 1500 об/мин (600), из полученного осадка готовят препараты для микроскопирования и микроскопируют. Время, затраченное на исследование 40 минут. 2 11959 1 2009.06.30 Пример 2 Санитарно-паразитологическое исследование молока 4-10 жирности, масла, кефира,творога, сыров. Пробу продукта в количестве 10 мл, г помещают в фарфоровую чашку, заливают 0,5 раствором жидкого моющего, жирорастворимого средства в количестве 40 мл,тщательно растирают пестиком и оставляют на 15-20 мин. Надосадочную жидкость с отделившимися возбудителями сливают в чистый стакан. Для осаждения возбудителей в стакан добавляют 5-10 частей дистиллированной или кипяченой воды, размешивают стеклянной палочкой и отстаивают 5 мин. Центрифугируют 5 мин, из полученного осадка готовят препараты для микроскопирования и микроскопируют. Время, затраченное на исследование 45 мин. Пример 3 Санитарно-паразитологическое исследование молока 4-10 жирности, масла, кефира,творога, сыров. Пробу продукта в количестве 10 мл, г помещают в фарфоровую чашку, заливают 0,5 раствором жидкого моющего, жирорастворимого средства в количестве 40 мл,тщательно растирают пестиком и оставляют на 15-20 мин. Надосадочную жидкость с отделившимися возбудителями сливают в чистый стакан. Для осаждения возбудителей в стакан добавляют 5-10 частей дистиллированной или кипяченой воды, размешивают стеклянной палочкой и отстаивают 5 мин. После отстаивания в стакан опускают концентратор гидробиологический 2 на 5 мин (ритмично меняя глубину погружения - вверх, вниз) и исследуют по инструкции. Из осадка готовят препараты для микроскопии и микроскопируют. Время, затраченное на исследование 1 час 10 минут. Проведенные экспериментальные исследования по обнаружению личинок и яиц гельминтов, ооцист и цист простейших в молочных продуктах показали, что при использовании разработанного способа количество обнаруженных яиц гельминтов и ооцист, цист простейших увеличилось в 3,7 раза, т.е. с 30 до 98 экземпляров. Данные приведены в таблице. Паразитарные агенты Количество экземпляров паразитарных агентов в одной пробе Способ-прототип Предлагаемый способ Яйца аскариды 30 98 Цисты лямблий 0 96,8 Ооцисты криптоспоридий 0 96 Предлагаемый способ испытан лабораторно и одобрен Министерством здравоохранения Республики Беларусь (2005 г.) Источники информации 1. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. - М. Колос, 1984. - С. 94-95. 2. Проблемы инфекционной патологиивека Материалы юбилейной конференции, посвященной 80-летию НИИЭМ. - Минск, 2004. - С. 142-143. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3