Штамм бифидобактерий Bifidobacterium bifidum, используемый для получения пробиотического препарата или кисломолочного продукта
Номер патента: 15124
Опубликовано: 30.12.2011
Авторы: Сидоренко Анастасия Вячеславовна, Книрель Юрий Александрович, Новик Галина Ивановна
Текст
(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ШТАММ БИФИДОБАКТЕРИЙ,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ИЛИ КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт микробиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Сидоренко Анастасия ВячеславовнаНовик Галина ИвановнаКнирель Юрий Александрович(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт микробиологии Национальной академии наук Беларуси(56)2165454 1, 2001.2261908 1, 2005.2260042 2, 2005.2184146 1, 2002.2152993 1, 2000. НОВИК Г.И. и др. Микробные биотехнологии фундаментальные и прикладные аспекты. - Сб. научн. трудов. Т.1. - Минск, 2007. - С. 305-313... . - 2007. - . 4. - . 1147-1157... . - 1998. - . 5. - . 759-768.(57) Штамм бифидобактерийБИМ В-465-Д, обладающий высокой кислотоустойчивостью, используемый для производства пробиотического препарата или кисломолочного продукта. Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и представляет собой штамм бифидобактерий, обладающий высокой кислотоустойчивостью, используемый для получения пробиотического препарата или кисломолочного продукта. Бактерии родашироко используются в качестве основы пробиотических препаратов и диетических продуктов питания, предназначенных для лечения и профилактики дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта, стимуляции иммунной системы и нормализации обмена веществ 1, 2, 3. Для оказания желаемого позитивного действия бифидобактерии должны сохранять жизнеспособность и биологические свойства(способность к адгезии, антагонистическая активность, антибиотикоустойчивость и т.д.) в процессе производства и хранения пробиотических препаратов и продуктов питания, а также во время прохождения через желудочно-кишечный тракт 1, 4, 5. Основной причиной низкой жизнеспособности бактерий родапри хранении в сквашенном молоке и питательных средах является чувствительность данных микроорганизмов к низким значениям 1, 4, 6. Наиболее повреждающим фактором, приводящим к гибели бифидобактерий во время прохождения через желудочно-кишечный тракт, является кислотный стресс (действие экстремально низких значенийжелудочного сока) 4, 5, 7, 8. Исходя из этого, важным свойством пробиотических штаммовявляется устойчивость к действию низких значений 1, 4-8. 15124 1 2011.12.30 Известны штаммы бифидобактерий 1 9,ЛВА-3,791 10, которые широко используются для производства пробиотических препаратов и кисломолочных продуктов. Недостатками перечисленных штаммов являются низкая протеолитическая активность, медленное развитие в молоке без ростовых факторов, высокая чувствительность к стрессовым факторам (действие низких значений , кислорода и высоких концентраций хлорида натрия). Медленное развитие в молоке затрудняет использование данных культур в качестве основы кисломолочных продуктов. Низкая стрессоустойчивость приводит к значительной потере жизнеспособности и биологической активности бифидобактерий в процессе хранения пробиотических препаратов и продуктов, а также при прохождении через желудочно-кишечный тракт. Наиболее близким из аналогов заявляемого изобретения является штамм 791 БАГ 11 (прототип), используемый для получения жидкого концентрата бифидобактерий, кисломолочных лечебно-диетических продуктов и биологически активных добавок. Штамм 791 БАГ устойчив к повреждающим факторам сред культивирования и агрессивных сред желудочно-кишечного тракта человека,антагонистически активен в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Недостатками данного штамма являются неспособность к росту при низкихсреды культивирования, недостаточная устойчивость к кислотному стрессу и действию низкихпри хранении в сквашенном молоке и питательных средах без нейтрализации,медленное развитие в молоке без добавления ростовых факторов. Целью данного изобретения является получение нового штамма бифидобактерийБИМ В-465-Д, обладающего высокой кислотоустойчивостью, способного к развитию при низкихсреды культивирования, сохраняющего жизнеспособность в условиях кислотного стресса и при хранении в сквашенном молоке и питательных средах без нейтрализации, активно развивающегося в молоке без добавления ростовых факторов. Для получения штаммаБИМ В-465-Д была проведена селекция штамма-20, выделенного из пробиотического препарата. Селекция проводилась без использования химических и физических мутагенных факторов и генноинженерных методов посредством длительной адаптации штамма к низким значениямсреды культивирования. Для культивирования бифидобактерий использовали модифицированную среду МРС 12 следующего состава (г/л) пептон - 10, мясной экстракт - 10,дрожжевой экстракт - 5, лактоза - 10, глюкоза - 10, 24 - 2, аммоний лимоннокислый - 2,натрий уксуснокислый - 5, 472 - 0,4, 452 - 0,08, -цистеин- - 0,5,твин-80 - 1, агар - 1. Бактерии выращивали при температуре 371 С в течение 18-24 часов. Для получения кислотоустойчивого штаммаБИМ В-465-Д проводили последовательную адаптацию исходного штамма-20 к низким значениямв среде культивирования выше указанного состава в течение 6 месяцев. Начинали адаптацию культивированием бифидобактерий при 5,5, постепенно снижая значениесреды культивирования на 0,2-0,3 единицы до 4,0 с регулярной проверкой устойчивости бифидобактерий к кислотному стрессу. Кислотный стресс моделировали путем инкубации клеток бифидобактерий в 0,5,2.0, при 37 С в течение 120-180 минут 5. Периодичность пересевов составляла 1-2 раза в неделю в зависимости от показателей накопления биомассы и титра клеток. Температура культивирования составляла 371 С. Продолжительность культивирования 24-48 часов. В результате селекции получен кислотоустойчивый штамм бифидобактерийБИМ В-465-Д, способный к росту при низких значенияхсреды культивирования, стабильный при хранении при 4 С в сквашенном молоке в течение 24 суток,в питательной среде без нейтрализации - в течение 70 суток. Штамм сохраняет жизнеспособность в течение 180 мин инкубации при 2,0. Штамм активно развивается в молоке без ростовых факторов, образуя однородный сгусток через 10-12 часов культивирования. 15124 1 2011.12.30 Приобретенные признаки сохранялись при поддержании штамма на питательной среде МРС ( 5,0) при длительном (более 18 месяцев) хранении. Заявляемый штамм депонирован в Белорусской коллекции непатогенных микроорганизмов (Научная коллекция типовых и промышленно-ценных непатогенных микроорганизмов ГНУ Институт микробиологии НАН Беларуси). Таксономическая принадлежность. Штамм был идентифицирован какна основании совокупности морфологических, культуральных и физиологобиохимических признаков, а также данных определения нуклеотидной последовательности гена 16 рРНК. Культурально-морфологические признаки. При посеве в полужидкие (0,2 агара) среды штамм образует прозрачные колонии в виде гвоздиков или комет диаметром 1-2 мм. При глубинном культивировании в жидких питательных средах отмечается рост по всей толще столбика среды за исключением зоны аэробиоза (0,5 см). Клетки штамма представляют собой грамположительные короткие палочки с утолщениями на одном-обоих концах, неспорообразующие, неподвижные. Расположение клеток в мазке парное, - или-образное, часто в скоплениях, реже одиночное. Физиолого-биохимические признаки. Факультативный анаэроб. Каталазу не образует. Желатин не разжижает, нитраты не восстанавливает. Оптимальная температура роста 371 С, оптимум- 5,00,2. Штамм ферментирует глюкозу, лактозу, галактозу, сахарозу, не утилизирует арабинозу, ксилозу, маннозу, мальтозу, раффинозу, трегалозу, маннит,сорбит. Глюкозу ферментирует с образование молочной и уксусной (6,10-6,13 г/л) кислот, без продукции газа. Пигмент не образует. Развитие периодической культурыБИМ В-465-Д в питательной среде МРС характеризуется непродолжительной лаг-фазой (1-2 ч) и длительной стадией экспоненциального роста (2-12 ч). Максимальный титр клеток (2-3)1010, показатели накопления биомассы (ОП 600 2,174-2,196) и активной кислотности ( 3,70,2) регистрируются через 12-18 часов культивирования. Штамм стабилен при хранении при 4 С в питательной среде без нейтрализации в течение 70 суток (время наблюдений). При внесении 5 об.инокулята штамм сквашивает стерильное обезжиренное молоко через 10 часов культивирования при 37 С с образованием нежного однородного сгустка без отделения сыворотки с характерным кисломолочным запахом и вкусом. Титр клеток и показатель активной кислотности на момент образования сгустка составляют (4-6)109 КОЕ/мл и 4,50,2 соответственно. Количество жизнеспособных клеток через 24 дня (время наблюдений) хранения в сквашенном молоке при 4 С составляет (2-5)109 КОЕ/мл. Для сравнения, штамм-прототип сквашивает стерильное обезжиренное молоко без добавления ростовых факторов через 21 час культивирования при титре клеток (1-2)1010 КОЕ/мл. Через 30 дней хранения в сквашенном молоке при 4 С количество жизнеспособных клеток штамма-прототипа снижается до (1-2)108 КОЕ/мл. Заявляемый штамм характеризуется низкой -галактозидазной активностью(0.00230.0006 ед/мл при выращивании на глюкозе и 0,01500,0035 ед/мл при выращивании на лактозе) и высоким уровнем продукции протеолитических ферментов (355,68,6 ед/мл при 7.0). Кислотоустойчивый штамм характеризуется более высокими, чем исходный штамм,коэффициентами гидрофобности и аутоаггрегации (табл. 1). Таблица 1 Свойства клеточной поверхности бифидобактерий.791 БАГ н.д. н.д. н.д. н.д. н.д. Примечание ,- коэффициент гидрофобности поверхности клетки 3,- коэффициент, характеризующий способность клеток к аутоагрегации н.д. - данные отсутствуют. Молекулярно-биологические признаки. Штамм не содержит экстрахромосомной (плазмидной) ДНК. Маркерными признаками, отличающими штамм .БИМ В-465-Д от исходного штамма .-20 и штамма-прототипа .791 БАГ, являются низкое оптимальное значениесреды культивирования (5,00,2 по сравнению с 7,2-7,4) высокая устойчивость к кислотному стрессу устойчивость к тепловому стрессу и высоким концентрациям хлорида натрия стабильность при хранении при 4 С в сквашенном молоке и питательной среде без нейтрализации в течение 24 и 70 суток соответственно активное развитие в стерильном обезжиренном молоке без добавления ростовых факторов. Биотехнологическая характеристика. Технологичность заявляемого штамма обусловлена его высокой устойчивостью к стрессовым факторам и способностью к росту при низких значенияхсреды культивирования (табл. 2, 3, фигура), а также стабильностью при хранении в сквашенном молоке и питательных средах без нейтрализации. Выживаемость штамма в условиях кислотного стресса составляет 94,02,6 , что на несколько порядков превышает показатель, характерный для исходного штамма. В опытахБИМ В-465-Д устойчив к тепловому стрессу (прогревание при 65 С в течение 15 мин) и присутствию в среде культивирования 3 хлорида натрия,увеличение концентрациидо 4 приводит к снижению показателя накопления биомассы в 2 раза. Таблица 2 Устойчивость бифидобактерий к кислотному и тепловому стрессу Титр клеток,рН 2.0 65 С КОЕ/мл 0 мин 180 мин.791 БАГ н.д. н.д. н.д. н.д. н.д. н.д. Примечание- выживаемость, рассчитанная как (КОЕ/мл)/ (КОЕ/мл)0100 ,где (КОЕ/мл) - титр клеток после стрессового воздействия, (КОЕ/мл)0 - исходный титр клеток н.д. -данные отсутствуют. Таблица 3 Устойчивость бифидобактерий к хлориду натрия Концентрация ,0 2 3 4 5 6 7 8 ОП 600 2,106 1,689 1,598 1,103 0,741 0,342 0,195 0,136.791 БАГ ОП 600 н.д. н.д. н.д. н.д. н.д. н.д. н.д. н.д. Примечание- процент от показателя накопления биомассы в контроле н.д. - данные отсутствуют Штамм Как видно из данных, представленных на фигуре, показатели накопления биомассы и титра жизнеспособных клеток, полученные при культивировании .БИМ В-465-Д 4 15124 1 2011.12.30 в среде МРС,5.0, были незначительно выше по сравнению с показателями, полученными при выращивании данного штамма в среде МРС,6,8. Исходный штамм .-20 характеризовался низкой активностью роста при 5,0. Способность к росту при низкихсреды культивирования является уникальным свойством заявляемого штамма,нехарактерным для культур бифидобактерий, выделенных из природных источников. Стабильность сохранения полезного свойства. Приобретенные признаки сохранялись при поддержании штамма на типовой питательной среде МРС ( 5,0) при длительном(более 18 месяцев) хранении. Штамм устойчив к хлорамфениколу, линкомицину, цефалексину, фурадонину, чувствителен к ампициллину, эритромицину, доксициклину (табл. 4). Таблица 4 Сравнительные данные об антибиотикоустойчивости штаммов .БИМ В-465-Д, .-20 и .791 БАГ Штамм .БИМ В-465-Д.791 БАГ Минимальная ингибирующая концентрация, мкг/мл Антибиотик Ампициллин 0.4 0.3 0.5 Хлорамфеникол 2.0 2.5 1.0 Эритромицин 0.1 0.2 н.д. Линкомицин 10.0 10.0 н.д. Доксициклин 0.75 0.75 н.д. Цефалексин 15.0 12.5 н.д. Нитрофуран 150 150 н.д. Примечание н.д. - данные отсутствуютБИМ В-465-Д антагонистически активен в отношенииБИМ В-108, БИМ В-169,БИМ В-25, БИМ В-276,БИМ В-238, БИМ В-379,БИМ В-153, БИМ В-155, БИМ В-157 и не ингибирует роста. БИМ В-246,БИМ В-447. Штамм непатогенен, нетоксигенен. Сведения о консервации штамма. Лиофилизация. Лиофилизации подвергают физиологически активную культуру .БИМ В-465-Д 3-й генерации. Штамм выращивают в питательной среде МРС при 37 С в течение 18-20 часов (до достижения ранней стационарной стадии роста). Клетки осаждают центрифугированием (10000 об/мин, 10 мин), отмывают от ростовой среды и суспендируют в криозащитной среде (2/3 от исходного объема суспензии). В качестве защитной среды используют стерильное обезжиренное молоко(10 обсухих веществ). Полученную суспензию асептически разливают по 0,2 мл в стерильные ампулы для лиофилизации, замораживают до -5055 С, высушивают из замороженного состояния под вакуумом при -55 С в течение 5 часов, после чего дополнительно досушивают под вакуумом при 20 С в течение 2,5 часов. Количество жизнеспособных клеток в содержимом ампулы составляет 6-8109 КОЕ. Ампулы с лиофильно-высушенной биомассой хранят при 4 С. Криоконсервация. Криоконсервации подвергают физиологически активную культуру .БИМ В-465-Д 3-й генерации. Штамм выращивают в питательной среде МРС при 37 С в течение 18-20 часов (до достижения ранней стационарной стадии роста). Клетки осаждают центрифугированием (10 000 об/мин, 10 мин), отмывают от ростовой среды и суспендируют в криозащитной среде (2/3 от исходного объема суспензии). В качестве криозащитной среды используют стерильную питательную среду МРС. Полученную суспензию асептически разливают по 1 мл в стерильные криопробирки и замораживают при -70 С или -196 С. Титр клеток в содержимом криопробирки составляет(1-2)1010 КОЕ/мл. Криопробирки с замороженной биомассой хранят при -70 С. 5 15124 1 2011.12.30 Технологичность и уникальные свойства заявляемого штамма наглядно иллюстрируют следующие примеры. Пример 1. Развитие и сохранность бифидобактерий в молоке. 5 об.физиологически активной культуры .БИМ В-465-Д вносят в стерильное обезжиренное молоко без ростовых факторов. Культивируют при 371 С в течение 10-12 часов. После образования плотного однородного сгустка молоко достают из термостата, охлаждают и хранят в холодильнике при 4 С. Из данных, представленных в табл. 5, видно, что заявляемый штамм сквашивает стерильное обезжиренное молоко через 10 часов культивирования, а штамм-прототип - через 21 час. Титр клеток .БИМ В-465-Д на момент образования сгустка составляет(4-6)109 КОЕ/мл, а титр клеток .791 БАГ - (3-5)1010 КОЕ/мл. В то же время титр клеток заявляемого штамма при хранении в сквашенном молоке при 4 С достоверно не изменяется в течение 24 дней, а количество жизнеспособных клеток штаммапрототипа через 7 суток снижается на порядок, а через 30 суток - на 2 порядка. Таким образом, заявляемый штамм характеризуется большей активностью развития в молоке по сравнению со штаммом-прототипом, а также большей устойчивостью к действию низкихи других неблагоприятных факторов при хранении в сквашенном молоке при 4 С. Таблица 5 Сравнительная характеристика активности развития и сохранности штаммов .БИМ В-465-Д и .791 БАГ в молоке Титр клеток при хранении, КОЕ/мл Время,ч 0 сут 7 сут 12 сут 18 сут 24 сут 30 сут 9 9 Пример 2. Изучение длительности хранения .БИМ В-465-Д при 4 С в питательной среде. Серьезной проблемой, возникающей при хранении культур бифидобактерий в питательной среде при 4 С, является высокая активная кислотность среды, приводящая к потере жизнеспособности данных микроорганизмов. Из литературных данных известно, что титр клеток бифидобактерий может снижаться на несколько порядков в течение 1-2 недель хранения. Наиболее часто для повышения жизнеспособности клеток бифидобактерий в процессе хранения проводят искусственную коррекцию активной кислотности среды до 7.0, используя 10 раствор соды. В свою очередь, нейтрализация среды 10 раствором 3 - трудоемкий процесс, повышающий вероятность контаминации культуры. Указанная проблема решается селекцией кислотоустойчивого штамма бифидобактерий,стабильного при хранении при 4 С в питательной среде без нейтрализации. Анализ полученных данных показал, что при культивировании в среде МРС заявляемый штамм характеризуется активным накоплением биомассы и жизнеспособных клеток(2-3)1010 КОЕ/мл в течение первых 12-18 часов культивирования. Штамм-прототип при выращивании на гидролизатно-молочной среде (ГМС) накапливает максимальное количество жизнеспособных клеток (3-5)1010 КОЕ/мл к 16-18 часам культивирования. Как видно из данных, суммированных в табл. 6, при хранении в питательной среде без нейтрализации титр клеток .БИМ В-465-Д незначительно снижается через 6 недель хранения, а титр клеток .791 БАГ - через 5 недель. 6 15124 1 2011.12.30 Таблица 6 Жизнеспособность штаммов .БИМ В-465-Д и .791 БАГ при хранении при 4 С в питательной среде без нейтрализации Время храКоличество жизнеспособных клеток, КОЕ/мл нения 0 2 нед 4 нед. 5 нед. 6 нед. 8 нед. 10 нед. Штамм(3-5)1010 31010 21010 8109 5109 н.д. н.д. 791 БАГ Примечание н.д. - данные отсутствуют. Данные, приведенные в примерах 1 и 2, свидетельствуют о высокой кислотоустойчивости заявляемого штамма и его перспективности для использования при производстве бифидосодержащих продуктов с длительным сроком хранения без нейтрализации активной кислотности среды щелочными агентами. Пример 3. Исследование антагонистической активности бифидобактерий. Важным свойством пробиотических штаммов бифидобактерий является высокая антагонистическая активность по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам и отсутствие антагонизма с представителями нормальной микрофлоры желудочнокишечного тракта. Из данных, представленных в табл. 7, видно, что заявляемый штамм проявлял высокий уровень антагонизма по отношению к культурамБИМ В-108,БИМ В-25,БИМ В-238, БИМ В-379,БИМ В-153, БИМ В-155, был умеренным антагонистом в отношенииБИМ В-169,БИМ В-276,БИМ В-157, не ингибировал роста. БИМ В-246 иБИМ В-447. Таблица 7 Антагонистическая активность бифидобактерий Тест-культура.-20 В-465-Д 791 БАГ Зона подавления роста, ммБИМ В-108 16 16 н.д.БИМ В-169 2 2 н.д.БИМ В-25 20 20 н.д.БИМ В-276 6 6 н.д.БИМ В-238 15 15 н.д.БИМ В-379 20 20 н.д.БИМ В-153 25 20 н.д.БИМ В-155 20 20 н.д.БИМ В-157 3 3 н.д.. БИМ В-246 н.д.БИМ В-447 н.д. Примечание (-) - отсутствие зоны подавления роста тест-культуры н.д. - нет данных. Таким образом, заявляемый штамм обладал высокой антагонистической активностью по отношению к условно-патогенным микроорганизмам и не подавлял роста представителей нормальной микрофлоры, что говорит о его перспективности для использования в качестве основы пробиотических препаратов, предназначенных для лечения и профилактики дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта. 7 15124 1 2011.12.30 Пример 4. Определение устойчивости бифидобактерий к кислотному стрессу. 1 мл физиологически активной 18-часовой культуры бифидобактерий, выращенной в среде МРС ( 5,0) при 37 С, осаждают центрифугированием (10 мин, 10000 об/мин). Клеточный осадок дважды промывают равным объемом физиологического раствора и ресуспендируют в 10 мл 5,2,0. Инкубируют при 37 С в течение 180 мин, после чего определяют титр клеток бифидобактерий и их биологические свойства. Известно, что для оказания желаемого позитивного действия бифидобактерии должны сохранять жизнеспособность при действии стрессовых факторов желудочно-кишечного тракта, наиболее повреждающим из которых является экстремально низкое значениежелудочного сока. В целом бифидобактерии характеризуются высокой чувствительностью к кислотному стрессу, поэтому для повышения жизнеспособности данных микроорганизмов при действии низкихиспользуют разнообразные приемы, в частности иммобилизацию и инкапсулирование клеток, добавление различных защитных агентов и т.д. Эффективным подходом к увеличению выживаемости бифидобактерий при действии экстремально низкихявляется селекция кислотоустойчивых штаммов. Как видно из данных, представленных в табл. 8, заявляемый штамм сохранял жизнеспособность и биологически важные свойства через 180 мин инкубации при 2,0. Таблица 8 Жизнеспособность и биологические свойства .БИМ В-465-Д после действия кислотного стресса 1. Жизнеспособность бифидобактерий после действия кислотного стресса Титр клеток, КОЕ/мл Активность роста в среде МРС, 24 часа 0 мин 180 мин ОП 600 КОЕ/мл ксилоза арабиноза манноза мальтоза трегалоза маннит 3. Антагонистическая активность Тест-культура мм Тест-культура ммБИМ В-108 16 БИМ В-169 2 БИМ В-25 20 БИМ В-276 6 БИМ В-238 15 БИМ В-379 20 БИМ В-153 25 БИМ В-155 20. БИМ В-246 БИМ В-447 Таким образом, заявляемый штамм бифидобактерий по сравнению со штаммом-прототипом имеет следующие преимущества способен к развитию при низкихсреды культивирования, более высокая жизнеспособность при хранении при 4 С в сквашенном молоке и питательной среде без нейтрализации, высокая устойчивость к кислотному стрессу, активное развитие в молоке без добавления ростовых факторов. Перечисленные свойства, а также высокий уровень антагонизма и отсутствие в клетках экстрахромосомной ДНК делают штамм биотехнологически ценным. Заявляемый штамм является перспективным для производства пробиотических препаратов и диетических кисломолочных продуктов. Источники информации 1. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т.Пробиотики и функциональное питание. - М. Издательство ГРАНТЪ, 2001. - 288 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 9
МПК / Метки
Метки: пробиотического, bifidum, получения, бифидобактерий, или, продукта, штамм, препарата, кисломолочного, bifidobacterium, используемый
Код ссылки
<a href="https://by.patents.su/9-15124-shtamm-bifidobakterijj-bifidobacterium-bifidum-ispolzuemyjj-dlya-polucheniya-probioticheskogo-preparata-ili-kislomolochnogo-produkta.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Штамм бифидобактерий Bifidobacterium bifidum, используемый для получения пробиотического препарата или кисломолочного продукта</a>
Предыдущий патент: Способ тренировки, улучшающий кровоснабжение фаланг пальцев рук
Следующий патент: Штамм бактерий Lactobacillus plantarum БИМ В-492 Д для получения пробиотического препарата для животных
Случайный патент: Кабина транспортного средства