Штамм бактерий Lactobacillus plantarum БИМ В-492 Д для получения пробиотического препарата для животных

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ШТАММ БАКТЕРИЙБИМ В-492 Д ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт микробиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Найденко Инна Александровна Денисенко Вера Витальевна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт микробиологии Национальной академии наук Беларуси(56)2054478 1, 1996.3181 1, 1999.2247148 2, 2005.2316586 2, 2008.2154102 2, 2000.7381406 2, 2008. ДЕНИСЕНКО В.В. и др. Микробные биотехнологии фундаментальные и прикладные аспекты Сборник научных трудов. Т. 1. - Минск, 2007. - С. 233241.(57) Штамм бактерийБИМ В-492 Д для получения пробиотического препарата для животных. Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, может быть использовано для получения нового бактериального пробиотического препарата для животных и касается нового штамма-пробиотика. Бактерии-пробиотики улучшают состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта,предотвращают диарею, ингибируют рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в кишечнике. В настоящее время в литературе имеются сведения о пробиотических свойствах микроорганизмов различных таксономических групп, однако при выборе штаммов-пробиотиков предпочтение традиционно отдается молочнокислым бактериям рода , поскольку именно они являются представителями нормальной микрофлоры многих видов животных, присутствуют во всех отделах желудочно-кишечного тракта, их применение безопасно, не вызывает осложнений и побочных эффектов 1, 2. Известны пробиотические штаммы-16 3 и-01 4, используемые для животных и обладающие антагонистической активностью в отношении ряда патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Недостатками указанных штаммов являются потребность в дорогих стандартных питательных средах, низкая желчеустойчивость, не приведены данные о спектре сбраживания сахаров. Наиболее близким по технической сущности к изобретению является пробиотический штамм для сельскохозяйственных животныхБТ-24/88 5. Штамм 15103 1 2011.12.30 обладает антагонистической активностью против условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, устойчив к желчи и некоторым антибиотикам. Недостатками прототипа являются отсутствие антагонистической активности в отношении ряда бактерий - возбудителей инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных, узкий спектр ферментируемых углеводов, потребность штамма в дорогостоящей питательной среде на основе молока. Кроме того, отсутствуют сведения о кислотоустойчивости штамма, устойчивости к действию пищеварительных ферментов. Задачей настоящего изобретения является поиск штамма, способного расти на дешевых питательных средах на основе промышленных отходов и обладающего широким спектром антагонистической активности против патогенных и условно-патогенных микроорганизмов - возбудителей кишечных инфекционных заболеваний, устойчивого к кислой среде желудка, солям желчных кислот, пищеварительным ферментам, антибиотикам,способного утилизировать широкий спектр углеводов, пригодного для использования для сельскохозяйственных животных. Предлагаемый штаммБИМ В-492 Д выделен из силоса овсяницы тростниковой. Штамм депонирован в Белорусской коллекции непатогенных микроорганизмов. Морфологические и культуральные свойства штамма. Клетки штамма представлены грамположительными короткими палочками размером 0,7-0,81,0-1,1 мкм, расположенными одиночно, парами или в коротких цепочках. Неподвижны, спор не образуют. Для штамма характерен равномерный рост по уколу в агаризованной среде, типичные глубинные колонии, слабый поверхностный рост или его полное отсутствие. Физиолого-биохимические признаки. Штамм аэротолерантен, характеризуется бродильным типом метаболизма углеводов с образованием кислых продуктов, отсутствием цитохромсодержащих дыхательных систем. Реакция на каталазу и нитратредуктазу отрицательная, аргинин не гидролизует, газ из глюкозы не образует. Культивируют штамм на среде 6 в течение 18-24 ч. Оптимум температуры роста 28-30 С, растет при 10 С, но не при 45 С. Хорошо растет в интервале 5,0-7,0, характерно наличие роста при 4,5, но не при 9,0. Особенности штамма. Штамм антагонистически активен по отношению к таким патогенным микроорганизмам - возбудителям болезней сельскохозяйственных животных, как,,,,., ., а также патогенному серотипу . . Штамм ферментирует широкий спектр углеводов глюкозу, галактозу, лактозу, сахарозу,фруктозу, маннозу, рамнозу, рибозу, маннитол, сорбитол, целлобиозу, мальтозу, меллибиозу,трегалозу, мелецитозу, раффинозу, гентибиозу, туранозу, глюконат, салицин, эскулин. Основным продуктом сбраживания глюкозы является молочная кислота, в незначительных количествах образует уксусную кислоту и этанол. Предлагаемый штамм является кислотоустойчивым, в течение 90 мин практически полностью сохраняя жизнеспособность при 2,2, устойчив к действию пепсина и трипсина. Штамм желчеустойчив, культура хорошо растет на средах, содержащих 1 солей желчных кислот. Штамм проявляет устойчивость к левомицетину, доксициклину, цефазолину, стрептомицину. Чувствителен к ампициллину и эритромицину. Штамм хорошо растет на средах, содержащих отходы пищевой промышленности молочную сыворотку, свекловичную мелассу титр жизнеспособных клеток при росте на указанных средах достигает 4,3109 - 1,01010 КОЕ/мл,3,98-4,08. 2 15103 1 2011.12.30 Штамм непатогенен, безвреден, что позволяет использовать его в микробиологической промышленности. Получение технического результата обусловлено комплексом свойств предлагаемого штамма. Пример Получение пробиотического препарата на основе штамма .БИМ В-492 Д. Для приготовления препарата готовили жидкую питательную среду на основе молочной сыворотки (2 ) и кукурузного экстракта (1 ). Среду стерилизовали 30 мин при 1 атм., охлаждали до 28-30 С и вносили инокулят штамма .БИМ В-492. Культивирование проводили в течение 24 часов при 28 С. Полученная культуральная жидкость является пробиотическим препаратом. В опытах на молодняке сельскохозяйственных животных и птицы показано, что выпаивание животным пробиотического препарата на основе предлагаемого штамма позволяет снизить заболеваемость телят и поросят инфекционными заболеваниями (энтеритом), сократить длительность болезни, повысить сохранность поголовья, а также дополнительно получить прирост живой массы и повысить яйценоскость кур. Таким образом, преимуществом предлагаемого штамма по сравнению с известными является комплекс свойств, а именно широкий спектр антагонистической активности в отношении бактерий - возбудителей кишечных инфекционных заболеваний у животных,широкий спектр сбраживания углеводов, устойчивость к действию соляной кислоты желудка, пищеварительным ферментам, некоторым антибиотикам, способность к росту на средах, содержащих желчные кислоты, предлагаемый штамм технологичен, так как хорошо растет на питательных средах на основе промышленных отходов (молочной сыворотки и свекловичной мелассы). Предлагаемое изобретение расширяет ассортимент штаммов для получения пробиотических препаратов для животных. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3