Способ производства биологически активной добавки (варианты)

(51)23 21/02 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ (ВАРИАНТЫ)(71) Заявитель Научно-производственное республиканское дочернее унитарное предприятие Институт мясо-молочной промышленности Республиканского унитарного предприятия Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по продовольствию(72) Авторы Ласковнева Ольга Владимировна Дудко Наталья Владимировна Сафроненко Людмила Владимировна(73) Патентообладатель Научно-производственное республиканское дочернее унитарное предприятие Институт мясо-молочной промышленности Республиканского унитарного предприятия Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по продовольствию(57) 1. Способ производства биологически активной добавки, отличающийся тем, что включает сбор обезжиренной молочной сыворотки, осветление ее на ультрафильтрационной установке, доведениедо значений, близких к нейтральному, отделение осажденных белков, высокую пастеризацию или стерилизацию, охлаждение до температуры культивирования, раздельное культивирование пробиотических культури, инокулированных в количестве 7 от объема сыворотки, до 3,9-4,4 и конечной концентрации лактобацилл в суспензии не менее 108 КОЕ/мл и смешивание полученных суспензий в соотношении 11. 2. Способ производства биологически активной добавки, отличающийся тем, что включает сбор обезжиренной молочной сыворотки, осветление ее на ультрафильтрационной установке, доведениедо значений, близких к нейтральному, отделение осажденных белков, высокую пастеризацию или стерилизацию, охлаждение до температуры культивирования, раздельное культивирование пробиотических культури, инокулированных в количестве 7 от объема сыворотки, до 3,9-4,4 и конечной концентрации лактобацилл в суспензии не менее 108 КОЕ/мл,смешивание полученных суспензий в соотношении 11 и добавление бифидобактерий видови/или, и/или, и/илив жидком виде или в виде сухого бакконцентрата в расчетном количестве, обеспечивающем содержание бифидобактерий в добавке не менее 107 КОЕ/мл. Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в производстве пробиотических препаратов. Известны биологически активная добавка к пище и способ ее приготовления, предусматривающий приготовление гидролизатной среды на основе гидролизата белкового компонента, введение в гидролизат добавок и суточной культуры микроорганизмов. Белковый компонент подвергают ферментативному гидролизу, смешиванию с уксусной кислотой, кипячению, фильтрации, разведению. Гидролиз проводят в два этапа, один в кислой среде с использованием пепсина, другой в щелочной среде с использованием панкреатина с концентрацией 5-10 г/л. В готовый гидролизат вводят стабилизирующие добавки в количестве не менее 0,59 об. . В приготовленную среду вводят суточную культуру микроорганизмов с, ,(патент 2207019, 2003.) Биологически активная добавка может использоваться в качестве закваски для приготовления оздоровительных продуктов. Известен способ получения биологически активной добавки Милканг, включающий очистку сырья центрифугированием, сорбацию белков на ионообменнике, хроматографическое их разделение, элюирование, определение фракции, диализ и стабилизацию. В качестве сырья используют нативные низкомолекулярные катионные вещества молочного происхождения (молоко, или молозиво, или обезжиренное молоко, или подсырную сыворотку, или творожную сыворотку). Биологически активная добавка может дополнительно содержать лизоцим, панкреатическую РНКазу и полипептиды. Данный способ позволяет получить биологически активную добавку, содержащую в нативном виде ангиогенин, лизоцим, панкреатическую РНКазу и полипептиды, которая обладает ранозаживляющим и общеукрепляющим действием (патент 2183935, 2002). Задачей, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, является получение биологически активной добавки на основе молочной сыворотки, обладающей лечебно-профилактическими свойствами для коррекции микробиоценоза влагалища и кишечника. Поставленная задача решается следующим образом. Молочную сыворотку осветляют на ультрафильтрационной установке УФ-6 и раскисляют 40 раствором гидроокиси натрия до 7,2-7,5, выдерживают 10-15 мин для осаждения белков и фильтруют. Стерилизуют при 1 атм 12-15 мин. Охлаждают до оптимальной температуры и инокулируют 5-7 от объема сыворотки культурами,. Культивируют каждую культуру отдельнопри 37 С до значений 3,9-4,4 ед.при 35 С до тех же значений ед. . Полученные суспензии смешивают в стерильной емкости в соотношении 11 и разливают в стерильные флаконы по 50 или 100 мл, получая таким образом Биосыворотку-. Готовый препарат содержит не менее 108 КОЕ/мл жизнеспособных клеток лактобацилл. Способ производства биологически активной добавки по варианту производится следующим образом. Молочную сыворотку осветляют на ультрафильтрационной установке УФ-6 и раскисляют 40 раствором гидроокиси натрия до 7,2-7,5, выдерживают 10-15 мин для осаждения белков и фильтруют. Стерилизуют при 1 атм 12-15 мин. Охлаждают до оптимальной температуры и инокулируют 5-7 от объема сыворотки культурами,. Культивируют каждую культуру отдельно 2 9182 1 2007.04.30 при 37 С до значений 3,9-4,4 ед.при 35 С до тех же значений ед. . Полученные суспензии смешивают в стерильной емкости в соотношении 11 и вносят бифидобактерии видов си (или) с , и (или) с , и (или)в жидком виде или в виде сухого бакконцентрата в расчетном количестве, обеспечивающем содержание бифидобактерий не менее 107 КОЕ/мл, получая Биосыворотку-. Готовый препарат содержит не менее 108 КОЕ/мл жизнеспособных клеток лактобацилл и не менее 107 бифидобактерий. Известно, что основным представителем вагинальной микрофлоры является палочка Додерлейна, которую в настоящее время отождествляют с видоми другими видами рода . Однако в последние годы все чаще встречаются случаи нарушения нормального состава вагинальной микрофлоры, что выражается в исчезновении активных бактерий-антагонистов и замене их на представителей патогенных и условно-патогенных видов. Причинами дисбактериозов женских гениталий являются острые и хронические гинекологические заболевания в репродуктивном возрасте, возрастные кольпиты и вульвовагиниты, а также поступление в организм антибиотиков, сульфаниламидов и других противомикробных препаратов. Дисбактериоз поддерживает патологические процессы не только в полости влагалища, но и в кишечнике, изменяя нормальную кислую реакцию среды. До последнего времени для санации влагалища применяли различные химические антисептические или антибиотические вещества (фурацилин, риванол, эмульсия синтомицина и др.), действие которых проявляется в равной степени против микроорганизмов как патогенной и условно-патогенной, так и полезной бактериальной флоры. Все это свидетельствует об актуальности применения пробиотических микроорганизмов для восстановления нормальной микрофлоры влагалища и кишечника самостоятельно и после приема фармокопейных препаратов. На основании проведенного скрининга коллекционного фонда промышленно ценных культур молочнокислых бактерий и бифидобактерий отобраны штаммы-пробиотики, способные развиваться в молочной сыворотке в предельно сжатые сроки и иметь достаточно высокий титр жизнеспособных клеток. Молочная сыворотка используется в качестве питательной среды для выращивания микроорганизмов различных групп, так как в ней содержится более 200 жизненно важных и биологически активных веществ, представленных сывороточными белками (лактоглобулином, лактоальбумином, альбумином сыворотки крови, иммуноглобулинами). В сывороточных белках содержатся незаменимые аминокислоты - лизин, фенилаланин, тирозин, цистин. Углеводный состав молочной сыворотки и молока аналогичен моносахариды (глюкоза, галактоза), дисахарид-лактоза и более сложные олигосахариды. Желтовато-зеленый оттенок сыворотки обусловлен наличием рибофлавина. Из органических кислот в ней присутствуют молочная, лимонная, муравьиная, пропионовая из минеральных веществ - калий, магний, кальций, натрий, фосфор, железо. Все это позволяет использовать молочную сыворотку в качестве питательной среды для культивирования микроорганизмов, в том числе пробиотических культур - лактобацилл и бифидобактерий. Данные исследований по отбору штаммов-пробиотиков представлены в табл. 1. Показатели активности роста культур ., . свидетельствуют о достаточно высоком титре клеток как в питательной среде, так и в молочной сыворотке. Используемые штаммы лактобацилл и бифидобактерий обладают высокой антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Кроме того, эти культуры отобраны по резистентности к антибиотикам и устойчивы к амикацину, клиндомицину, гентамицину, рифампицину, левомицитину, линкомицину,тетрациклину и др. Биосыворотка-, содержащая культуры в ., ., предназначена для восстановления микрофлоры полости влагалища. Биосыворотка-, содержащая 3 9182 1 2007.04.30 культуры латобацилл и бифидобактерий, предназначена для приема внутрь для восстановления микрофлоры кишечника. В табл. 2 представлены основные качественные показатели Биосыворотки- и Биосыворотки-. Пример 1. Две колбы, содержащие по 0,5 л осветленной на ультрафильтрационной установке УФ-6 молочной сыворотки, стерилизуют при 1 атм 15 мин. Охлаждают до температуры культивирования (. до 37 С, . до 35 С), инокулируют 7 от объема сыворотки культурами лактобацилл. Термостатируют до интенсивного помутнения культуральной среды до 4,0.соблюдением правил асептики в стерильном стакане смешивают полученные суспензии в соотношении 11, получая таким образом биологически активную добавку Биосыворотка-. Готовый препарат имеет однородную слабовязкую консистенцию, чистый кисломолочный запах, светло-зеленый цвет. В 1,0 мл Биосыворотки- содержится 6,0109 жизнеспособных клеток лактобацилл. Пример 2. Две колбы, содержащие по 0,5 л осветленной на ультрафильтрационной установке УФ-6 молочной сыворотки, стерилизуют при 1 атм 15 мин. Охлаждают до температуры культивирования (. до 37 С, . до 35 С), инокулируют 7 от объема сыворотки культурами лактобацилл. Термостатируют до интенсивного помутнения культуральной среды до 4,0. С соблюдением правил асептики в стерильном стакане смешивают полученные суспензии в соотношении 11, вносят концентрат бифидобактерий видов . и (или) В., и (или) ., и (или) В.е, содержащий в 1 г 1,01011 КОЕ, добавляют в количестве 0,1 г на 1,0 л препарата, получая таким образом Биосыворотку-. Перед внесением бакконцентрат бифидобактерий тщательно растирают в стерильной ступке до однородной массы, добавляя небольшое количество стерильного физраствора. Готовый препарат имеет однородную слабовязкую консистенцию, чистый кисломолочный вкус и запах, светло-коричневый цвет. В 1,0 мл Биосыворотки- содержится 6,0109 КОЕ лактобацилл и 1,0108 бифидобактерий. Пример 3. Биосыворотку- изготавливают аналогичным способом, приведенным в примере 2,с внесением жидкой суспензии бифидобактерий видов . и (или) В. , и(или) ., и (или) В., содержащей в 1 мл 3,0109 КОЕ, добавляют в количестве 10,0 мл на 1,0 л препарата. Готовый препарат имеет однородную слабовязкую консистенцию, чистый кисломолочный вкус и запах, светло-коричневый цвет. В 1,0 мл Биосыворотки- содержится 6,0109 КОЕ лактобацилл и 1,0108 бифидобактерий. Результаты проведенных клинических исследований показали, что биологически активные добавки Биосыворотка- и Биосыворотка- могут применяться как самостоятельно, так и в сочетании с лекарственными препаратами. Самостоятельное применение показано при кольпитах, вызванных патогенной и условно-патогенной микрофлорой (гардинеллы, хламидии, дрожжеподобные грибы). После назначения Биосыворотки- и Биосыворотки- одновременно у 68 обследованных женщин отмечался положительный клинический результат произошло значительное снижение посторонней микрофлоры, исчез зуд, у некоторых произошло полное восстановление микробиоценоза влагалища и кишечника. Биологически активные добавки рекомендованы для массового производства с целью использования их в лечебной практике для коррекции микробиоценоза влагалища и кишечника. Наименование показателей Количество клеток лактобацилл,КОЕ/мл Количество клеток бифидобактерий,КОЕ /мл Активная кислотность, ед. рН Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5