Способ получения стимулятора роста бактерий

(12) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТИМУЛЯТОРА РОСТА БАКТЕРИЙ(71) Заявители Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины Частное производственное унитарное предприятие Витебская биофабрика(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Максимович Владимир Васильевич Дремач Геннадий Эдуардович Кулешова Ирина Петровна Билецкий Олег Романович Ханецкий Юрий Викторович(73) Патентообладатели Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины Частное производственное унитарное предприятие Витебская биофабрика(57) Способ получения стимулятора роста бактерий, включающий приготовление сыворотки крови животных и ее фильтрацию, отличающийся тем, что полученную сыворотку крови разводят дистиллированной водой в объемном соотношении 11, затем обрабатывают аммиаком или гидроокисью натрия и перекисью водорода при температуре 100120 в течение 30-60 минут, при этом компоненты берут в следующем соотношении,мас.аммиак или гидроокись натрия 0,2-0,5 перекись водорода 0,1-0,2 смесь сыворотки и воды остальное.(56) Справочник ветеринарного лаборанта. / Под ред. В.Я. Антонова. - М. Колос, 1981. - С. 45. Проблемы патологии, санитарии и бесплодия в животноводстве Материалы международной научно-практической конференции. - Мн. 1998. - С. 90-91.413192, 1974.699796 , 1985.7335, 1995.2062787 1, 1996.5629468 , 1997.223161 3, 1988.173340 3, 1986. Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для стимуляции роста микроорганизмов. 6293 1 Для стимуляции роста микроорганизмов широко используют нативную сыворотку крови различных животных 1, 2. Однако биопрепараты, изготовленные с использованием нативной сыворотки, обладают высокой реактогенностью. Отдельные партии сывороток содержат ингибиторы и контаминированы различными вирусами. Нативная сыворотка имеет также существенный недостаток в связи с содержанием у значительной части животных, из крови которых она получена, специфических антител,которые изменяют антигенную структуру, снижают иммуногенные свойства бактериальных культур, выращенных на питательных средах с ее добавлением. Задача изобретения - повышение биологической активности и выхода целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что сыворотку крови животных обрабатывают аммиаком или натрия гидроокисью и перекисью водорода при температуре 100-120 С. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что сыворотку крови животных, разведенную дистиллированной водой в соотношении 11 экстрагируют аммиаком или натрия гидроокисью и перекисью водорода при температуре 100-120 С в течение 30-60 минут при следующем соотношении компонентов, вес.аммиак или натрия гидроокись 0,2-0,5 перекись водорода 0,1-0,2 смесь сыворотки и воды остальное. При изготовлении стимулятора роста микроорганизмов используют кровь различных видов животных. Полученные гидролизаты расщелачивают добавлением уксусной или соляной кислоты до рН 6,8-7,4. Сальмонеллы выращивают на бульоне Хоттингера, содержащем 10 стимулятора,полученного разными способами. Пример 1. Сыворотку крови животных разводили дистиллированной водой в соотношении 11. Приготовленную смесь экстрагировали натрия гидроокисью и перекисью водорода при температуре 100 в течение 60 мин при соотношении компонентов, вес.натрия гидроокись 0,2 перекись водорода 0,1 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта составил 86 . Плотность баксуспензии сальмонелл на среде с добавлением 10 стимулятора составила 2,430,12 млрд/см 3. Пример 2. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но при соотношении компонентов,вес.натрия гидроокись 0,4 перекись водорода 0,1 смесь сыворотки и воды остальное. Накопление сальмонелл в присутствии стимулятора составило 2,360,10 млрд/см 3. Выход стимулятора - 85 . Пример 3. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но компоненты смешивали при следующем соотношении, вес.натрия гидроокись 0,5 перекись водорода 0,1 смесь сыворотки и воды остальное. Выход стимулятора - 84 . Накопление сальмонелл в присутствии стимулятора 2,240,9 млрд/см 3. 2 6293 1 Пример 4. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но компоненты смешивали при следующем соотношении, вес.натрия гидроокись 0,1 перекись водорода 0,1 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта - 52 . Накопление сальмонелл - 1,360,08 млрд/см 3. Пример 5. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но компоненты смешивали при следующем соотношении, вес.натрия гидроокись 0,2 перекись водорода 0,2 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта - 84,4 . Накопление сальмонелл -2,410,14 млрд/см 3. Пример 6. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но компоненты смешивали при следующем соотношении, вес.натрия гидроокись 0,2 перекись водорода 0,3 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта - 28,0 . Накопление сальмонелл - 1,420,15 млрд/см 3. Пример 7. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но компоненты смешивали при следующем соотношении, вес.натрия гидроокись 0,6 перекись водорода 0,05 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта - 31,4. Накопление сальмонелл составило 1,180,10 млрд/см 3. Пример 8. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку не разводили водой. Выход целевого продукта составил 8 . Накопление сальмонелл - 1,580,12 млрд/см 3. Пример 9. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку разводили дистиллированной водой в соотношении 12. Выход целевого продукта - 88,6 . Накопление сальмонелл на среде со стимулятором составило 1,620,14 млрд/см 3. Пример 10. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но инкубацию смеси сыворотки и воды осуществляли при температуре 120 в течение 60 мин. Накопление сальмонелл составило 2,460,14 млрд/см 3. Выход целевого продукта - 87,4 . Пример 11. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но инкубацию смеси сыворотки и воды осуществляли при температуре 120 С в течение 30 мин. Накопление сальмонелл на питательной среде в присутствии стимулятора составило 2,180,12 млрд/см 3. Выход целевого продукта - 85,4 . 3 6293 1 Пример 12. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но смесь сыворотки и воды инкубировали при температуре 100 в течение 30 мин. Накопление сальмонелл на питательной среде в присутствии стимулятора составило 2,320,10 млрд/см 3. Выход целевого продукта - 85,1 . Пример 13. Сыворотку крови животных разводили дистиллированной водой 11. Приготовленную смесь экстрагировали аммиаком и перекисью водорода при температуре 120 С в течение 60 мин при соотношении компонентов, вес.аммиак 0,5 перекись водорода 0,2 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта составил - 88,1 . Плотность баксуспензии сальмонелл на питательной среде в присутствии стимулятора составила 2,430,12 млрд/см 3. Пример 14. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но при соотношении компонентов, вес.аммиак 0,5 перекись водорода 0,1 смесь сыворотки и воды остальное. Накопление сальмонелл составило 2,480,18 млрд/см 3. Выход целевого продукта составил 88,5 . Пример 15. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но при соотношении компонентов, вес.аммиак 0,5 перекись водорода 0,05 смесь сыворотки и воды остальное. Накопление сальмонелл составило 1,500,12 млрд/см 3. Выход целевого продукта составил 43,4 . Пример 16. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но при соотношении компонентов, вес.аммиак 0,5 перекись водорода 0,25 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта составил 39,1 . Накопление сальмонелл составило 1,680,14 млрд/см 3. Пример 17. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но при соотношении компонентов, вес.аммиак 0,6 перекись водорода 0,2 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта составил 82 . Стимулятор обеспечивал накопление сальмонелл 1,680,11 млрд/см 3. Пример 18. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но при соотношении компонентов, вес.аммиак 0,2 перекись водорода 0,2 смесь сыворотки и воды остальное. 4 6293 1 Выход целевого продукта составил 76,7 . Стимулятор обеспечивал накопление сальмонелл 2,040,14 млрд/см 3. Пример 19. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но при соотношении компонентов, вес.аммиак 1,0 перекись водорода 0,2 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта - 56,2 . Стимулятор обеспечивал накопление сальмонелл 1,420,11 млрд/см 3. Пример 20. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но при соотношении компонентов, вес.аммиак 0,25 перекись водорода 0,2 смесь сыворотки и воды остальное. Выход целевого продукта составил 75,3 . Стимулятор обеспечивал накопление сальмонелл 2,620,12 млрд/см 3. Пример 21. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но приготовленную смесь инкубировали при температуре 120 в течение 80 мин. Накопление сальмонелл составило 1,540,09 млрд/см 3. Выход целевого продукта составил 50,8 . Пример 22. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но приготовленную смесь инкубировали при температуре 120 С в течение 20 мин. Выход целевого продукта составил 60,2 , а накопление сальмонелл - 1,620,11 млрд/см 3. Пример 23. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но приготовленную смесь инкубировали при температуре 120 С в течение 30 мин. Накопление сальмонелл в присутствии стимулятора составило 2,540,18 млрд/см 3. Выход целевого продукта - 87,8 . Пример 24. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но приготовленную смесь инкубировали при температуре 130 в течение 60 мин. Накопление сальмонелл составило 1,680,14 млрд/см 3. Выход целевого продукта составил 54,1 . Пример 25. Способ осуществляли аналогично примеру 13, но приготовленную смесь инкубировали при температуре 100 в течение 60 мин. Накопление сальмонелл составило 2,520,12 млрд/см 3. Выход целевого продукта составил 43,9 . В результате проведенных исследований установлено, что смесь сыворотки и воды целесообразно инкубировать при температуре 100-120 С в течение 30-60 мин и соотношении компонентов, весаммиак или натрия гидроокись 0,2-0,5 перекись водорода 0,1-0,2 смесь сыворотки и воды остальное. 6293 1 При таких режимах получается стимулятор с высокой биологической активностью(накопление сальмонелл - 2,24-2,54 млрд/см 3, а выход целевого продукта составляет 84,087,8 ). Обработка сыворотки при других изученных режимах снижает биологическую активность или выход целевого продукта. Для культивирования аэробных бактерий в среду добавляют 5-10 стимулятора и анаэробных бактерий - 10-20 . Результаты исследований по оценке влияния стимулятора из нативной сыворотки и предлагаемого стимулятора на интенсивность роста различных бактерий представлены в таблице. Влияние стимулятора на интенсивность роста бактерий Вид микроорганизма Наименование и концентрация сальмонеллы эшерихии бактериоидес рожистые коли назодис бактерии стимулятора Плотность баксуспензии (млрд/см 3) Бульон Хоттин 0,800,08 1,600,11 0,200,04 0,300,05 гера Бульон Хоттингера с 10 -ной 1,300,12 2,200,13 0,80,09 1,100,12 нативной сывороткой Бульон Хоттингера с 5 -ным 1,680,14 2,740,18 1,10,10 1,600,15 предлагаемым стимулятором Бульон Хоттингера с 10 -ным 2,400,14 3,400,18 1,40,10 2,200,14 предлагаемым стимулятором Бульон Хоттингера с 20 -ным 2,200,15 3,440,15 1,50,12 2,220,11 предлагаемым стимулятором Из таблицы видно, что предлагаемый стимулятор обеспечивает более высокую продуктивность бактерий, чем нативная сыворотка. Выход нативной сыворотки из 1 дм 3 сырья составляет 0,8 дм 3, предлагаемого стимулятора - 1,6 дм 3. Источники информации 1. Ветеринарные препараты Справочник / Под ред. Д.Ф. Осидзе. - М. Колос, 1981. С. 448. 2. Справочник ветеринарного лаборанта / Под ред. В.Я. Антонова. - М. Колос, 1981. С. 248. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.