Способ получения питательной среды для выращивания аэробных бактерий

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ(71) Заявители Витебская биофабрика, Витебская государственная академия ветеринарной медицины(57) Способ получения питательной среды для выращивания аэробных бактерий, включающий ферментативный гидролиз форменных элементов и сыворотки крови животных и смешивание полученных гидролизатов,отличающийся тем, что для смешивания используют гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови животных, содержащие 200-250 мги 170-220 мгаминного азота соответственно, в соотношении 75,025,0 для культивирования сальмонелл, эшерихий, стафилококков, стрептококков и диплококков 50,060,040,0-50,0 - для листерий, рожистой палочки, гемофилов, пастерелл, кампилобактерий и 80,020,0 - для бруцелл и гемолитической палочки.(56) 1. Временная инструкция по изготовлению и контролю вакцины против паратифа, пастереллеза и диплококкоза свиней.М., 1968.С. 4-5. 2. Временная инструкция по изготовлению и контролю гидроокисьалюминиевой формол-тиомерсалловой вакцины против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят, ягнят.М., 1987.С. 6-7. 3.1630314, МПК 12 1/20, 1995. Предлагаемое изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к питательным средам для выращивания микроорганизмов. Известны способы приготовления питательных сред для культивирования аэробных бактерий на мясной основе мясопептонный бульон (простой), мясопептонный агар, содержащие, мас.углерод - 18-21, азот 17-21, фосфор 10-12, минеральные вещества 30-35 и другие компоненты 11-25 . Известны питательные среды на минеральной основе среда Матусевича, А-27, А-54 и другие, содержащие мел, сахарозу, аппатит, стеклянную пудру, агар и другие компоненты 2. Включение в состав вышеназванных питательных сред большого количества дорогостоящих компонентов, длительность культивирования, незначительный выход биомассы, большое количество отходов отработанной среды делает невыгодным их промышленное применение. Наиболее близким техническим решением к предлагаемому способу является питательная среда для выращивания белок А продуцирующих бактерий 3 и способ е получения, включающий приготовление ферментативно-кислотного гидролизата форменных элементов крови крупного рогатого скота, приготовление ферментативно-кислотного гидролизата сыворотки крови крупного рогатого скота, их осветление, разведение водой до определенного содержания аминного азота, смешивание в соответствующих соотношениях,стерилизацию, добавление этанола и глюкозы. Такой способ обеспечивает получение достаточно эффективной питательной среды, позволяющей значительно повысить накопление бактериальной массы. 3058 1 Однако и этот способ не лишен недостатков высокое содержание в получаемой питательной среде гемпигментов-ингибиторов роста микроорганизмов, высокое содержание в ней ионов хлора, аммиака и гуминовых веществ (40-45 мг ) - ингибиторов метаболизма, недостаточно высокий выход целевого продукта. Задача изобретения - упрощение и удешевление способа, повышение биологической активности и выхода целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что приготовленные ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки смешивают в необходимых соотношениях и стерилизуют. Сущность предлагаемого способа получения питательной среды для выращивания аэробных бактерий заключается в том, что смешивают ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови животных, содержащие 200-250 мги 170-220 мгаминного азота соответственно, в соотношении 75,025,0 для культивирования сальмонелл, эшерихий, стафилококков, стрептококков и диплококков 50,060,040,0-50,0 - для листерий, рожистой палочки, гемофилов, пастерелл, кампилобактерий и 80,020,0 - для бруцелл и гемолитической палочки. Для приготовления ферментативного гидролизата форменных элементов крови (компонент А) сначала готовят ферментационную смесь, используя воду и форменные элементы крови животных в соотношении по объму 41, вводят добавки гидрокарбоната натрия 8-10 г/л, панкреатина 30 г/л, хлороформа 12 см 3/дм 3, перемешивают в течение 1 часа и осуществляют ферментацию 24-48 часов. Надосадочную часть жидкости декантируют, прогревают 20-30 минут при 115-120 С, охлаждают, центрифугируют. Для приготовления ферментативного гидролизата сыворотки крови (компонент Б), воду и сыворотку закачивают в ферментер в соотношении 11, проводят ферментолиз в течение 48-72 часов при температуре 40-45 С и периодическом перемешивании. Затем закисляют, добавляя уксусную или соляную кислоту, до рН 7,2-7,5. Для приготовления питательной среды смешивают гидролизат форменных элементов крови животных с содержанием аминного азота 200-250 мги гидролизат сыворотки крови животных с содержанием аминного азота 170-220 мгв количественном соотношении (об. ) для культивирования сальмонелл, эшерихий,стафилококков, стрептококков - 75,025,0 листерий, рожистой палочки, пастерелл, кампилобактерий - 50,060,040,0-50,0, гемолитической палочки и бруцелл - 80,020,0. Пример 1. Приготовление компонента А. Готовят ферментационную смесь, для чего закачивают в ферментер определенный объем водопроводной воды и добавляют форменные элементы крови животных в соотношении 41. Добавляют 8-10 г/л гидрокарбоната натрия, 30 г/дм 3 панкреатина, хлороформ - 12 см 3/дм 3 и перемешивают в течение 1 часа. Ферментацию ведут 24-48 часов при 38-45 С, периодически перемешивая. Надосадочную часть жидкости декантируют, прогревают при 115-120 С 20-30 минут, охлаждают и центрифугируют. Пример 2. Приготовление компонента Б. В ферментер закачивают водопроводную воду, добавляют хлороформ - 24-30 см 3/дм 3, панкреатин - 80 г/дм 3 , гидрокарбонат натрия - 14-15 г/дм 3, перемешивают в течение 20-30 минут. Затем закачивают в ферментер сыворотку в соотношении 11 к объему ферментационной смеси и нагревают до 40-45 С. Ферментолиз ведут при этой температуре в течение 48-72 часов до определенного содержания аминного азота в переваре. Смесь закисляют добавлением уксусной или соляной кислоты до рН 7,2-7,5. Пример 3. Приготовление жидкой питательной среды. Компоненты А и Б, каждый в отдельности, разводят водопроводной водой до определенного содержания аминного и общего азота, смешивают в соответствующем соотношении, стерилизуют при 115-120 С в течение 4045 минут и используют для культивирования микроорганизмов. Пример 4. Приготовление обезвоженных компонентов А и Б. Компоненты А и Б, каждый в отдельности, упаривают при пониженном атмосферном давлении (0,080,09 МПа) при температуре 75-80 С до содержания сухих веществ в концентрате 15-20 . Концентраты, осветленные путем фильтрации через картон фильтровальный для пищевых жидкостей ГОСТ 12290-80, нагревают до температуры 75-80 С и подают с помощью сжатого воздуха на распылительное устройство сушилки. Продукт сушат при температуре входящего воздуха 115-160 С и выходящего воздуха 80-85 С. Сухой продукт фасуют в двойные полиэтиленовые мешки или стеклянные банки. Для приготовления из сухих компонентов А и Б жидкой формы готовят 2 растворы, смешивая их в определенных соотношениях. Проведенные эксперименты показывают (табл. 1), что предлагаемая питательная среда при определенных соотношениях компонентов А и Б пригодна для культивирования разнообразных бактериальных культур. 3058 1 Таблица 1 Оптимальное соотношение компонентов А и Б Накопление биомассы бактерий (млрд/см 3) п 18 гемолит. стрепкампипасте- рожист. кишечлистетококлобакреллы палочка ная парии ки терии лочка 0,80,1 1,80,1 4,90,2 2,90,2 0,80,1 0,90,1 0,60,1 1,20,1 4,90,2 2,80,2 0,40,1 0,60,1 0,50,1 0,80,1 4,20,2 2,80,2 0,30,1 Из данных таблицы 2 видно, что культурально-морфологические, биохимические свойства культур микроорганизмов, выращенных на предлагаемой питательной среде, были сходны с таковыми культур микроорганизмов, выращенных на контрольных средах после 5-кратного пассирования. Культуры, выращенные на испытуемых средах, в течение 5 пассажей не диссоциировали. На основании полученных данных были подобраны оптимальные комбинации компонентов А и Б для различных видов микроорганизмов. Таблица 2 Свойства Микроорганизмы Стафилококки Сальмонеллы Кампилобактерии Листерии Стрептококки Гемолитическая кишечная палочка Пастелеллы Рожистая палочка Бруцеллы Примечание- наличие, (-) - отсутствие изменений основных свойств культур микроорганизмов. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.