Питательная среда для культивирования лептоспирозных бактерий и способ ее получения

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ БАКТЕРИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ(57) 1. Питательная среда для культивирования лептоспирозных бактерий, содержащая белковую питательную основу, фосфатно-буферный раствор и воду, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы она содержит 3 -ый щелочной гидролизат казеина и дополнительно - 0,5 аммиачно-перекисный гидролизат торфа в качестве стимулятора роста при следующем соотношении компонентов, об.щелочной гидролизат казеина, 3 -ый 10 аммиачно-перекисный гидролизат торфа, 0,5 -ый 5-10 фосфатно-буферный раствор 10 вода дистиллированная остальное. 2. Способ получения питательной среды для культивирования лептоспирозных бактерий, включающий смешивание компонентов, отличающийся тем, что предварительно инкубируют сухой казеин в водном растворе едкого натра в течение 40-60 минут при температуре 100-120 С и соотношении ингредиентов (вес. ) 10,12-0,15 и обрабатывают торф с влажностью 50 аммиачно-перекисным раствором, содержащим 1,2-1,4 аммиака и 0,5-0,8 перекиси водорода при соотношении ингредиентов 14, после чего смешивают полученные щелочной гидролизат казеина и аммиачно-перекисный гидролизат торфа, добавляют фосфатнобуферный раствор и дистиллированную воду. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что щелочной гидролизат казеина и аммиачно-перекисный гидролизат торфа смешивают в соотношении 11. 4. Способ по п.2, отличающийся тем, что щелочной гидролизат казеина и аммиачно-перекисный гидролизат торфа смешивают в соотношении 12.(56) 1. Инструкция по изготовлению и контролю групповых агглютинирующих лептоспирозных сывороток.М., 1985.С. 10. 2. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины поливалентной ВГНКИ против лептоспироза животных.М., 1992.С. 16. 3. Справочник ветеринарного лаборанта / Под ред. В.Я.Антонова. - М. Колос, 1981. - С. 37. Изобретение относится к области микробиологической промышленности, в частности к производству биологических препаратов против лептоспироза. Известны и широко применяются питательные среды для культивирования лептоспир 1,2,3. Это среды Терских, Уленгута, Любашенко, водно-сывороточная, Ферворта-Вольффа, а также полужидкая среда Флетчера. Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является среда Любашенко 3. Среда содержит в качестве белковой основы инактивированную сыворотку кролика или овец, калий фосфорнокислый однозамещенный и натрий фосфорнокислый двузамещенный в роли фосфатного буфера. 3092 1 Эта питательная среда не обеспечивает достаточно высокого выхода биомассы, имеет недостаточную стандартность свойств из-за различных индивидуальных свойств сыворотки крови животных-доноров, используемых при ее приготовлении, вакцина изготовленная на сывороточной среде обладает побочным действием. Трудоемок также процесс приготовления среды в промышленном масштабе в стеклянных бутылях. Кроме того, стерилизация среды возможна только путем фильтрации через фильтрпластины Ф и СФ дорогостоящий и трудоемкий процесс, не всегда гарантирующий стерильность среды. Задача изобретения - повышение биологической активности питательной среды, упрощение и удешевление способа. Это достигается тем, что питательная среда для культивирования лептоспирозных бактерий содержит в качестве основы щелочной гидролизат казеина и стимулятор роста из торфа. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда для культивирования лептоспирозных бактерий в качестве белковой основы содержит 3 -ый щелочной гидролизат казеина и дополнительно - 0,5 -ый аммиачно-перекисный гидролизат торфа в качестве стимулятора роста при следующих соотношениях компонентов, об.щелочной гидролизат казеина, 3 -ый 10 аммиачно-перекисный гидролизат торфа, 5 -ый 5-10 фосфатно-буферный раствор 10 вода дистиллированная остальное. Способ получения питательной среды для культивирования лептоспирозных бактерий, включающий смешивание компонентов, предусматривающий инкубацию сухого казеина в водном растворе едкого натра в течение 40-60 минут при температуре 100-120 С и соотношении ингредиентов (вес. ) 10,12 - 0,15 и обработку торфа с влажностью 50 аммиачно-перекисным раствором, содержащим 1,2-1,4 аммиака и 0,5-0,8 перекиси водорода при соотношении ингредиентов 14, смешивание полученных щелочного гидролизата казеина и аммиачно-перекисного гидролизата торфа, добавление фосфатно-буферного раствора и дистиллированной воды. Щелочной гидролизат казеина и аммиачно-перекисный гидролизат торфа смешивают в соотношении 11 или 12. Пример 1. Приготовление щелочного гидролизата казеина (ЩГК). 10 г сухого казеина ресуспендируют в 100 см 3 дистиллированной воды, добавляют едкий натр до концентрации 1,2-1,5 . Смесь инкубируют при температуре 100-120 С в течение 40-60 минут. Оптимальные соотношения сухого казеина и едкого натра при гидролизе 10,12-0,15. Гидролизат охлаждают до температуры 1520 С, закисляют до рН 4,6-5,2 50 -ой уксусной кислотой, центрифугируют или отстаивают. Надосадок раскисляют 10 -ым раствором едкого натра до рН 6,8-7,2. Пример 2. Приготовление биогенного стимулятора из торфа (БСТ). 20 г торфа влажностью 50 степенью разложения не менее 20 прогревают при 100-120 С в 80 см 3 аммиачно-перекисного раствора, содержащего 1,2-1,4 аммиака и 0,5-0,8 перекиси водорода, в течение 2 часов. Гидролизат торфа закисляют соляной кислотой до рН 2,0-2,5, прогревают при температуре 90-100 С в течение 20-30 минут и центрифугируют. Надосадок сливают и раскисляют 20 -ым раствором едкого натра до рН 7,0-7,4. Пример 3. Приготовление питательной среды. ЩГК разводят дистиллированной водой до содержания сухих веществ 0,33 , добавляют БСТ до 0,05 . К 9 дм 3 этой смеси добавляют 1 дм 3 фосфатно-буферного раствора. Для приготовления ФБР к 1 дм 3 дистиллированной воды добавляют 20,4 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 2,45 г калия фосфорнокислого однозамещенного и 5 г . Пример 4. Питательную среду для выращивания лептоспир готовят путем смешивания ингредиентов при следующем соотношении, об.щелочной гидролизат казеина, 3 -ый 10 гидролизат торфа, 0,5 -ый 2 фосфатно-буферный раствор 10 вода дистиллированная остальное. Накопление лептоспир составило 40 млн. микробных тел в 1 см 3. Пример 5. Питательную среду готовят аналогично примеру 4, но гидролизат торфа добавляют до содержания (об. ) 5. Накопление лептоспир установлено 100 млн. микробных тел в 1 см 3. Пример 6. Питательную среду готовят аналогично примеру 4, но гидролизат торфа добавляют до содержания (об. ) 10. Концентрация микробных тел лептоспир на данной среде составила 120 млн./см 3. Пример 7. Питательную среду готовили аналогично примеру 4, но гидролизат торфа добавляли до содержания (об. ) 20. Концентрация микробных тел лептоспир на данной среде составила 50 млн./см 3. 2 3092 1 Пример 8. Питательную среду готовят путем смешивания ингредиентов при следующем соотношении,об.щелочной гидролизат казеина, 3 -ый 5 гидролизат торфа, 0,5 -ый 10 фосфатно-буферный раствор 10 вода дистиллированная остальное. Накопление лептоспир - 52 млн. микробных тел в 1 см 3. Пример 9. Питательную среду готовят аналогично примеру 8, но щелочной гидролизат торфа добавляют до содержания (об. ) 15. Накопление лептоспир составило 118 млн./см 3. Пример 10. Питательную среду готовят путем смешивания ингредиентов при следующем соотношении,об.щелочной гидролизат казеина, 3 -ый 10 гидролизат торфа, 0,5 -ый 10 фосфатно-буферный раствор 5 вода дистиллированная остальное. Концентрация микробных тел на данной среде составила 28 млн./см 3. Пример 11. Питательную среду готовят аналогично примеру 10, но добавляют фосфатно-буферный раствор до содержания (об. ) 15. Концентрация микробных клеток на данной среде составила 12 млн./см 3. На жидкой казеиновой среде накопление лептоспир составляло 100-120 млн. микробных тел, в то время как на известной - 60 млн. микробных тел. Таким образом, накопление биомассы лептоспир на предложенной среде в 1,66-2,0 раза выше, чем на известной. Себестоимость предлагаемой среды в 16 раз ниже, чем известной, применяемой в настоящее время для производства противолептоспирозных препаратов. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.