Способ определения фруктозы в йогуртах или пастообразных молочных продуктах на основе творога

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФРУКТОЗЫ В ЙОГУРТАХ ИЛИ ПАСТООБРАЗНЫХ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ НА ОСНОВЕ ТВОРОГА(71) Заявитель Республиканское унитарное предприятие Научно-практический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Белышева Людмила Леонидовна Полянских Елена Ильинична(73) Патентообладатель Республиканское унитарное предприятие Научнопрактический центр гигиены(57) Способ определения фруктозы в йогуртах или пастообразных молочных продуктах на основе творога, при котором осуществляют экстракцию фруктозы из исследуемого образца смесью этанола и воды в соотношении 11 в ультразвуковой бане в течение 15 мин при температуре 50 С, в полученный экстракт последовательно добавляют реактив Карреза ,реактив Каррезаи ацетонитрил, отстаивают в течение 30 мин, фильтруют, в полученном фильтрате определяют количественное содержание фруктозы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием рефрактометрического детектора и рассчитывают массовую концентрацию фруктозы в исследуемом образце. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также к пищевой промышленности. В последние годы значительно расширился ассортимент йогуртов и пастообразных молочных продуктов на основе творога, в рецептуре которых содержится большое количество разных ингредиентов, в том числе углеводов, как за счет отдельно вносимых, так и в смеси с наполнителями на основе плодов и ягод. Необходимо проводить контроль такой продукции по содержанию углеводов. В доступной научно-технической и патентной литературе заявителем ближайший аналог заявляемого способа не выявлен. 18386 1 2014.06.30 Задачей заявляемого изобретения является создание экспресс-способа определения фруктозы в йогуртах и пастообразных молочных продуктах на основе творога с высокой точностью. Поставленная задача достигается следующим способом. Предложен способ определения фруктозы в йогуртах или пастообразных молочных продуктах на основе творога, при котором осуществляют экстракцию фруктозы из исследуемого образца смесью этанола и воды в соотношении 11 в ультразвуковой бане в течение 15 мин при температуре 50 С, в полученный экстракт последовательно добавляют реактив Карреза , реактив Каррезаи ацетонитрил, отстаивают в течение 30 мин, фильтруют, в полученном фильтрате определяют количественное содержание фруктозы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием рефрактометрического детектора и рассчитывают массовую концентрацию фруктозы в исследуемом образце. Заявителем на основании проведенных исследований установлено, что предлагаемые условия осуществления способа позволяют достичь максимального извлечения фруктозы из йогуртов и пастообразных молочных продуктов на основе творога. Пример. Определение фруктозы в йогуртах и пастообразных молочных продуктах на основе творога. 1. Подготовка образцов и проведение анализа. Отбор проб осуществляется согласно ТНПА на конкретную продукцию. Усредненную пробу образца (500-1000) г термостатируют при температуре (202) С в течение 30 мин. Испытуемый образец измельчают с помощью гомогенизатора и тщательно перемешивают. Взвешивают навеску массой (2,0000,001) г и помещают в мерную колбу вместимостью 25 см 3. Приливают 10 см 3 смеси этанол-вода (11) и помещают в ультразвуковую баню на 15 мин при температуре 50 С. Охлаждают до комнатной температуры, добавляют 0,25 см 3 реактива Карреза , встряхивают в течение 1 мин, затем добавляют 0,25 см 3 реактива Карреза , встряхивают в течение 1 мин. После этого приливают 5 см 3 ацетонитрила и доводят объем до метки смесью этанол-вода (11). Колбу закрывают пробкой и оставляют стоять в течение 0,5 ч для осаждения сопутствующих веществ. Затем смесь фильтруют через бумажный фильтр. Отбирают 1 см 3 полученного фильтрата и фильтруют через мембранный фильтр миллипоре с размером пор 0,45 мкм. 2. Приготовление растворов. 2.1. Приготовление реактивов Карреза. Реактив Каррезавзвешивают (106,0000,001) г калия железосинеродистого, растворяют в 200-300 см 3 дистиллированной воды, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см 3 и доводят объем до метки дистиллированной водой. Раствор хранят в склянке из темного стекла не более месяца. Реактив Каррезавзвешивают (220,0000,001) г цинка уксуснокислого, растворяют в 200-300 см 3 дистиллированной воды, добавляют 30 см 3 ледяной уксусной кислоты, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см 3 и доводят объем до метки дистиллированной водой. Раствор хранят в склянке из темного стекла не более месяца. 2.2. Приготовление смеси этанол - вода (11). С помощью цилиндра отмеряют 50 см 3 этанола, помещают в коническую колбу вместимостью 200 см 3, прибавляют 50 см 3 дистиллированной воды, перемешивают. Смесь хранится в колбе с притертой пробкой при комнатной температуре в течение 12 месяцев. 2.3. Приготовление подвижной фазы ацетонитрил - вода (8020). С помощью цилиндра отмеряют 800 см 3 ацетонитрила, добавляют 200 см 3 дистиллированной воды, перемешивают и фильтруют через фильтр миллипоре. Раствор хранится в склянке из темного стекла при комнатной температуре в течение 12 месяцев. 2 18386 1 2014.06.30 2.4. Приготовление градуировочных растворов. 2.4.1. Приготовление основного градуировочного раствора фруктозы концентрацией 10 мг/см 3. Взвешивают (1,0000,001) г фруктозы и растворяют дистиллированной водой в мерной колбе объемом 100 см 3. Раствор готовят непосредственно перед применением. Хранению не подлежит. 2.4.2. Приготовление градуировочных растворов фруктозы. Градуировочные растворы фруктозы концентрацией 0,1, 0,2, 0,5, 0,8, 1,0 мг/см 3 готовят по схеме, представленной в табл. 1. Аликвотные части основного градуировочного раствора фруктозы переносят в мерные колбы соответствующего объема и доводят дистиллированной водой до метки. Растворы готовят непосредственно перед применением. Хранению не подлежат. Таблица 1 Схема приготовления градуировочных растворов фруктозы Концентрация фрук- Аликвотная часть основногоградуировочного Объем мерной тозы в градуировочстандартного раствора раствора колбы, см 3 ном растворе, мг/см 3 лактулозы, см 3 1 0,1 1,0 100 2 0,2 2,0 100 3 0,5 5,0 100 4 0,8 4,0 50 5 1,0 5,0 50 3. Установление градуировочной характеристики. Полученные по п. 2.4.2 растворы хроматографируют, начиная с самой низкой концентрации. Условия хроматографирования объем вводимой пробы 20 мкл скорость подачи подвижной фазы 1,2 см 3/мин температура колонки 35 С температура аналитической ячейки детектора 35 С ширина пика 0,2 мин время очистки ячейки перед анализом 10 мин полярность положительная. Каждый градуировочный раствор хроматографируют не менее двух раз, принимая за результат измерения среднее арифметическое параллельных измерений. 4. Построение градуировочного графика. Для построения градуировочного графика устанавливают зависимость площади пиков от соответствующей концентрации лактулозы в градуировочном растворе. По полученным данным рассчитывают коэффициенты регрессииипрямойметодом наименьших квадратов. Градуировочный график строится с учетом вычисленных значений уравнения,где- площадь пика лактулозы (, ед.) Х - концентрация лактулозы в градуировочном растворе (мг/см 3)и- коэффициенты регрессии. 5. Выполнение измерений. Анализ полученного по п. 1 фильтрата проводят на жидкостном хроматографе. Условия хроматографирования такие же, как и при построении градуировочного графика п. 3. 3 18386 1 2014.06.30 Определяют площади пиков, используя компьютерную систему обработки сигналов. Проводят анализ двух параллельных проб. 6. Обработка результатов измерений. Расчет содержания фруктозы, , г/кг, проводят по формуле, где- концентрация фруктозы, найденная по градуировочному графику, мг/см 3- масса навески, г- общий объем экстракта, 25 см 3. За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до третьего знака после запятой и округляют до второго. Результаты определения фруктозы по предлагаемому способу в йогуртах и пастообразных молочных продуктах на основе творога представлены в табл. 2. Таблица 2 Определяемое содержание фруктозы в йогуртах и пастообразных молочных продуктах на основе творога предлагаемым способом Содержание фруктозы, г/кг Наименование продукта Маркировочные Определяемое Извлечение,данные значение Йогурт для детского питания с яблочным пюре, фруктозой и 8 7,97 99,6 бифидобактериями Добрай ранцы 3 -ной жирности Йогурт для детского питания с клубникой и фруктозой Добрай 10 10,09 100,9 ранцы 2 -ной жирности Йогурт Простоквашино с чер 5 4,98 99,6 никой 2,5 -ной жирности Паста творожная 9 -ной жирно 7 6,89 98,4 сти сладкая с малиной и фуктозой Паста творожная для детского питания 10 -ной жирности 10 9,94 99,4 с фуктозой и ванилином Достигаемый технический результат заявляемого способа заключается в том, что способ позволяет определять фруктозу с высокой точностью. Извлечение фруктозы находится на уровне 98,4-100,9 . Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4