Способ получения гипериммунной сыворотки против рожи свиней

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ РОЖИ СВИНЕЙ(71) Заявитель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Алеся Владимировна Соболев Владимир Васильевич Тункель Виталий Семенович(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(57) 1. Способ получения гипериммунной сыворотки против рожи свиней, включающий приготовление антигена, иммунизацию животного-продуцента и получение от него сыворотки крови, отличающийся тем, что антиген готовят смешиванием взятых в соотношении 91 антигена из матрикса Конева и 1,0 -ного раствора липополисахаридпептидной фракции О-антигена бактерий родаили , в качестве животногопродуцента используют вола, а его иммунизацию осуществляют путем введения антигена,содержащего в 1 см 3 3 млрд. микробных клеток, внутрибрюшинно четырехкратно в дозах 5, 10, 15 и 20 см 3 с интервалом между инъекциями 7 суток. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют матрикс Конева, выращенный на питательной среде при температуре 37 С в течение 8-12 часов и инактивированный 0,1 -ным раствором теотропина в течение 72 часов. Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии, в частности к производству гипериммунных сывороток, используемых для лечения и профилактики рожи свиней. Известны способы получения сыворотки против рожи свиней, включающий гипериммунизацию животных живым возбудителем рожи 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9. Наиболее близким в техническом отношении к предлагаемому изобретению является способ получения сыворотки против рожи свиней 2. Согласно данному методу, культуру возбудителя Е.штамма матрикса Конева выращивают на двукомпанентной питательной среде из гидролизатов белков крови, содержащей 10 щелочно-перекисного гидролизата сыворотки крови, 5 биологически активного препарата из торфа, 0,005 гипосульфита натрия, в течение 12 часов при 12705 1 2009.12.30 температуре 37 С и сорбции микробных клеток 6 -ной гидроокисью алюминия в соотношении 91. Волов-продуцентов иммунизируют сорбированным живым антигеном из матрикса Конева внутрибрюшинно восьмикратно в дозах 5, 8, 12, 15, 18, 20, 22 и 24 млрд. микробных клеток на животное с интервалом между инъекциями 7 суток. Однако известный способ имеет ряд существенных недостатков высокая токсичность используемого антигена, невысокий выход целевого продукта и низкая рентабельность производства. Задача изобретения - повышение выхода, биологической активности целевого продукта и технологичности процесса. Поставленная цель достигается тем, что волов-продуцентов иммунизируют антигеном из матрикса Конева, инактивированным 0,1 -ным теотропином, внутрибрюшинно, четырехкратно в возрастающих дозах с определенным интервалом. Антиген для иммунизации животных готовят путем культивирования матрикса Конева на питательной среде, инактивации бактерий теотропином и смешиванием с 1,0 -ным раствором липополисахаридпептидной фракции О-антигена бактерий родаилив соотношении 91. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что антиген готовили смешиванием взятых в соотношении 91 антигена из матрикса Конева и 1,0 -ного раствора липополисахаридпептидной фракции О-антигена бактерий родаили, в качестве животного-продуцента использовали вола, а его иммунизацию осуществляли путем введения антигена, содержащего в 1 см 3 3 млрд. микробных клеток,внутрибрюшинно четырехкратно в дозах 5, 10, 15 и 20 см 3 с интервалом между инъекциями 7 суток. Для получения сыворотки использовали матрикс Конева, выращенный на питательной среде при температуре 37 С в течение 8-12 часов и инактивированный 0,1 -ным раствором теотропина в течение 72 часов. Для определения активности сыворотку разводили, а приготовленные разведения вводили в дозе 0,1 см 3 белым мышам. Через 24 часа животных заражали 100 50 культурой патогенного штамма и вели за ними наблюдение в течение 10 суток. Пример 1. Приготовление антигена для иммунизации животных известным способом (прототип). Для приготовления антигена для иммунизации животных культуру Е.штамма матрикса Конева инкубировали на двукомпанентной питательной среде из гидролизатов белков крови, содержащей 10 щелочно-перекисного гидролизата сыворотки крови, 5 биологически активного препарата из торфа и 0,005 гипосульфита натрия, в течение 12 часов при температуре 37 С. В культуру бактерий добавляли до 6 гидроокиси алюминия, тщательно перемешивали и инкубировали в течение 24 часов. При введении белым мышам антиген в дозе 0,05 см 3 вызывал 100 -ную гибель животных в течение 10 суток. Пример 2. Приготовление антигена для иммунизации животных по предлагаемому методу. Культуру Е.штамма матрикса Конева выращивали в течение 12 часов при температуре 37 С на питательной среде, инактивировали культуру рожистых бактерий концентрацией 3 млрд. микробных клеток в одном см 3 0,1 -ным теотропином при температуре 37 С в течение 72 часов. Полученную инактивированную культуру матрикса Конева смешивали с 1,0 -ным раствором липополисахаридпептидной фракции Оантигена бактерий родав соотношении 91. Антиген в дозе 0,5-0,6 см 3 не вызывал гибели белых мышей в течение 10 суток. Пример 3. То же, что в примере 2, но культуру матрикса Конева выращивали в течение 8 часов, а полученную инактивированную культуру матрикса Конева смешивали с 1,0 -ным рас 2 12705 1 2009.12.30 твором липополисахаридпептидной фракции О-антигена бактерий родав соотношении 91. Антиген в дозе 0,5-0,6 см 3 не вызывал гибели белых мышей в течение 10 суток. Пример 4. Получение сыворотки по известному способу 1 (прототип). Волов-продуцентов иммунизировали внутрибрюшинно, восьмикратно живой культурой возбудителя рожи матрикса Конева в дозах 5, 8, 12, 15, 18, 20, 22 и 24 млрд. микробных клеток с интервалом между инъекциями в 7 суток. 1 см 3 сыворотки содержит 200 мышиных доз. В течение 1 года с одного продуцента получают 152 литра сыворотки. Пример 5. Волов продуцентов иммунизировали инактивированным антигеном из матрикса Конева, содержащим 3 млрд. микробных клеток в 1 см 3, внутрибрюшинно, четырехкратно в дозах 5, 10, 15 и 20 см 3 на животное с интервалом между инъекциями 7 суток. В 1 см 3 сыворотки содержится 180 мышиных доз, т.е. 1 см 3 сыворотки достаточно для защиты от гибели от рожистой инфекции 180 мышей. В течение 1 года с одного продуцента получают 136 литров сыворотки. Пример 6. То же, что в примере 5, но антиген вводили внутрибрюшинно в дозах 4, 8, 12 и 18 см 3 на животное с интервалом между инъекциями 7 суток. 1 см 3 сыворотки содержит 160 мышиных доз. В течение 1 года с каждого продуцента получают 150 литров сыворотки. Пример 7. То же, что в примере 5, но антиген вводили в дозах 6, 12, 16 и 22 см 3 на животное с интервалом между инъекциями 7 суток. В 1 см 3 сыворотки содержится 190 мышиных доз. В течение 1 года с каждого продуцента получают 152 литра сыворотки. Пример 8. То же, что в примере 5, но антиген вводили с интервалом в 5 суток. 1 см 3 сыворотки содержит 180 мышиных доз. В течение 1 года с каждого продуцента получают 148 литров сыворотки. Пример 9. То же, что в примере 5, но антиген вводили с интервалом в 9 суток. 1 см 3 сыворотки содержит 120 мышиных доз. В течение 1 года с каждого продуцента получают 144 литра сыворотки. В процессе проведения экспериментов нами было установлено, что существенное влияние на превентивную активность сыворотки оказывает доза, кратность введения антигена, способ его приготовления, а также интервал между инъекциями в процессе иммунизации. При увеличении доз антигенов (пример 7), а также и при уменьшении ее (пример 6) отмечается снижение активности сыворотки. Сокращение интервала между инъекциями антигена (пример 8) до 5 суток, а также увеличение его (пример 9) до 9 суток приводит к снижению активности сыворотки. Таким образом, наиболее высокой биологической активностью и эффективностью обладает противорожистая сыворотка, полученная по предлагаемому способу (пример 5). Предлагаемый способ позволяет повысить активность сыворотки, снизить антигенную нагрузку на продуцентов за счет инактивации рожистых бактерий и снижения токсичности антигена, сократить производственные затраты и повысить выход целевого продукта на 12 . Источники информации 1. Душук Р.В. и др. Актуальные вопросы ветеринарии.- Новосибирск, 1997.- С. 43. 3 12705 1 2009.12.30 2. Патент РБ 6382, 2004. 3. Кулешова И.П. и др. Молодежь, наука, аграрное образование и производство.Витебск, 1999.- С. 123-124. 4. Рожа свиней. Меры борьбы и профилактика.- М. Издательство МСХА, 1993.- С. 8-9. 5. Романова М.И. Усовершенствование способа получения гипериммунной противорожистой сыворотки Автореф. дисс.канд. вет. наук.- М., 1990.- С. 3-15. 6. 101 8643 А, 1983. 7.953759 А, 1983. 8.2169582 С 2, 2001. 9.2085211 С 1, 1997. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4