Способ получения гипериммунной сыворотки против рожи свиней

39/44, 35/16, 39/02, 12 1/20 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ РОЖИ СВИНЕЙ(71) Заявитель Частное производственное унитарное предприятие Витебская биофабрика(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Зелютков Юрий Георгиевич Кулешова Ирина Петровна(73) Патентообладатель Частное производственное унитарное предприятие Витебская биофабрика(57) 1. Способ получения гипериммунной сыворотки против рожи свиней путем приготовления антигена, иммунизации животных-продуцентов и получения сыворотки крови,отличающийся тем, что иммунизируют волов-продуцентов сорбированным живым антигеном из матрикса Конева внутрибрюшинно восьмикратно в дозах 5, 8, 12, 15, 18, 20, 22 и 24 млрд. микробных клеток на животное с интервалом между инъекциями 7 суток. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что антиген для иммунизации животных готовят путем культивирования матрикса Конева на двухкомпонентной питательной среде из гидролизатов белков крови, содержащей 10 щелочно-перекисного гидролизата сыворотки крови, 5 биологически активного препарата из торфа, 0,005 тиосульфата натрия, в течение 12 часов при температуре 37 С и сорбции микробных клеток 6 -ной гидроокисью алюминия в соотношении 91.(56) Романова М.И. Усовершенствование способа получения гипериммунной противорожистой сыворотки Автореферат диссертации. - М. 1990. - С. 3-15. Кулешова И.П. и др. Молодежь, наука, аграрное образование и производство. - Витебск, 1999. - С. 123-124. Дашук Р.В. и др. Актуальные вопросы ветеринарии. Новосибирск, 1997. - С. 43.2085221 1, 1996. Рожа свиней. Меры борьбы и профилактика. - М. Издательство МСХА, 1993. - С. 8-9.1018643 , 1983.953759 , 1983. Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии, в частности к производству гипериммунных сывороток, используемых для лечения и профилактики рожи свиней. Известен способ получения сыворотки против рожи свиней, включающий гипериммунизацию животных живым возбудителем рожи, выращенных на мясной основе при температуре 35,5-361, 2, 3, 5, 6. 6382 1 Наиболее близким в техническом отношении к предложенному изобретению является способ получения сыворотки против рожи свиней 4. Согласно данному методу, культуру возбудителя Е. штаммов 1689,1329, 1933 выращивают при температуре 37 в течение 12 часов на бульоне Хоттингера,центрифугируют и консервируют 0,3 -ным раствором формалина в течение 48 часов. Свиней-продуцентов иммунизируют внутримышечно, восьмикратно возрастающими дозами инактивированного концентрированного антигена (в млрд. микробных клеток на животное) 12 36 80 160 320 480 840 с интервалом между введениями в семь дней. В течение первых шести инъекций антигена вводят В-активин в дозе 10 мг на животное. Однако, известный способ имеет ряд существенных недостатков низкий выход конечного-целевого продукта при гипериммунизации используется массивная доза антигена невысокая биологическая активность целевого продукта низкая рентабельность производства биопрепарата. Задача изобретения - повышение биологической активности целевого продукта, упрощение и удешевление технологии. Поставленная цель достигается тем, что волов-продуцентов иммунизируют живым сорбированным антигеном из культуры рожистых бактерий матрикса Конева внутрибрюшинно, восьмикратно в возрастающих дозах с определенным интервалом. Антиген для иммунизации животных готовят путем инкубации культуры рожистых бактерий матрикса Конева на двухкомпонентной питательной среде из гидролизатов белков крови, содержащей стимуляторы и стабилизаторы. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что гипериммунную сыворотку против рожи свиней получают иммунизацией волов-продуцентов сорбированным живым антигеном из матрикса Конева внутрибрюшинно, восьмикратно в дозах 5 8 12 15 18 20 22 и 24 млрд. микробных клеток на животное с интервалом между инъекциями 7 суток. Антиген для иммунизации животных готовят путем культивирования матрикса Конева на двухкомпонентной питательной среде из гидролизатов белков крови, содержащей 10 щелочно-перекисного гидролизата сыворотки крови, 5 биологически активного препарата из торфа, 0,005 гипосульфата натрия в течение 12 часов при температуре 37 и сорбации микробных клеток 6 -ной гидроокисью алюминия в соотношении 91. Пример 1. Приготовление антигена для иммунизации животных известным способом (прототип). Антиген для иммунизации готовят на бульоне Хоттингера путем инкубации. штаммов 1689, 1329, 1933 при 37 в течение 12 часов. Полученную бактериальную массу концентрировали путем центрифугирования на центрифуге К 70 при факторе разделения 2500 в течение 251 минут. Осадок дважды отмывают изотоническим раствором натрия хлорида. К отмытой культуре с концентрацией 10 40 и 80 млрд. микробных клеток в 1 см 3 добавляют для инактивации 0,3 раствор формалина. Инактивацию проводят при 370,5 в течение 48 часов при периодическом перемешивании бактериальной массы. Пример 2. Приготовление антигена для иммунизации животных по предлагаемому методу. Для приготовления антигена культуру рожистых бактерий матрикса Конева инкубируют на двухкомпонентной питательной среде из гидролизатов белков крови, содержащей 10 препарата щелочно-перекисного гидролизата сыворотки крови, 5 биологически активного препарата из торфа и 0,005 гипосульфата натрия (в течение 12 часов при температуре 37 ). В культуру бактерий добавляют до 0,6 гидроокиси алюминия, тщательно перемешивают и инкубируют в течение 24 часов. 2 6382 1 Пример 3. Получение сыворотки по известному способу (прототип). Свиней-продуцентов иммунизируют внутримышечно, восьмикратно, с интервалом в 7 дней возрастающими дозами инактивированного концентрированного антигена в количестве 12 36 80 60 320 480 840 и 486 млрд. микробных клеток на животное. Срок эксплуатации продуцентов 6 месяцев. За период эксплуатации от одного животного получают 12,3 дм 3 препарата. Превентивная активность сыворотки составляет ЕД 500,012 см 3. Пример 4. Получение сыворотки по предлагаемому способу 1. Волов-продуцентов иммунизируют внутрибрюшинно, восьмикратно живой культурой возбудителя рожи матрикса Конева в дозах 4 6 10 12 15 18 20 и 22 млрд. микробных клеток с интервалом между инъекциями в 7 суток. Животных эксплуатируют в течение 5 лет. За период их биологического использования от одного животного получают 346,6 дм 3 сыворотки. Превентивная активность полученной таким способом сыворотки составляет ЕД 500,0032 см 3. Пример 5. Получение сыворотки по предлагаемому способу 2. Волов-продуцентов иммунизируют внутрибрюшинно, восьмикратно живой рожистой культурой матрикса Конева в дозах 5 8 12 15 18 20 22 и 24 млрд. микробных клеток с интервалом между инъекциями в 7 суток. Превентивная активность сыворотки составляет ЕД 500,0020 смЗ. Животных эксплуатируют в течение 5 лет. За указанный период от одного животного получают 367,7 дмЗ продукта. Пример 6. Аналогично, как и в примере 5, но с той лишь разницей, что интервал между введениями антигена составляет 5 суток. Превентивная активность сыворотки составляет ЕД 500,0042 см 3. За пятилетний срок эксплуатации продуцентов от одного животного получают 452,8 дм 3 гипериммунной сыворотки. Пример 7. Аналогично, как в примере 5, но с той разницей, что интервал между введениями составляет 9 суток. Превентивная активность сыворотки составляет ЕД 500,0034 см 3. За 5-летний период эксплуатации от одного животного-продуцента получают 356,8 дм 3 сыворотки. Пример 8. Аналогично, как в примере 5, но живую рожистую культуру матрикса Конева вводили семикратно в дозах 16 24 30 36 48 52 и 56 млрд. микробных клеток с интервалом между инъекциями в 7 суток. Превентивная активность полученной гипериммунной сыворотки составляет ЕД 500,012 см 3. Животных-продуцентов эксплуатируют 5 лет. За этот период от одного животного получают 352,4 дм 3 сыворотки. Пример 9. Аналогично, как и в примере 5, но живую рожистую культуру матрикса Конева вводили девятикратно в дозах 16 24 30 36 40 44 48 и 56 млрд. микробных клеток с интервалом между инъекциями в 7 суток. 3 6382 1 Превентивная активность сыворотки составляет ЕД 500,008 см 3. Животныхпродуцентов эксплуатируют 5 лет. В течение указанного срока от одного животного получают 354,6 дм 3 сыворотки. Пример 10. Аналогично, как в примере 5, но живую рожистую культуру матрикса Конева вводили восьмикратно в дозах 20 28 36 40 44, 48 52 и 60 млрд. микробных клеток с интервалом между инъекциями в 7 дней. Превентивная активность сыворотки составляет ЕД 500,0062 см 3. За период эксплуатации животных-продуцентов от одного животного получают 366,4 дм 3 сыворотки. В процессе проведения экспериментов нами было установлено, что существенное влияние на превентивную активность гипериммунной сыворотки оказывает доза и кратность введения антигена, а также интервал между инъекциями при иммунизации. При увеличении дозы иммуногена (пример 10), а также и при уменьшении ее (пример 4) происходит снижение превентивной активности сыворотки. Сокращение интервала между инъекциями антигена (пример 6) до 5 суток, а также увеличение его до 9 суток приводит к снижению превентивной способности сыворотки. Увеличение кратности введения антигена до 9 инъекций (пример 9), как и сокращение их до 7 введений (пример 8), способствует образованию антител с низким аффинитетом и не оказывает существенного влияния на процесс антителообразования. Наиболее высокой биологической активностью и эффективностью (ЕД 500,002 см 3) обладала противорожистая сыворотка, полученная по методу описанному в примере 5. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить превентивную активность сыворотки, снизить антигенную нагрузку на животных, сократить производственные затраты и повысить выход целевого продукта. Источники информации 1. Душук Р.В. и др. Актуальные вопросы ветеринарии. - Новосибирск, 1997. - С. 43. 2. Кулешева И.И. и др. Молодежь, наука, аграрное образование и производство. Витебск, 1999. - С. 123-124. 3. Рожа свиней. Меры борьбы и профилактики. - М. Издательство МСХА, 1993. - С. 8-9. 4. Романова М.И. Усовершенствование способа получения гипериммунной противорожистой сыворотки Автореферат диссертации. - М., 1990. - С. 3-5. 5.1018643 А, 1983. 6.953759 А, 1983. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.