Способ получения сухого концентрата бифидобактерий

23 9/12 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУХОГО КОНЦЕНТРАТА БИФИДОБАКТЕРИЙ(71) Заявитель Государственное предприятие институт БелНИКТИММП(73) Патентообладатель Государственное предприятие институт БелНИКТИММП(57) Способ получения сухого концентрата бифидобактерий, предусматривающий глубинное периодическое выращивание культуры бифидобактерий на питательной среде, отделение биомассы от культуральной жидкости, смешивание с защитной средой, замораживание и сушку сублимацией, отличающийся тем, что используют гидролизатно-молочную питательную среду, содержащую в качестве источника углерода лактозу,в начале стационарной фазы роста бифидобактерий в среду культивирования дополнительно вносят лактозу до концентрации 0,5-1,0 об. , при этом перемешивание осуществляют периодически при коррекции активной кислотности в культуральной среде.(56)2005119 1, 1993.1686718 1, 1996.2104706 1, 1998.2083666 1, 1997. Изобретение относится к молочной, пищевой, микробиологической промышленности и может быть использовано при производстве бифидосодержащих продуктов лечебно-профилактического действия. Известен способ получения биомассы бифидобактерий для производства бифидосодержащих препаратов лечебно-профилактического действия, предусматривающий глубинное периодическое выращивание микроорганизмов в две стадии, где на первой стадии осуществляют поддержание источника углерода на постоянном уровне, а на второй стадии проводят снижение концентрации накопленных в процессе культивирования метаболитов 1. Задачей данного изобретения является увеличение содержания жизнеспособных клеток бифидобактерий в сухом концентрате путем дополнительного внесения лактозы как источника углерода. Поставленная задача достигается тем, что способ получения сухого концентрата бифидобактерий предусматривает приготовление гидролизатно-молочной среды, инокулирование чистыми культурами бифидобактерий, наращивание биомассы путем глубинного периодического культивирования при коррекции активной кислотности в культуральной среде с внесением в начале стационарной фазы роста дополнительного источника углерода - лактозы в концентрации 0,5-1 от объема культуральной среды, отделение биомассы от культуральной жидкости, смешивание с защитной средой, замораживание и сушку сублимацией. Так как в периодической культуре переход от экспоненциальной фазы роста к стационарной может вызываться нехваткой питательного компонента, поэтому при добавлении дополнительного источника углерода - лактозы (0,5-1)рост культуры будет продолжаться. Поскольку бифидобактерии являются анаэробными культурами, перемешивание среды нежелательно вследствие растворения кислорода, поэтому перемешивание осуществляется периодически при нейтрализации культуральной среды, кроме того вносятся компоненты, снижающие редокс-потенциал и уменьшающие растворимость кислорода. Способ осуществляется следующим образом. 3896 1 Выращивание клеток бифидобактерий проводят в ферментере на гидролизатно-молочной среде, содержащей гидролизованное панкреатином обезжиренное молоко - 50 , пептон или дрожжевой автолизат 0,2-0,4 , лактозу - 1,5 -2 ,- 0,15-0,2 , цистеин - 0,01- 0,02 , агар-агар 0,075 - 0,1 , дистиллированная вода - 50 в две стадии. На первой стадии в среду добавляют источник углерода, которым является лактоза в концентрации (10,2) , и культивируют 18-20 ч. Нейтрализацию культуральной среды проводят, когда значение рН составляет (6,00,2) до величины (6,70,1) 40 растворомпри включенной мешалке 35 об/мин. После титрования перемешивание прекращают. На второй стадии, когда скорость роста заметно снижается из-за исчерпания источника углерода, а этот момент контролируется установлением постоянного значения рН в культуральной среде, вносят раствор лактозы до конечной концентрации в среде 0,5 - 1 . Далее процесс наращивания биомассы ведут до полного исчерпания лактозы (172) ч, в конце культивирования доводят значение рН до (7,20,2) и охлаждают до температуры (102). Отделение биомассы от культуральной жидкости производят на суперцентрифуге с числом оборотов в минуту (175001500). Полученную биомассу смешивают с защитной средой в соотношении 11, состоящую из раствора 11 сахарозы и 5 раствора цитрата натрия. Замораживание суспензии клеток бифидобактерий, разлитую тонким слоем (не более 0,5 см) в кюветы,проводят до температуры минус (482) С в течение (40,5) ч. После этого высушивают под вакуумом в сублимационной сушилке (382) ч до температуры (322) . В 1 г сухого концентрата должно содержаться 1011-1012 жизнеспособных клеток бифидобактерий. Пример 1. В 35 л дистиллированной воды вносят 35 л гидролизованного панкреатином обезжиренного молока, 140 г пептона, 140 г , 7 г цистеина, 70 г агар-агара, доводят рН до 6,9 40. Стерилизуют при 121 С 90 мин, затем охлаждают до 37 С, вносят предварительно простерилизованную при 115 С 20 мин 40 раствор лактозы до конечной ее концентрации в среде 1 . Готовую среду инокулируют 10 культурыС 14. Первая нейтрализация культуральной среды происходит через 3,5 ч при значении рН 6,0 до 6,7 при включенной мешалке (35 об/мин) 40. После нейтрализации мешалку отключают. Коррекция активной кислотности происходит с периодичностью 40 мин и продолжается 19 ч. На второй стадии, когда рН стабилизируется, вливают расчетное количество 40 раствора лактозы до концентрации в культуральной среде 1 и выращивают клетки бифидобактерий до исчерпания источника углерода. Охлаждают до 12 и центрифугируют при 17500 об/мин. Полученную биомассу смешивают с защитной средой, состоящей из раствора - 11 сахарозы и 5 цитрата натрия, разливают тонким слоем в стерильные кюветы и замораживают до минус 48 в течение 4 ч. Высушивают под вакуумом в сублимационной сушильной установке в течение 38 ч. В 1 г сухого концентрата содержится 1012 жизнеспособных клеток бифидобактерий. Пример 2. В 35 л дистиллированной воды вносят 35 л гидролизованного панкреатином обезжиренного молока, 140 г пептона, 140 г , 7 г цистеина,70 г агар-агара, доводят рН до 6,9 40. Стерилизуют при 1215 ч, затем охлаждают до 37,5 С, вносят предварительно простерилизованную при 115 С 20 мин 20 лактозу до конечной ее концентрации в среде 1 . Готовую среду инокулируют 10 культурыБ 10. Первая нейтрализация культуральной среды происходит через 4,5 ч при значении рН 6,2 до 6,7 при включенной мешалке (35 об/мин) 40. После нейтрализации мешалку отключают. Коррекция активной кислотности происходит с периодичностью 45 мин и продолжается 20 ч. На второй стадии, когда рН стабилизируется, вливают расчетное количество 40 раствора лактозы до концентрации в культуральной среде 1 и выращивают клетки бифидобактерий до исчерпания источника углерода. Охлаждают до 12 и центрифугируют при 17500 об/мин. Полученную биомассу смешивают с защитной средой, состоящей из 11 сахарозы и 5 цитрата натрия, разливают тонким слоем в стерильные кюветы и замораживают до (482) С в течение 4 ч. Высушивают под вакуумом в сублимационной сушильной установке в течение 40 ч. В 1 г сухого концентрата содержится 1011 жизнеспособных клеток бифидобактерий. Пример 3. Получение концентрата бифидобактерий осуществляется как в примере 1, только для инокулирования используют культуруБ 37. В 1 г сухого концентрата содержится 1011 жизнеспособных клеток бифидобактерий. Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.