Бактометрическая питательная среда для выявления возбудителей кишечного иерсиниоза или псевдотуберкулеза

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ БАКТОМЕТРИЧЕСКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КИШЕЧНОГО ИЕРСИНИОЗА ИЛИ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА(71) Заявитель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Авторы Титов Леонид Петрович Ермакова Татьяна Сергеевна Паньшина Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(57) Бактометрическая питательная среда для выявления возбудителей кишечного иерсиниоза или псевдотуберкулеза, содержащая пептон, дрожжевой экстракт, маннит, хлористый натрий, сернокислый магний и воду дистиллированную, отличающаяся тем, что дополнительно содержит хлористый кальций, желчь, глюкозу, ксилозу, мочевину и бриллиантовый зеленый при следующем соотношении компонентов пептон сухой ферментативный, г 8,90-10,00 дрожжевой экстракт, г 0,80-1,20 хлористый натрий, г 0,80-1,20 сернокислый магний, г 0,07-0,11 хлористый кальций, г 0,90-1,00 желчь крупного рогатого скота сухая, г 9,00-11,00 глюкоза, г 4,50-5,50 маннит, г 4,50-5,50 ксилоза, г 2,00-3,00 мочевина, г 3,50-4,50 бриллиантовый зеленый, г 0,01 вода дистиллированная, л до 1,00. Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза. Известны бактометрические среды фирмы , производящей бактометры их состав производителями не раскрывается. Среды предназначены для колиморфных бактерий, энтеробактерий (в том числе и иерсиний), для общих целей. Недостатком явля 9829 1 2007.10.30 ется то, что графики динамики роста иерсиний на этих средах неотличимы от графиков роста других энтеробактерий ввиду неспецифичности этих сред. Наиболее близкой, принятой за прототип, является питательная среда для выделения энтеропатогенных иерсиний (И-агар) 1, содержащая пептон, дрожжевой экстракт, маннит, натрия пируват, натрия хлорид, магния сульфат, натрия дезоксихолат, нейтральный красный, кристаллический фиолетовый, агар-агар, иргасан и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л пептон 19,0-21,0 дрожжевой экстракт 1,9-2,1 маннит 19,0-21,0 натрия пируват 1,9-2,1 натрия хлорид 0,95-1,05 магния сульфат 0,009-0,011 натрия дезоксихолат 0,48-0,53 нейтральный красный 0,028-0,032 кристаллический фиолетовый 0,009-0,0011 агар-агар 11,9-13,1 иргасан 0,0039-0,0041 дистиллированная вода до 1 л. Задачей изобретения является создание отечественной специфической бактометрической питательной среды для раннего выявления роста иерсиний в лунках бактометра, не уступающей по качеству прототипу. Задачей изобретения является создание отечественной питательной среды, обеспечивающей стабильность результатов по дифференциации иерсиний от других энтеробактерий. При конструировании питательных сред необходимо учитывать включение в них следующих основных частей питательные вещества и минеральные соли для обеспечения роста микроорганизмов, ингибиторы посторонней микрофлоры 2. Поставленная задача решается в питательной среде для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза и дифференциации их от других энтеробактерий сбалансированностью компонентного состава среды, содержащей желчь, глюкозу, мочевину, хлористый натрий, бромтимоловый синий, агар, воду дистиллированную тем, что она дополнительно содержит пептон сухой фементативный, дрожжевой экстракт, маннит,ксилозу, сернокислый магний, хлористый кальций, бриллиантовый зеленый при следующем соотношении компонентов, г/л пептон сухой ферментативный 8,9-10,0 дрожжевой экстракт 0,8-1,2 хлористый натрий 0,8-1,2 сернокислый магний 0,07-0,11 хлористый кальций 0,9-1,0 желчь крупного рогатого скота сухая 9-11 глюкоза 4,5-5,5 маннит 4,5-5,5 ксилоза 2-3 мочевина 3,5-4,5 бриллиантовый зеленый 0,01 агар 11,0-13,0 бромтимоловый синий 0,09-0,1 вода дистиллированная до 1 л. Пример 1 Для приготовления среды берут следующие навески ингредиентов, г 2 9829 1 2007.10.30 пептон сухой ферментативный 8,8 дрожжевой экстракт 0,8 хлористый натрий 0,8 сернокислый магний 0,07 хлористый кальций 0,8 желчь крупного рогатого скота сухая 8,8 глюкоза 4,3 маннит 4,3 ксилоза 1,8 мочевина 3,0 бриллиантовый зеленый 0,01 агар 11,0 бромтимоловый синий 0,09 вода дистиллированная до 1 л. Среду готовят следующим образом навески (кроме агара и бромтимолового синего) тщательно перемешивают в 1 л дистиллированной воды. Стерилизуют в автоклаве 15 мин при 110 . К полученной основе добавляют агар и бромтимоловый синий. Доводят до кипения, расплавляют агар, кипятят 5 мин, после остывания до 45-50 С разливают по чашкам. Перед посевом подсушивают 30 мин при комнатной температуре. Готовые чашки могут храниться в холодильнике до 15 дней. Результаты биологического контроля представлены в табл. 1. Пример 2 Среду готовят в соответствии с примером 1 пептон сухой ферментативный 9,0 дрожжевой экстракт 0,9 хлористый натрий 0,9 сернокислый магний 0,09 хлористый кальций 0,9 желчь крупного рогатого скота сухая 9,0 глюкоза 4,5 маннит 4,5 ксилоза 2,0 мочевина 3,5 бриллиантовый зеленый 0,01 агар 12,0 бромтимоловый синий 0,1 вода дистиллированная до 1 л. Результаты биологического контроля представлены в табл. 1. Пример 3 Среду готовят в соответствии с примером 1 пептон сухой ферментативный 10,0 дрожжевой экстракт 1,0 хлористый натрий 1,0 сернокислый магний 0,1 хлористый кальций 1,0 желчь крупного рогатого скота сухая 10,0 глюкоза 5,0 маннит 5,0 ксилоза 2,5 мочевина 4,0 бриллиантовый зеленый 0,01 3 9829 1 2007.10.30 агар 12,0 бромтимоловый синий 0,1 вода дистиллированная до 1 л. Результаты биологического контроля представлены в табл. 1. Пример 4 Среду готовят в соответствии с примером 1 пептон сухой ферментативный 10,0 дрожжевой экстракт 1,1 хлористый натрий 1,1 сернокислый магний 0,11 хлористый кальций 1,0 желчь крупного рогатого скота сухая 11,0 глюкоза 5,5 маннит 5,5 ксилоза 3,0 мочевина 4,5 бриллиантовый зеленый 0,01 агар 12,0 бромтимоловый синий 0,1 вода дистиллированная до 1 л. Результаты биологического контроля представлены в табл. 1. Пример 5 Среду готовят в соответствии с примером 1 пептон сухой ферментативный 11,2 дрожжевой экстракт 1,2 хлористый натрий 1,2 сернокислый магний 0,12 хлористый кальций 1,2 желчь крупного рогатого скота сухая 11,2 глюкоза 5,6 маннит 5,6 ксилоза 3,2 мочевина 4,7 бриллиантовый зеленый 0,01 агар 12,0 бромтимоловый синий 0,1 вода дистиллированная до 1 л. Результаты биологического контроля представлены в табл. 1. Таблица 1 Тест-культуры Предлагаемая среда по примеру 2 3 4 69 70 682,0-1,52,0-1,52,0-1,5 зеленозеленозеленоголубые голубые голубые 60 62 561,0-1,51,5-2,01,5-2,0 зеленозеленозеленоголубые,голубые,голубые,фестонча- фестонча- фестончатый край тый край тый край 4 9829 1 2007.10.30 Продолжение табл. 1 Предлагаемая среда по примеру Тест-культуры 1 2 3 4 550 32 30 34 451,5-21,5-21,5-21,5-21,5-2 желтые желтые желтые желтые желтые сочные сочные сочные сочные сочные 45 36 34 38 481,5-21,5-21,5-21,5-21,5-2 желтые желтые желтые желтые желтые плоские плоские плоские плоские плоскиерасплывчарасплывчатые колотые колонии, роение 35 30 32 нии, роение синие, синяя синие, синяя среда среда- цифры в таблице показывают количество выросших колоний. Количественное соотношение компонентов предлагаемой питательной среды обеспечивает хороший рост взятых из коллекции лаборатории клинической и экспериментальной микробиологии НИИЭМ, е , посредственный рост, .,, при подавлении ростапри посеве 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10-6 через 24 ч инкубации при(371) С. При этом колониикруглые, зеленовато-голубого цвета, диаметром (2,00,5) мм, колонии- зеленовато-голубые, со слегка фестончатым краем и более темным выпуклым центром, диаметром (1,50,5) мм. Колонии . желтые, сочные, выпуклые, диаметром (1,50,5) мм. Колониижелтые, сочные, плоские, диаметром (1,50,5) мм. Колонииярко-синие,с синей средой вокруг, диаметром (1,50,5) мм, роение. Таким образом, предлагаемая среда позволила дифференцировать. от.,и других энтеробактерий среда обладала ингибирующими свойствами в отношении. Проводили оценку дифференцирующих, ингибирующих и ростовых свойств предлагаемой питательной среды для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза и дифференциации их от других энтеробактерий. Для оценки ростовых свойств среды готовили взвесь микроорганизмов в физрастворе плотностью 109 кл/мл (по стандарту мутности 10 ед.) и путем десятикратных последовательных разведений концентрацию доводили до 102-103 кл/мл и высевали по 0,1 мл на чашку Петри. Определяли показатель прорастания - процент выросших колоний из 100 засеянных микробных клеток. Для оценки дифференцирующих свойств высевали смесь чистых культур . или . и одного из микробов-ассоциантов - . или(в концентрации 50 кл/мл). Для изучения ингибирующих свойств питательной среды готовили смесь, содержащую по 102 кл/мл . или . и 103 кл/мл, также высевали по 0,1 мл смеси на чашку. Инкубация 24 ч в термостате при (371) С. Контролем служила дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза 6. В экспериментах количество колоний иерсиний на предлагаемой среде и среде по прототипу было почти одинаковым шигелла и кишечная палочка вырастала в меньшем количестве и была легко отличима от иерсиний по ярко-желтому цвету и большей величине колоний стафилококк не вырастал. Результаты изложены в табл. 2. 5 9829 1 2007.10.30 Таблица 2 Испытание ростовых, дифференцирующих и ингибирующих свойств предлагаемой питательной среды для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза Выросло,из 100 засеянных, на среде Предлагаемая среда Среда по прототипу 44,00,82 53,87,445,50,67 62,00,82.. 26,00,58/15,30,75 23,30,29/22,20,53 Предлагаемая питательная среда обладает хорошими ростовыми свойствами, высокой точностью дифференциации .и .от других энтеробактерий, подавляет рост кишечной палочки, рост и роение протея. Нарушение количественного соотношения компонентов среды ведет к резкому ухудшению микробиологических показателей качества предложенной среды. Таким образом, по сравнению со средой-прототипом предлагаемая среда имеет преимущество улучшены дифференцирующие свойства - за счет более глубокого синего окрашивания выявляет Бактерии Источники информации 1.2002126900 , 2004. 2. Справочник по микробиологическим питательным средам / Под ред. М.М. Меджидова. - Дагестанское кн. изд., Махачкала, 1989. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 6