Плотная питательная среда для выращивания микобактерий туберкулеза

(54) ПЛОТНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет (ВУ)(72) Авторы Кузнецов Олег Евгеньевич Гельберг Илья Самуилович (ВУ)(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(56) Ященко Т.Н. и др. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. С. 149-151.Плотная питательная среда для выращивания микобактерий туберкулеза, содержащая 10-15 куриных яиц, 20 мл 2 раствора малахитовой зелени и 600 мл солевого раствора,включающего магнезию сернокислую, глицерин, аминокислоту, воду дистиллированную,отличающаяся тем, что солевой раствор дополнительно содержит калий двуосновной фосфорнокислый и натрий лимоннокислый, а в качестве аминокислоты лизин, при следующем соотнощении компонентовИзобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может использоваться для культивирования микобактерий туберкулеза.Известна среда Гельберга для выращивания микобактерий туберкулеза, состоящая из 6 цельных яиц, 4 желтков, молока, картофельного отвара и раствора солей, содержащего калий двуосновной фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магнезию сернокислую,пептон и глицерин 1.Недостатком данной среды является трудоемкость в ее производстве и высокая стоимость.Известна среда Новая (Г. Мордовского), состоящая из равных объемов желтков куриных яиц И питательного раствора, в который входят калий одноосновной фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магний сернокислый, гликокол, глицерин 2.Недостатком данной среды является высокая стоимость.Наиболее близкой к предлагаемой является среда Левенштейна-Йенсена 3. Среда состоит из 1 л яичной массы, полученной из 10-15 яиц, к которой добавляют 600 мл солевого раствора и 20 мл 2 стерильного раствора малахитовой зелени. Солевой раствор содержиткалий однозамеЩеннь 1 й фосфорнокислый 2,4 г магнезию сернокислую 0,24 г магнезию лимоннокислую 0,6 г Ь-аспарагин 3,6 г глицерин 12 мл воду дистиллированную 600 мл.Недостатком данной среды является ее высокая стоимость.Задача изобретения - создание более дешевой питательной среды с сохранением качества исследования микобактерий туберкулеза.Поставленная задача решается путем создания плотной питательной среды следуюшего составадвуосновной калий фосфорнокислый 0,13 г сернокислая магнезия 0,13 г лимоннокислый натрий 0,13 г лизин 1,91 г глицерин 38,30 мл дистиллированная вода, мл 600,00 мл.К 600 мл готового солевого раствора прибавляют 10-15 цельных яиц и 20 мл 2 стерильного раствора малахитовой зелени.Приводим доказательства возможности достижения поставленной задачи. Из лабораторной культуры МБТ (Н 37 КУ) готовили взвесь в разведении 103, 104, 105 и высевали на 30 пробирок со средой Левенштейна-Йенсена и на 30 пробирок с предлагаемой питательной средой, содержащей в своем составе лизин. Контроль посевов осуществляли ежедневно с 3-го дня. Массивность роста оценивали по 4-х бальной системе (в плюсах). До 20 колоний МБТ на поверхности среды - , выраженный рост МБТ до 50 поверхности среды - , выраженный, сплошной рост МБТ до 75 поверхности среды - ,сплошной рост МБТ по всей (100 ) поверхности питательной среды - . Вырашивание МБТ вели в термостате при г 37 С до 2,5 месяцев. При отсутствии роста к этому времени посев считали отрицательным.В табл. 1, 2, 3 представлены результаты посевов с различными разведениями Н 37 КУ культуры МБТ.Таблица 1 Результаты бактериологического исследования при разведении культуры МБТ 1 0 1 Число исследо- Первичный Рост во всех Массивность ростаС реда ванных проб рост (сут., ) проб.Результаты бактериологического исследования при разведении культуры МБТ 1 0Число иссле- Массивность роста Первичныи Рост во всех ДОВаННЫХ ост (с 7) п обТаблица 3 Результаты бактериологического исследования при разведении культуры МБТ 1 0 Число исследо- Первичный рост Рост во всех Массивность ростаИз представленных таблиц видно, что при изучении роста лабораторного штамма Н 37 КУ предлагаемая плотная питательная среда с лизином не уступала по своим элективным свойствам стандартной среде Левенштейна-Йенсена. Более того, массивность роста МБТ в ранние сроки превышала таковую на среде Левенштейна-Йенсена.Таким образом, предлагаемая плотная питательная среда, содержащая в своем составе лизин, не уступает по своим элективным свойствам среде Левенштейна-Йенсена. Массивность роста МБТ на среде, содержащей лизин, превышала таковую на среде ЛевенштейнаЙенсена, что способствовало большему накоплению бактериальной массы.Использование в составе плотных питательных сред вместо дорогостоящего и ввозимого из-за рубежа Ь-аспарагина более дешевой аминокислоты лизин, позволяет снизить стоимость питательных сред для бактериологической диагностики туберкулеза без ухудшения или изменения их элективных свойств, а также позволяет накопить достаточно бактериальной массы для дальнейшего изучения свойств МБТ.1. Т.Н. Ященко, И.С. Мечева. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С. 150-151.2. Т.Н. Ященко, И.С. Мечева Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С.151.3. Т.Н. Ященко, И.С. Мечева. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С. 149-150.Национальный Центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.