Плотная яичная питательная среда для выращивания микобактерий туберкулеза

ПЛОТНАЯ ЯИЧНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Кузнецов Олег Евгеньевич Гельберг Илья Самуилович(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(56) Ященко Т.Н. и др. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С. 149150.92014100 , 1996.2059715 1, 1996.2193061 1, 2002.2115733 1, 1998.2059728 1, 1996.2215039 2, 2003.(57) Плотная яичная питательная среда для выращивания микобактерий туберкулеза, содержащая яйцо куриное цельное, солевой раствор, состоящий из магнезии сернокислой,аминокислоты, глицерина и воды дистиллированной, 2 раствор малахитовой зелени,отличающаяся тем, что содержит солевой раствор, включающий в качестве аминокислоты лизин и дополнительно калий двуосновной фосфорнокислый и натрий лимоннокислый при следующем соотношении компонентов магнезия сернокислая, г 0,13 лизин, г 1,91 глицерин, мл 38,3 вода дистиллированная, мл 600 калий двуосновной фосфорнокислый, г 0,13 натрий лимоннокислый, г 0,13,и дополнительно содержит рибофлавин при следующем соотношении компонентов среды яйцо куриное цельное, шт. 10-15 солевой раствор, мл 600 2 раствор малахитовой зелени, мл 20 рибофлавин, мг/200 мл среды 20. Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может использоваться для культивирования микобактерий туберкулеза. Трудности выделения микобактерий туберкулеза (МБТ) из патологического материала связаны с биологическими особенностями возбудителя (медленность роста), а также со снижением жизнеспособности микобактерий в результате применения антибак 9287 1 2007.06.30 териальных препаратов для лечения туберкулеза и различных методов обработки при посеве материала. В настоящее время существует большое количество питательных сред для культивирования микобактерий. Однако именно большое количество питательных сред, предлагаемых для выделения микобактерий туберкулеза из патологического материала, говорит о том, что среды далеко не всегда отвечают необходимым требованиям. Это и явилось поводом для создания предлагаемого изобретения. Известна среда Гельберга для выращивания микобактерий туберкулеза, состоящая из 6 цельных яиц, 4 желтков, молока, картофельного отвара и раствора солей, содержащего калий двухосновной фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магнезию сернокислую,пептон и глицерин (Ященко Т.Н., Мечева И.С. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С. 150-151). Недостатком данной среды является трудоемкость в ее производстве и высокая стоимость. Известна среда Новая (Г. Мордовского), состоящая из равных объемов желтков куриных яиц и питательного раствора, в который входят калий одноосновной фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магний сернокислый, гликокол, глицерин (Ященко Т.Н.,Мечева И.С. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С. 151). Недостатком данной среды является высокая стоимость. Наиболее близкой к предлагаемой является среда Левенштейна-Йенсена. Среда состоит из 1 л яичной массы, полученной из 10-15 яиц, к которой добавляют 600 мл солевого раствора и 20 мл 2 стерильного раствора малахитовой зелени. Солевой раствор содержит калий однозамещенный фосфорнокислый - 2,4 г, магнезию сернокислую - 0,24 г, магнезия лимоннокислая - 0,6 г, -аспарагин - 3,6 г, глицерин - 12 мл, вода дистиллированная 600 мл. (Ященко Т.Н. и др. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С. 149-150). Недостатком данной среды является ее высокая стоимость. Задача изобретения - создание более дешевой питательной среды с сохранением качества исследования микобактерий туберкулеза. Поставленная задача решается путем создания плотной яичной питательной среды,содержащей яйцо куриное цельное, солевой раствор, состоящий из магнезии сернокислой,аминокислоты, глицерина и воды дистиллированной, 2 раствор малахитовой зелени,отличающейся тем, что содержит солевой раствор, включающий в качестве аминокислоты лизин и дополнительно калий двуосновной фосфорнокислый и натрий лимоннокислый при следующем соотношении компонентов магнезия сернокислая, г 0,13 лизин, г 1,91 глицерин, мл 38,3 вода дистиллированная, мл 600 калий двуосновной фосфорнокислый, г 0,13 натрий лимоннокислый, г 0,13,и дополнительно содержащей рибофлавин при следующем соотношении компонентов среды яйцо куриное цельное, шт. 10-15 солевой раствор, мл 600 2 раствор малахитовой зелени, мл 20 рибофлавин, мг/200 мл среды 20. При подборе ингредиентов для предлагаемой питательной яично-солевой среды исходили из того, чтобы обеспечить нужное количество и качество белкового состава за счет яиц, повышенного содержания глицерина и витаминной добавки рибофлавин (витамин В 2). 2 9287 1 2007.06.30 Среду приготавливают следующим образом. К 10 гомогенизированным в стерильной колбе яйцам приливают 300 мл солевого раствора, витаминную добавку (рибофлавин) в соотношении 20 мг рибофлавина на 200 мл среды и 20 мл 2 малахитового зеленого. Тщательно размешав полученный яично-солевой раствор с витаминной добавкой рибофлавин, фильтруют его через стерильный марлевый фильтр в стерильный флакон. Готовую среду разливают в стерильные пробирки (4-5 мл) и сворачивают в свертывателе (трижды доводя температуру до 80 С). Предлагаемая среда хорошо сворачивается, не отстает от стенок пробирок и по внешним свойствам (цвет) напоминает среду Левенштейна-Йенсена,что положительно сказывается на работе врача и фельдшера не создает никаких трудностей при дифференцировке выросших колоний МБТ. Кроме того, приготовленный солевой раствор с рибофлавином может храниться при 0-4 С в течение 3-х месяцев, не меняя своих свойств. Были проведены сравнительные испытания в отношении роста МБТ питательной среды с лизином и рибофлавином и среды Левенштейна-Йенсена. Провели 32 сравнительных посева чистой культуры М.на среду с лизином и рибофлавином и на среду Левенштейна-Йенсена. Было установлено, что чистая культура МБТ растет на среде с лизином и рибофлавином так же хорошо, как и на среде Левенштейна-Йенсена (60-70 роста на 7-ой день, 100 роста на 8-9-ый день инкубации). Цвет и форма колоний МБТ на обеих средах идентичны друг другу. Был произведен 161 сравнительный посев мокроты от пациентов, страдающих туберкулезом (бактериовыделителей), и установлено следующее скорость первичного роста МБТ на испытуемой питательной среде с лизином и рибофлавином составляет - 31,420,57 суток, скорость первичного роста МБТ на среде Левенштейна-Йенсена - 36,890,73 суток. Таким образом, предлагаемая плотная яичная питательная среда обеспечивает культивирование МБТ в более ранние сроки, чем среда Левенштейна-Йенсена, и при этом стоимость яично-солевой питательной среды в 2,0 раза ниже стоимости среды ЛевенштейнаЙенсена. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3