Средство против вируса герпеса

08 75/14, 61 31/22 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДСТВО ПРОТИВ ВИРУСА ГЕРПЕСА(71) Заявители Белорусский государственный университет Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии МЗ РБ(72) Авторы Вотяков Вениамин Иосифович Лосев Юрий Павлович Федулов Александр Сергеевич Квачева Зинаида Болеславовна Николаева Светлана Николаевна Бореко Евгений Иванович Леонтьев Юрий Михайлович Титов Леонид Петрович Еремин Владимир Федорович(73) Патентообладатели Белорусский государственный университет Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии МЗ РБ(57) Применение полидисульфида галловой кислоты формулы где 12-16,в качестве средства против вируса герпеса.(56)2108790 1, 1998.2108791 1, 1998.2110997 1, 1998.03007224 , 1991. Николаева С.Н. и др. Современные проблемы инфекционной патологии человека(эпидемиология, клиника, микробиология, вирусология и иммунология). - Минск, 1998. С. 581.. , 1998. . 178. - . 3. - . 618-626. Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для подавления размножения вируса простого герпеса, типа(ВПГ-) штаммаи его резистентных вариантов Ацрез. и Фкрез. 6352 1 Наиболее эффективными чаще применяемыми являются противогерпетические препараты 9-(2-гидроксиэтоксиметил) гуанин (ацикловир) и фосфоноуксусная кислота. Однако ацикловир, несмотря на то, что является очень эффективным и малотоксичным химпрепаратом в связи с опосредованностью антивирусного действия вирусспецифической тимицдинкиназой обладает недостатком быстрого формирования устойчивых штаммов вируса герпеса и, вследствие этого, резким снижением антивирусного эффекта. Проблема особенно актуальна из-за частного выделения АЦВ-резистентных вариантов от больных СПИДом. Фосфоноуксусная кислота имеет также ограниченные терапевтические возможности 1, 2. Задачей настоящего изобретения является преодоление устойчивости вируса герпеса к действию ацикловира и фосфоноуксусной кислоты. Задача решается использованием заявляемого соединения полидисульфида галловой кислоты формулы где 12-16. Полидисульфид галловой кислоты получают конденсацией галловой кислоты с однохлористой серой. Пример. В реакционную колбу помещают 17,0 г (0,1 М) галловой кислоты, 150-200 мл предварительно высушенного о-, м-, п-ксилола и при интенсивном перемешивании добавляют 13,5 г (8,1 мл) однохлористой серы в течение 15-20 мин, затем нагревают реакционную массу при 110-120 С до полного прекращения выделения хлористого водорода. По окончании реакции осадок полидисульфида галловой кислоты отфильтровывают, промывают о-, м-, п-ксилолом, а затем водой до отрицательной реакции на ион хлора. Время синтеза 30 ч, выход 92-95 , Тпл 260-262 С с разложением. Схема реакции, где 12-16. ИК-спектр см-1 480, 1230, 1480-бензольное кольцо, 1630-СООН, 3300 ОН полимерная. Полидисульфид галловой кислоты - вещество светло-желтого цвета. Элементный состав мас. найдено 38,60 1,33 24,59 вычислено 36,21 1,72 27,59 В качестве эталона сравнения использовали препарат ацикловир и фосфоноуксусную кислоту. При проведении исследований антивирусной активности использована культура клетокего (почки африканских зеленых мартышек) и ФЭК (фибропласты эмбрионов кур) производства отдела культур клеток п/я Диалек. Вариант вируса простого герпеса,типа , устойчивый к действию ацикловира (виролекс, Югославия), получали в ходе выполнения серийных пассажей вируса на клетках его в присутствии возрастающих концентраций препарата. 2 6352 1 Токсические свойства определяют по способности вызывать цитодеструктивные изменения клеток спустя 48-96 ч инкубации. Монослойные культуры клеток его отмывают от ростовой среды и наносят растворы полидисульфида галловой кислоты на среде гемогидролиза (ГЕМ) 5 в дозах 200-2,5 мкг/мл. По истечении указанного срока инкубации неокрашенные пробы просматривают при увеличении 80. Максимальной переносимой концентрации (МПК) принимают наивысшую дозу вещества, не вызывающую указанных изменений. Установлено, что в дозах в диапазоне 50,0-2,5 мкг/мл полидисульфид галловой кислоты не обладает способностью вызывать цитодеструкцию клеток. Монослойные культуры клетокего отмывают от ростовой среды и инфицируют 0,2 мл разведения вируса ВПГ- (множественность инфицирования составляет 0,1 тканевой цитопатической инфекционной дозы (ТЦИД 50/кл) на среде ГЕМ 5 . После 1 ч контакта с клетками жидкости из флаконов удаляют и наносят среду ГЕМ 5 с полидисульфидом галловой кислоты в соответствующих концентрациях. В качестве контроля используют культуру, к которой не добавляют препарат. Спустя 48-72 ч инкубации в термостате, когда проявление цитопатогенного действия вируса в контрольных пробах вируса максимально, пробы подвергаются титрованию с целью вычисления инфекционного титра. Для этого в монослойные культуры ФЭК (фибропласты эмбрионов кур) вносят 0,2 мл 10-кратных разведений инфекционного материала. После 1 ч контакта с клетками жидкость из флакона удаляют и наносят покрытие на основе концентрата среды ИГЛА с добавлением 1 бактагара Дифко, 0,05 нейтрального красного. По прошествии 48-72 ч инкубации в термостате сосчитывают количество бляшек и вычисляют титр вируса. Минимальной активной концентрацией считают наименьшую концентрацию, в присутствии которой регистрируют подавление цитопатогенного действия вируса (ЦПД) на 75 или снижение титра вируса на 1,2 логорифма бляшкообразующих единиц (БОЕ) /мл. Химиотерапевтический индекс определяют как отношение МПК/МАК, где МАК - минимальная активная концентрация. Результаты испытаний представлены в таблице. Как видно из данных таблиц, полидисульфид галловой кислоты обладает способностью эффективно тормозить размножение вируса герпеса простого, а также его вариантов,устойчивых к действию ацикловира и фосфоноуксусной кислоты. Подавление размножения вирусов герпеса простого в культуре клетокего под влиянием полидисульфида галловой кислоты,ацикловира (АЦ) и фосфоноуксусной кислоты (ФК) Препарат Полидисульфид галловой кислоты х) Ацикловир Фосфоноуксусная кислота Контроль АЦрез ФКрез ТитрРазность ТитрРазность ТитрРазность ХТИ ХТИ ХТИ БОЕ/мл с контр. БОЕ/мл с контр. БОЕ/мл с контр. 4,0 2,0 4 4,3 1,9 4 2,6 3,2 4 4,4 1,6 5 4,6 1,6 5 2,8 3,0 5 4,8 1,2 10 5,1 1,1 4 4,2 1,6 10 5,2 0,8 0 6,0 0,2 4 5,8 0 4 2,0 4,0 100 6,4 0,2 0 2,0 3,8 100 х) полидисульфид галловой кислоты известен как биоантиоксидант 3, препарат против шока 4 и пневмонии 5, для профилактики и лечения радиационных поражений 6. 6352 1 Источники информации 1. Николаева С.Н., Павлова Н.И., Бореко Е.И. Штаммы вирусов, обладающие лекарственной устойчивостью. Сб. Современные проблемы инфекционной патологии человека Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.