Метиловый эфир (±)7-оксо-7-[2,2-этилендиокси-5-(диметоксикарбонилметил)циклопент-1-ил]гептановой кислоты

Заявляемое соединение представляет собой синтетический аналог 11-дезоксипростагландина Е 1, описываемый структурной формулойХимическое наименование метиловый эфир 7-оксо-7-2,2-этилендиокси-5-(диметоксикарбонилметил)циклопент-1 -ил гептановой кислоты.Известен функциональный аналог - интерлейкин-2 (ронколейкин) человеческий рекомбинантный - полипептид, получаемый биотехнологическим методом. Он стимулирует Т- и В-лимфоциты и макрофаги, усиливает иммунный ответ. Как иммуномодулирующее средство, эффективен в терапии различных заболеваний. Недостатки 1) биодоступен только при введении парентерально 2) для достижения эффекта, сравнимого с действием заявляемого средства, интерлейкин-2 необходимо вводить в более крупных дозах (500 ЗООО мкг внутривенно или подкожно) 3) интерлейкин-2 может вызывать развитие аутоиммуноагрессии, а также гриппоподобный синдром, сердечнососудистую недостаточность 1.Другой функциональный аналог заявляемого соединения - тимоген (глутамилтриптофан) представляет собой пептид, действующий подобно гормонам вилочковой железы. Стимулирует преимущественно Т-лимфоциты, активирует фагоцитарную функцию клеток крови и макрофагов. Показан при иммунодефицитах Т-супрессорного типа. Недостатки 1) биодоступность достигается только при ведении парентерально, т.е. минуя желудочнокишечный тракт 2) вызывает аллергические реакции (отек Квинке), обострение нейродермита, экземы, дисменорею. Побочные эффекты, биодоступность и способ применения обусловлены пептидной структурой иммуномодулятора 1.Следующий функциональный аналог - иммунофан (бионокс) -гексапептид с молекулярной массой 836. Он стимулирует иммунную систему и окислительно-восстановительнь 1 е процессы. Применяют при иммунодефицитных состояниях различной этиологии и в качестве адъюванта при вакцинации взрослых против бактериальных и вирусных инфекций. Недостатки 1) иммунофан эффективен только при парентеральном введении, то есть минуя желудочно-кишечный тракт принятый орально, он не оказывает стимулирующего действия на иммунную систему, что, несомненно, обусловлено его полипептидной структурой 2) пептидная структура вещества обусловливает и его иммуногенность, что чревато опасностью развития аутоиммуноагрессии у определенной категории больных 1.Синтетическим аналогом, имеющим, в отличие от приведенных выше полипептидов,структуру, сходную с Р 6 Е 1, является мизопростол. Он проявляет иммунотропный эффект и по вектору Действия на иммунную систему является депрессантом. Как малотоксичный,но слабый иммунодепрессант используется в комбинации с токсичными иммуносупрессорами типа циклоспорина. В отличие от естественного простагландина Е 1 мизопростол является активным противоязвенным агентом при оральном применении. В дозе 200 мкг 2-4 раза в сутки применяется при эрозивно-язвенном поражении слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, язвах, возникших вследствие применения нестероидных противовоспалительных средств (индометацин, аспирин и др.).Это означает, что изменение структуры природного простагландина Е 1, приведшее К получению мизопростола, позволило рещить такую задачу как устойчивость лекарства при оральном приеме в течение промежутка времени, достаточного для клинического воздействия. Причем главным эффектом данного аналога остается способность заживлять язвы слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кищки, сопутствующим умеренный иммунодепрессивнь 1 й эффект 2. Следовательно, мизопростол по спектру основнь 1 х биологических эффектов не отличается существенно от естественного простагландина Е 1.Прототипом заявляемого соединения является метиловый эфир (1) 6-оксо-6-2,2 этилендиокси-5-(диметоксикарбонилметил)циклопент-1-ил-гептановой кислоты формуль 1 2,3 обладающий умеренной иммуностимулирующей и неспецифической гастропротекторной активностями 3-6.Указанное соединение имеет молекулярную формулу С 19 Н 23 О 9 и молекулярную массу 400,0.Задачей изобретения является получение метилового эфира 7-оксо-7-2,2 этилендиокси-5-(диметоксикарбонилметил)циклопент-1-илгептановой кислоты, обладающего высокой избирательной иммуностимулирующей активностью в сочетании со специфическим защитным влиянием на слизистую оболочку желудка и низкой токсичностью при оральном способе введения в организм.Заявляемое соединение отличается от прототипа тем, что содержит 7-оксокарбоксиалкильную оъ-цепь, близкую к естественным простагландинам, при соотнощении компонентов в структуре С 2 оН 30 О 9 с молекулярной массой 414,4.Оно характеризуется в 5 раз более высоким стимулирующим действием на иммунную систему и идеальной биодоступностью при оральном введении. Это означает, что вещество стабильно в желудочной и кишечной среде и с практической точки зрения может быть использовано в качестве иммунопрофилактического и иммунотерапевтического средства,применяемого самым естественным и доступным путем - орально (в желудок).Заявляемое соединение способно защищать слизистую оболочку желудочнокищечного тракта от повреждающих агентов, ингибирующих циклооксигеназу, что с практической точки зрения означает возможность использования его в качестве специфического средства, обеспечивающего профилактическую защиту от язвенных поражений,вызываемых нестероиднь 1 ми противовоспалительными средствами, и заживление пептических и иных язв желудка и двенадцатиперстной кищки.Сущность изобретения поясняется примером.Пример. К раствору 0,564 г (О,ОО 2 моль) 1,1-этилендиокси-2-(6-метоксикарбонил-1 оксо-гексил)-циклопент-2-ена и 0,396 г (0,003 моль) диметилового эфира малоновой кислоты в абсолютированном метаноле (8 мл) прибавляют постепенно при перемешивании раствор метилата натрия, полученного из 0,069 г (0,003 моль) натрия и 3 мл абс. метанола.Реакционную смесь перемещивают при комнатной температуре в течение 5-6 ч, контролируя течение реакции методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). Метанол удаляют на роторном испарителе, к остатку добавляют воду и нейтрализуют разбавленной соляной кислотой, экстрагируют эфиром. Объединенные органические слои промывают 10 -ным раствором бикарбоната натрия, сущат сульфатом натрия. Полученный послефильтрования от осушителя и упаривания растворителя на роторном испарителе остаток хроматографируют (силикагель 40/ 100), элюирование смесью эфир-гексан, выделяя 0,422 г (51 ) заявляемого соединения в виде масла.Биологическая активность и безопасность заявляемого соединения испытана на доклиническом этапе на линейных и аутбредных мышах, крысах Вистар и аутбредных Морских свинках по стандартным общепринятым методикам 7. Результаты экспериментов обработаны статистически, оценены параметрическим Методом по Стьюденту и представлены в табл. 1-6.В табл. 1 представлены данные, подтверждающие дозозависиМое стимулирующее влияние заявляемого средства на В-клеточный (гуморальный) иммунитет у практически здоровых высокореагирующих на эритроциты барана (ЭБ) мышей линии СВА. МаксиМальная стимуляция иммунного ответа под влиянием заявляемого соединения достигается в дозе 5 Мкг/кг в желудок (в/ж). При этом имеет Место двукратный прирост числа антителообразующих клеток (АОК) на 106 спленоцитов с параллельным увеличением общего количества антителопродуцентов в селезенке и уровня циркулирующих в периферической крови антител.В табл. 2 представлены данные, свидетельствующие о том, что заявляемое соединение стимулирует В-клеточный (гуморальный) иммунитет у мышей линии С 57 В 1/6, характеризующихся низкой иММунореактивностью к антигену - эритроцитам барана. ЗаявляеМое соединение в дозе 5 Мкг/кг в желудок увеличивает В-клеточные параметры иммунного ответа в 1,9-2,6 раза по сравнению с иММунизированныМи контрольными животными. Это означает, что заявляемое соединение способно преодолевать генетически обусловленную низкую иММунореактивность на эритроцитарные антигены, присущую МышаМ линии С 57 В 1/6. Полученные данные дают возможность отнести данное соединение к сильнодействующему иММуностиМулирующеМу агенту.В табл. 3 показано, что заявляемое соединение в дозах 5 и 10 Мкг/кг в желудок стимулирует Т-клеточный иММунный ответ, о чем свидетельствует увеличение индекса реакции гиперчувствительности замедленного типа соответственно на 40-65 у Мышей-гибридов 11(СВАС 57 В 1/6), самок. Результаты тестирования свидетельствуют, что заявляемое соединение проявляет комбинированное действие на иммунную систему, стимулируя как Т-клеточный, так и В-клеточный иммунный ответ.В табл. 4 представлены данные испытания влияния заявляемого соединения на функциональную активность макрофагов. Видно, что данное соединение, вводимое в дозах 2,5 и 5 Мкг/кг в желудок, усиливает на 90-110 спонтанную и хемотаксическую миграцию перитонеальных макрофагов аутбредных Мышей 1 СК. С увеличением дозы заявляемого соединения (до 10 Мкг/кг) эффективность его не возрастает, причем жизнеспособность клеток также не угнетается.Таким образом, заявляемое соединение по механизму действия на иммунную систему характеризуется комбинированным влиянием на Т-лиМфоциты, В-лимфоциты и Макрофаги.Результаты испытания влияния заявляемого соединения на В-клеточный (гуморальный) иммунный ответпри введении его в/ж однократно одновременно с антигеном (х 1 Эх)Результаты испытания влияния заявляемого соединения на В-клеточный (гуморальный) иммунный ответ у мышей-самок линии С 57 В 1/6, иммунизированных ЭБ (5,0 х 107 клеток/мышь, в/б), при введении его в/ж однократно одновременно с антигеном (х 1 Эх)Группа Доза веЩе- Количество Эффект, Количество АОК Эффект Индекс Эффект Титр Гемаг Эффект животных, ства мкг/кг, АОК на 10 , на селезенку,3 , р селезенки , р глютининов , р п 6 в/ж спленоцитов р 1 О