Способ получения настойки зверобоя

(51)61 35/78 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАСТОЙКИ ЗВЕРОБОЯ(71) Заявитель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(72) Авторы Сокол Марина Николаевна Ищенко Владимир Иванович(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(56) Гриненко Н.А. и др. // Фармация. - 1989.3. - С. 13-16. ЕА 000948 В 1, 2000.2067452 С 1, 1996. ЕР 0965348 А 1, 1999. Ищенко В.И. и др. Проблемы современной медицины и фармации Тезисы докладов 53-й научной сессии института. - Витебск, 1998, ч. . - С. 169. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М. Медицина, 1993, ч. . - С. 384.(57) Способ получения спиртовой настойки зверобоя 15, отличающийся тем, что первое настаивание сырья проводят в течение 24 часов 70 этиловым спиртом в соотношении сырьеспирт 1(2,9-3,1), а второе и третье - по 1,5 часа водой в соотношении, соответственно, сырьевода 1(1,9-2,0) и 1(1,7-1,8), спиртовой и водные экстракты объединяют, отстаивают при температуре не выше 8 С не менее 3-х суток и фильтруют. Изобретение относится к фармации и касается нового способа получения настойки зверобоя. Зверобой продырявленный ( ) - это широко известное лекарственное растение. Применяется в виде настойки 15 на 40 спирте в качестве противовоспалительного, вяжущего и антисептического средства при катарах кишечника, колитах, язвах,стоматитах и т.п. Основными действующими веществами этого растения и получаемых из него препаратов являются гиперицин и псевдогиперицин, флавоноиды (гиперозид, рутин,кверцетин), дубильные вещества и др. Известна высокая антибактериальная активность эфирных, спиртовых, ацетоновых и других экстрактов из зверобоя продырявленного. Бактериостатическую и бактерицидную активность проявляют гиперфорин, ксантоны, фенольные гликозиды, флавоноиды, дубильные вещества катехинового типа, эфирные масла (лимонен, цинеол, мирцен, п-цимол, камфора и др.), конденсированные антраценпроизводные,гиперицин, фенолкарбоновые кислоты (кофейная, хлорогеновая и др.). Прототипом данного способа является изготовление настойки зверобоя методом 2-х кратной мацерации 40 спиртом 2. В полученной этим классическим способом настойке зверобоя при хранении, даже непродолжительном, выделяется осадок. Изучено, что основную долю осадка составляет кверцетин. Образованию и выпадению осадка способствуют гидролитические ферменты 1. В связи с этим можно предположить, что подавление активности ферментов, вызывающих гидролиз гликозидов и последующее выпадение в осадок нерастворимых агликонов, будет способствовать повышению устойчивости настойки зверобоя. 8087 1 2006.06.30 Задачей изобретения является разработка способа получения устойчивой, без образования и выпадения осадка, настойки зверобоя путем денатурации гидролитических ферментов. Поставленная задача реализуется 3-х кратной мацерацией сырья, причем при первой мацерации используется как экстрагент более крепкий 70 этиловый спирт в соотношении сырьеэкстрагент 12,9-3,1. 70 спирт лучше, чем 40 извлекает всю гамму действующих веществ, одновременно вызывая потерю активности гидролитических ферментов. Вторую и третью мацерацию проводят водой очищенной, заливая 1,9-2,0 - и 1,7-1,8 - кратным количеством соответственно по отношению к массе сухого сырья с таким расчетом, чтобы в конечном счете получить настойку зверобоя с крепостью спирта 37-38(в соответствии с требованиями ФС 42-420-99 3 крепость спирта должна быть не ниже 36 ). Способ осуществляется следующим образом траву зверобоя в количестве 20,8 кг плотно загружают в перколятор, заливают 63 кг 70 спирта и оставляют настаиваться на 24 часа. На следующий день открывают кран и получают первый слив в максимально возможном количестве. Сырье заливают водой очищенной до зеркала (40 кг) и оставляют на 1,5 часа. По истечении этого времени получают второй слив. Сырье еще раз заливают водой (35 кг) и оставляют на 1,5 часа. Производят третий слив. Сливы объединяют. Настойку отстаивают в течение не менее 3 суток при температуре не выше 8 С. После отстаивания настойку анализируют в соответствии с требованиями ФС 42-420-99 3. При удовлетворительном результате контрольного анализа настойку фильтруют. При соблюдении вышеуказанных условий в указанном интервале выход готового продукта удовлетворительного качества составляет не менее 100 кг. В сырье остается некоторое количество спирта. Уменьшить потери можно рекуперацией спирта водой или водяным паром. В настойках зверобоя некоторых серий, полученных вышеупомянутым способом,иногда возможно выпадение крайне небольшого количества осадка, что является следствием старения любых настоек и денатурацией и выпадением в осадок балластных веществ настойки. Готовая настойка представляет собой красновато-коричневую прозрачную жидкость с характерным запахом и горьким вкусом. Антимикробную активность настойки, полученной по предлагаемой технологии, сравнивали с активностью заводской настойки. Для приготовления настоек зверобоя использовали следующее сырье траву зверобоя серии 360301 НПК Биотест, г. Гродно (настойка 1),траву зверобоя серии 211100 Падис С, г. Минск (настойка 2),траву зверобоя серии 170501 АО Лектравы, г. Житомир (настойка 3),траву зверобоя серии 256 аптеки164, г. Витебск (настойка 4). Полученные настойки соответствовали требованиям ФС 42-420-99 3. В качестве образца для сравнения использовали настойку зверобоя, произведенную на Краснодарской фармацевтической фабрике. Антимикробное действие настойки зверобоя обусловлено комплексом действующих веществ, различных по своей структуре, поэтому ее активность оценивали по величине массы сухого остатка, которая идет на подавление роста микроорганизмов. Для исследования антимикробной активности препаратов зверобоя использовали стандартные референс штаммы (. О-26, .25923) и клинические изоляты, полученные на базе бактериологической лаборатории Республиканского центра Инфекция в хирургии. Для выделения стафилококков использовали желточно-солевой агар с азидом натрия, для кишечной группы бактерий - среду Эндо с генциан-фиолетовым. Псевдомонады выделяли на среде ЦПХ, посев на микробы группы протея производили по методу Шукевича. Идентификацию аэробных, факультативно-анаэробных и микроаэрофильных микроорганизмов проводили с помощью тест-систем на автоматизированном, биохимическом анализаторе АТВфирмыс использованием тест-систем. Оценку 2 8087 1 2006.06.30 чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам проводили методом стандартных бумажных дисков на плотной питательной среде согласно рекомендациям С.М. Навашина и И.П. Фоминой. В качестве клинических изолятов использовали 4 штамма . , 3 штамма коагулазоотрицательных стафилококков (среди них . , . ., . ),6 штаммов энтеробактерий (из них 2 шгамма . , по 1-К. , Е. , Р. ), 5 штаммов Р. . Антимикробную активность препаратов исследовали методом разведений на плотной питательной среде - мясопептонном агаре (МПА). Для исследований использовали чистые культуры микроорганизмов после 24 ч инкубации при 37 С на косом МПА. Стандартную бактериальную суспензию готовили на стерильном изотоническом растворе натрия хлорида. Для этого бактериологической петлей вносили исследуемую культуру в пробирку или флакон с 2 мл стерильного физиологического раствора и доводили оптическую плотность раствора до 0,5 путем сравнения со стандартом оптической плотности, что соответствует 1,5108 КОЕ/мл. Исследуемые объекты смешивали с расплавленным и остуженным до 56 С МПА и в конечных разведениях 14, 18, 110, 116, 132 разливали в чашки Петри, которые делили на сектора и нумеровали. На сектора с номерами высевали автоматической пипеткой по 5 мкл(7,5105 КОЕ) исследуемых культур микроорганизмов. После 24 часовой инкубации в термостате при 37 С оценивали рост микроорганизмов в каждом секторе. В качестве контроля ставили питательные среды с добавлением спирта 40 в том же разведении, что и исследуемые настойки. Учет результатов проводили по наличию или отсутствию роста бактерий в зоне посева с номером культуры в сопоставлении с контрольным посевом. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) рассчитывали по последнему разведению препарата, который подавлял рост исследуемого штамма микроорганизма. По результатам учета рассчитывали МПК (в мг/мл среды) в пересчете на сухой остаток. Результаты исследования приведены в таблице. Результаты исследования антимикробной активности настоек зверобоя,полученных новым способом Образцы настоек М Максимум Минимум Р для средних величин 1 2,560,12 3,00 1,90 Р 1-20,66 Р 1-30,10 2 2,660,19 3,90 1,90 Р 1-40,16 1-К 0,001 3 2,970,21 4 50 2,25 Р 2-30,28 Р 2-40,45 4 2,850,16 3,63 1,81 Р 2-К 0,001 Р 3-40,64 Контроль 3,850,21 3,63 2,45 Р 3-К 0,01 Р 4-К 0,001 Из данных таблицы видно, что настойка зверобоя, полученная предлагаемым нами способом, обладает выраженным антимикробным действием, превосходящим аналогичную настойку производства Краснодарской фабрики. Источники информации 1. Гриненко Н.А., Шишкин Н.А., Фурса Н.С. Флавоноиды и антраценпроизводные настойки зверобоя // Фармация. - 1989,3. - С. 13. 2. Инструктивные материалы 5. Сборник производственных регламентов на галеновые препараты, выпуск/ Под ред. О.И. Беловой, Ю.Г. Таркман. - Москва, 1970. - С. 26(прототип). 3. ФС 42-420-99. Настойка зверобоя. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3