Способ предотвращения отека клеток нервной ткани первичных или перевиваемых культур

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ОТЕКА КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ПЕРВИЧНЫХ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КУЛЬТУР(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Жук Ольга Николаевна Никандров Виталий Николаевич Гронская Раиса Ивановна Полукошко Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Биомедицинская химия, 2008. Т. 54. Вып. 2. - С. 192200. НИКАНДРОВ В.Н. и др. Морфология,2005. - Т. 128. -5. - С. 33-36. НИКАНДРОВ В.Н. и др. Ученые записки учреждения образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины. Т. 42. Вып. 2. Ч. 2. - 2006. С. 179-181.10290 1, 2008.(57) Способ предотвращения отека клеток нервной ткани первичных или перевиваемых культур при инкубировании в течение 1,5 часов в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду , разведенную до содержания в ней 0,45 , в атмосфере с 5 -ным содержанием СО 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С, заключающийся в том, что в гипотоническую среду добавляют стрептокиназу до концентрации от 20 до 2000 МЕ/мл. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани. Заявителю не известен наиболее близкий аналог, касающийся способа предотвращения отека клеток нервной ткани первичных и перевиваемых культур, развивающегося при их содержании в гипотонический питательной среде. Задачей заявляемого способа является создание способа предотвращения осмотического отека клеток нервной ткани первичных и перевиваемых культур при их содержании в гипотонический среде. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ предотвращения отека клеток нервной ткани первичных и перевиваемых культур при инкубировании в течение 1,5 часов в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду , разведенную до содержания в ней 0,45 в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С, заключающийся в том,16744 1 2013.02.28 что в гипотоническую среду добавляют стрептокиназу до концентрации от 20 до 2000 МЕ/мл. Стрептокиназа, протеин молекулярной массой 47-55 кДа, синтезируется гемолитическими стрептококками серологических групп ,ии является одним из наиболее эффективных активаторов плазминогена человека и отдельных видов животных,однако лишена собственной протеолитической или иной гидролазной активности. Роль стрептокиназы остается неясной. В настоящее время установлено, что стрептокиназа обладает супероксидконвергирующей способностью 1. Введение стрептокиназы в концентрации 20-2000 МЕ/мл позволяет предотвратить осмотический отек клеток первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани, развивающийся при содержании их в гипотонический питательной среде. Пример 1. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома С 6) плотностью 2,03,0104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду , разведенную до содержания в ней 0,45 , в которую добавляют стрептокиназу 200 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же гипотонической питательной среде. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45), синтетической питательной среде 50 клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличивается на 33(контроль). При внесении в гипотоническую (0,45) питательную среду стрептокиназы(200 МЕ/мл) гибель клеток составляет 7 , объем сохранившихся клеток увеличен только на 12(опыт). Пример 2. Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду , разведенную до содержания в ней 0,45 , с добавлением стрептокиназы 2000 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в гипотонический питательной среде. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45) синтетической питательной средепогибает 47 клеток, в оставшихся развивается гидратация(отек). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 23(контроль). При внесении в питательную среду стрептокиназы (2000 МЕ/мл) погибает 11 клеток, объем клеток увеличен на 12(опыт). Пример 3. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6), выращенную на синтетической питательной среде , высевают плотностью 2,0-3,0104 клеток/см 2 на пластиковые чашки Петри и культивируют их в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду , разведенную до содержания в ней 0,45 , в которую добавляют стрептокиназу - 20 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же гипотонической питательной среде. 16744 1 2013.02.28 С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45) синтетической питательной среде 50 клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличивается на 33(контроль). При внесении в гипотоническую (0,45) питательную среду стрептокиназы(20 МЕ/мл) гибель клеток составляет 29 , объем сохранившихся клеток увеличен только на 19(опыт). Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет предотвратить осмотический отек клеток первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани, развивающийся при содержании их в гипотонической питательной среде. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной биологии и медицине. Источники информации 1. Никандров В.Н., Пыжова Н.С. Регуляторные белки функциональные свойства молекул и механизмы их биологического действия // Весц НАН Беларус. Сер. мед.-бял. навук. - 2003. -3. - С. 75-89. 2. Жук О.Н., Калюнов В.Н., Гулецкая Е.Н. Морфометрический анализ симпатических нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора и гуанетидина // Весц АН БССР. Сер. бял. навук. - 1986. -1. - С. 56-60. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3