Способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от развития токсического отека, инициируемого ионами Mn2+

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЗАЩИТЫ ПЕРВИЧНОЙ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ РАЗВИТИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ОТЕКА, ИНИЦИИРУЕМОГО ИОНАМИ 2(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Жук Ольга Николаевна Никандров Виталий Николаевич Гронская Раиса Ивановна Полукошко Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Механизмы функционирования висцеральных систем.Всероссийская конференция с международным участием. Тезисы докладов. - Санкт-Петербург, 2005. С. 174-175. НИКАНДРОВ В.Н. и др. Достижения медицинской науки Беларуси. Вып., 2002. - С.49-50. ЖУК В.М. и др. Весц Акадэм навук БССР. Серыя бялагчных навук. 1986. -1. - С. 56-60.(57) Способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от развития токсического отека при культивировании в питательной среде в присутствии ионов 2, заключающийся в том, что используют питательную среду, содержащую плазминоген в концентрации 10-7-10-6 М. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани. Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся способа защиты культивируемых клеток от развития токсического отека, инициируемого ионами марганца . Задачей заявляемого изобретения является создание способа защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца . Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от развития токсического отека при культивировании в питательной среде в присутствии ионов М 2, заключающийся в том, что используют питательную среду, содержащую плазминоген в концентрации 10-7-10-6 М. Плазминоген представляет собой гликопротеин молекулярной массой 85 кДа. Наиболее известна его функция в процессе фибринолиза. Плазминоген также обнаружен в нерв 16399 1 2012.10.30 ной ткани, где показан его синтез клетками микроглии 1. Введение его в питательную среду позволяет ускорить формирование зоны роста органотипической культуры нервной ткани 2. Введение плазминогена (10-7-10-5 М) позволяет осуществить протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца . Пример 1. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6) плотностью 2,03,0104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде , куда добавляют хлористый марганец в концентрации 10-4 М и плазминоген (10-6 М), в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры, которые культивируют в такой же синтетической питательной среде в присутствии 10-4 М 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 3. При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-4 М 2 70 клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 25(контроль). При внесении в питательную среду плазминогена (10-6 М) гибель клеток составляет около 10 , объем клеток увеличен на 14(опыт). Пример 2. Первичная культура клеток нервной ткани. Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их в синтетической питательной среде , куда добавляют хлористый марганец в концентрации 10-4 М и плазминоген (10-6 М), в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 10-4 М 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема 3. С помощью камеры Горяева подсчитывают общее количество клеток. При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-4 М 2 75 клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 28(контроль). При внесении в питательную среду плазминогена (10-6 М) погибает 17 клеток, объем клеток увеличен на 8(опыт). Пример 3. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6) плотностью 2,03,0104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде , куда добавляют хлористый марганец в концентрации 10-4 М и плазминоген (10-7 М), в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры, которые культивируют в такой же синтетической питательной среде в присутствии 10-4 М 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2, 3. 16399 1 2012.10.30 При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-4 М 2 70 клеток погибает, а в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 25(контроль). При внесении в питательную среду плазминогена (10-7 ) гибель клеток составляет 22 , объем клеток увеличен на 17(опыт). Пример 4. Первичная культура клеток нервной ткани. Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их в синтетической питательной среде , куда добавляют хлористый марганец в концентрации 10-4 М и плазминоген (10-7 М), в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 10-4 М 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема 2, 3. С помощью камеры Горяева подсчитывают общее количество клеток. При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-4 М 2 75 клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 28(контроль). При внесении в питательную среду плазминогена (10-7 М) погибает 25 клеток, объем клеток увеличен на 14(опыт). Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет защитить первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной биологии и медицине. Источники информации.К.,К.,К.,.,.//. - 1992. - . 308. - . 179-182. 2. Патент РБ 8301, МПК 712 5/06, 2003. 3. Жук О.Н., Калюнов В.Н., Гулецкая Е.Н. Морфометрический анализ симпатических нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора и гуанетидина // Весц АН БССР. Сер. бял. навук. - 1986. -1. - С. 56-60. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3