Способ предотвращения осмотического отека клеток первичной или перевиваемой культуры нервной ткани при культивировании их в гипотонической питательной среде

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ОСМОТИЧЕСКОГО ОТЕКА КЛЕТОК ПЕРВИЧНОЙ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЫ НЕРВНОЙ ТКАНИ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ИХ В ГИПОТОНИЧЕСКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Жук Ольга Николаевна Никандров Виталий Николаевич Гронская Раиса Ивановна Полукошко Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(56)10290 1, 2008. ЖУК В.М.др. Весц Акадэм навук БССР. Серыя бялагчных навук. - 1986.1. - С. 56-60.(57) Способ предотвращения развития осмотического отека клеток первичной или перевиваемой культуры нервной ткани при культивировании их в гипотонической синтетической питательной среде, содержащей 0,45, заключающийся в том, что в указанную среду добавляют фактор роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл и культивируют клетки в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию перевиваемых и первичных культур клеток нервной ткани. Заявителю не известен наиболее близкий аналог, касающийся способа предотвращения осмотического отека клеток перевиваемых и первичных культур клеток нервной ткани, развивающегося при содержании их в гипотонической питательной среде. Задачей заявляемого способа является предотвращение развития осмотического отека клеток первичной или перевиваемой культуры нервной ткани при культивировании их в гипотонической питательной среде, содержащей 0,45. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ предотвращения развития осмотического отека клеток первичной или перевиваемой культуры нервной ткани при культивировании их в гипотонической питательной среде, содержащей 0,45,заключающийся в том, что в указанную среду добавляют фактор роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл и культивируют клетки в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. Фактор роста нервов - протеин молекулярной массой 116-140 кДа - относится к семейству полипептидных биорегуляторов, контролирующих на ауто-, пара- и эндокринном уровнях выживаемость, дифференцировку, поддержание функциональной активности 15815 1 2012.04.30 практически всех клеток развивающегося и зрелого организма. Он обладает нейротрофической активностью и обслуживает такие важные функции в нервной ткани, как индукция выроста нейритов, ориентация растущих нейритов по направлению к источнику фактора роста нервов и способствование выживанию нервных клеток 1. Пример 1. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6), выращенную на синтетической питательной среде , высевают плотностью 2,0-3,0104 клеток/см 2 на пластиковые чашки Петри и культивируют их в гипотонической питательной среде( - 5 мМ,- 5,4 мМ, 4 - 1,2 мМ, 24 - 1,2 мМ, 2 - 2 мМ, глюкоза 10 мМ,- 0,45 г/л) с добавлением фактора роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды. В качестве контроля используют сестринские культуры, которые помещают в эту же гипотоническую синтетическую питательную среду без добавления фактора роста нервов. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При инкубировании исследуемых клеток в контрольной гипотонической питательной среде наступает гибель 50 клеток, в оставшихся живых развивается гидратация (отек). Эти клетки набухают их объем увеличивается на 33 . При внесении в гипотоническую (0,45 г/л ) питательную среду фактора роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды гибель клеток составляет 17 ,объем сохранившихся клеток увеличен только на 10(опыт). Пример 2. Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их в гипотонической синтетической питательной среде(разведенной 12 стерильной дистиллированной водой, при этом концентрацияуменьшалась вдвое и составляла 0,45 ) с добавлением фактора роста нервов в конечной концентрации 100 нг/мл питательной среды. В качестве контроля используют сестринские культуры, которые помещают в эту же гипотоническую синтетическую питательную среду без добавления фактора роста нервов. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При инкубировании исследуемых клеток в контрольной гипотонической питательной среде наступает гибель 47 клеток, в оставшихся живых развивается гидратация (отек). Эти клетки набухают их объем увеличивается на 23 . При внесении в гипотоническую (0,45 г/л ) питательную среду фактора роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды гибель клеток составляет 13 ,объем сохранившихся клеток увеличен только на 11(опыт). Источники информации 1. Калюнов В. Н. Фактор роста нервной ткани. - Минск, 1984. - С. 169-173. 2. Жук О.Н., Калюнов В.Н., Гулецкая Е.Н. Морфометрический анализ симпатических нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора и гуанетидина // Весц АН БССР Сер. бял. навук. - 1986. -1. - С. 56-60. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 2