Способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от развития токсического отека, инициируемого ионами Mn2+

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЗАЩИТЫ ПЕРВИЧНОЙ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ РАЗВИТИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ОТЕКА, ИНИЦИИРУЕМОГО ИОНАМИ 2(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Жук Ольга Николаевна Никандров Виталий Николаевич Гронская Раиса Ивановна Полукошко Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(56)10290 1, 2008. ЖУК В.М. и др. // Весц Акадэм навук БССР. Серыя бялагчных навук.(57) Способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от развития токсического отека, инициируемого 10-42, заключающийся в том, что к клеткам, которые культивируют в синтетической питательной среде , содержащей 2, в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С, добавляют фактор роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичной и перевиваемой культур клеток нервной ткани, и позволяет защищать указанные культуры от развития токсического отека, инициируемого ионами 2 марганца. Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся способа защиты культивируемых клеток от развития токсического отека, инициируемого ионами марганца. Задачей заявляемого способа является создание способа защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичной и перевиваемой культур клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого 10-42, заключающийся в том, что к клеткам, которые культивируют в синтетической питательной среде , содержащей 2, в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С, добавляют фактор роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл. Фактор роста нервов - протеин молекулярной массой 116-140 кДа - относится к семейству полипептидных биорегуляторов, контролирующих на ауто-, пара- и эндокринном уровнях выживаемость, дифференцировку, поддержание функциональной активности практически всех клеток развивающегося и зрелого организма. Он обладает нейротрофической активностью и обслуживает такие важные функции в нервной ткани, как индукция 15378 1 2012.02.28 выроста нейритов, ориентация растущих нейритов по направлению к источнику фактора роста нервов и способствование выживанию нервных клеток 1. Введение фактора роста нервов в конечной концентрации 50-100 нг/мл питательной среды позволяет осуществлять протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца. Пример 1 Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6) плотностью(2,0-3,0) 10 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной средес добавлением хлористого марганца 10-4 и фактора роста нервов в конечной концентрации 100 нг/мл питательной среды. В качестве контроля используют сестринские культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 10-42. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-42 70 клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 25(контроль). При внесении в питательную среду совместно с 10-42 фактора роста нервов в конечной концентрации 100 нг/мл питательной среды гибель клеток составляет 8 , объем клеток увеличен только на 9(опыт). Пример 2 Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью (2,5-3,0) 104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их в синтетической питательной средес добавлением хлористого марганца 10-4 М и фактора роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 10-42. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-42 75 клеток погибает, в оставшихся развивается отек. Клетки набухают - объем клеток увеличен на 28(контроль). При внесении в питательную среду фактора роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл погибает 18 клеток, объем клеток увеличен на 12(опыт). Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет осуществлять протекцию клеток первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной биологии и медицине. Источники информации 1. Калюнов В.Н. Фактор роста нервной ткани. - Мн., 1984. - С. 169-173. 2. Жук О.Н. Морфометрический анализ симпатических нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора и гуанетидина / О.Н.Жук,В.Н.Калюнов, Е.Н.Гулецкая // Весц АН БССР. Сер. бял. навук. - 1986. -1. - С. 56-60. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.