Способ защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от дегидратации при содержании их в гипертонической питательной среде

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЗАЩИТЫ ПЕРВИЧНОЙ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ ДЕГИДРАТАЦИИ В ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ СРЕДЕ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Жук Ольга Николаевна Никандров Виталий Николаевич Гронская Раиса Ивановна Полукошко Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Механизмы функционирования висцеральных систем.Всероссийская конференция с международным участием. Тезисы докладов. - Санкт-Петербург, 2005. С. 174-175. НИКАНДРОВ В.Н. и др. Достижения медицинской науки Беларуси, 2002. Вып. . - С.49-50. ЖУК В.М. и др. Весц Акадэм навук БССР. Серыя бялагчных навук. 1986. -1. - С.56-60.(57) Способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической среде, представляющей собой питательную средус 2, заключающийся в том, что используют гипертоническую среду, содержащую плазминоген в концентрации 10-7-10-5 М. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани. Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся способа защиты культивируемых клеток от дегидратации, происходящей при содержании их в гипертонической питательной среде. Задачей заявляемого изобретения является создание способа защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от дегидратации, происходящей при содержании их в гипертонической питательной среде. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической питательной среде, представляющей собой питательную средус 2, заключающийся в том, что используют гипертоническую среду, содержащую плазминоген в концентрации 10-7-10-5 М. 16400 1 2012.10.30 Плазминоген представляет собой гликопротеин массой 85 кДа. Наиболее известна его функция в процессе фибринолиза. Плазминоген также обнаружен в нервной ткани, где показан его синтез клетками микроглии 1. Введение его в питательную среду позволяет ускорить формирование зоны роста органотипической культуры нервной ткани 2. Введение плазминогена (10-7-10-5 М) позволяет защищать первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от дегидратации, происходящей при содержании их в гипертонической питательной среде. Пример 1. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6) плотностью (2,03,0)104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной средедо формирования хорошо развитого монослоя (7 суток),затем помещают их в такую же питательную среду с добавлением 2) и плазминогена в концентрации 10-6 М с последующей инкубацией в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры с хорошо развитым монослоем, которые помещают в гипертоническую (2) синтетическую питательную среду без добавления плазминогена. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток 2. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) вызывает перестройку организации хорошо развитой монослойной культуры. Часть клеток (18 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. При внесении в питательную средуодновременно с хлористым натрием плазминогена 10-6 М и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их отростков. Полученные результаты свидетельствуют, что плазминоген способен влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 ) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки. Пример 2. Первичная культура клеток нервной ткани. Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью (3,0-4,0)104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их в синтетической питательной средедо образования хорошо развитого монослоя (7 суток). Затем помещают их в такую же питательную среду с добавлением 2) и плазминогена в концентрации 10-6 М с последующей инкубацией в атмосфере с 5 -ным содержанием С 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры с хорошо развитым монослоем, которые помещают в гипертоническую (2) синтетическую питательную среду без добавления плазминогена. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток 2. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) вызывает перестройку организации хорошо развитой монослойной культуры. Часть клеток (22 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся 2 16400 1 2012.10.30 вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. При внесении в питательную средуодновременно с хлористым натрием плазминогена 10-6 М и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их отростков. Пример 3. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6) плотностью (2,03,0)104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной средедо формирования хорошо развитого монослоя (7 суток),затем помещают их в такую же питательную среду с добавлением 2) и плазминогена в концентрации 10-7 М с последующей инкубацией в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры с хорошо развитым монослоем, которые помещают в гипертоническую (2) синтетическую питательную среду без добавления плазминогена. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 48 ч культивирования и учитывают количество клеток 2. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) вызывает перестройку организации хорошо развитой монослойной культуры. Часть клеток (18 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 48 ч на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. Площадь клеток уменьшается на 44 . При внесении в питательную средуодновременно с хлористым натрием плазминогена 10-7 М и экспозиции в течение 48 ч монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их отростков, площадь клеток уменьшается на 18 . Пример 4. Первичная культура клеток нервной ткани. Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью (3,0-4,0)104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их в синтетической питательной средедо образования хорошо развитого монослоя (7 суток). Затем помещают их в такую же питательную среду с добавлением 2) и плазминогена в концентрации 10-5 М с последующей инкубацией в атмосфере с 5 -ным содержанием С 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры с хорошо развитым монослоем, которые помещают в гипертоническую (2) синтетическую питательную среду без добавления плазминогена. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 48 ч культивирования и учитывают количество клеток 2. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) вызывает перестройку организации хорошо развитой монослойной культуры. Часть клеток (22 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между со 3 16400 1 2012.10.30 бою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 48 ч на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. Площадь клеток уменьшается на 40 . При внесении в питательную средуодновременно с хлористым натрием плазминогена 10-5 М и экспозиции в течение 48 ч монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их отростков, площадь клеток уменьшается на 2 . Полученные результаты свидетельствуют о том, что плазминоген способен влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 ) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки. Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет защитить первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от дегидратации, происходящей при содержании их в гипертонической питательной среде. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной биологии и медицине. Источники информации 1..,.,.,.,.//. - 1992. - . 308. - . 179-182. 2. Патент РБ 8301, МПК 712 5/06, 2003. 3. Жук О.Н., Калюнов В.Н., Гулецкая Е.Н. Морфометрический анализ симпатических нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора и гуанетидина // Весц АН БССР. Сер. бял. навук. - 1986. -1. - С. 56-60. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4