Способ защиты первичных или перевиваемых культур клеток нервной ткани от развития токсического отека при культивировании в синтетической питательной среде в присутствии ионов марганца

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЗАЩИТЫ ПЕРВИЧНЫХ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КУЛЬТУР КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ РАЗВИТИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ОТЕКА ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ В СИНТЕТИЧЕСКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ В ПРИСУТСТВИИ ИОНОВ МАРГАНЦА(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Жук Ольга Николаевна Никандров Виталий Николаевич Гронская Раиса Ивановна Полукошко Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. // Ученые записки УО ВГАВМ. - 2006. - Т. 42. Вып. 2, ч. 2. - С. 179-181. НИКАНДРОВ В.Н. и др. // Биомедицинская химия. - 2008. - Т. 54. - Вып. 2. С. 192-200. НИКАНДРОВ В.Н. и др. // Морфология. - 2005. - Т. 128. -5. - С. 33-36.8876 1, 2007.94030310 1, 1996.2002111335 1, 2003.2034026 1, 1995.2008/0103101 1.2007/130575 2.2009/0023210 1.(57) Способ защиты первичных или перевиваемых культур клеток нервной ткани от развития токсического отека при культивировании в синтетической питательной среде в присутствии ионов марганца, при котором культуру клеток вносят в синтетическую питательную среду, содержащую биологически активную субстанцию, в качестве которой используют стрептокиназу в концентрации 20-2000 МЕ/мл, и инкубируют при температуре 37 С в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани, и позволяет защищать указанные культуры от развития токсического отека, инициируемого ионами марганца, за счет того,что в качестве биологически активной субстанции используют стрептокиназу в концентрации 20-2000 МЕ/мл. Заявителю не известен наиболее близкий аналог, касающийся способа защиты культивируемых клеток от развития токсического отека, инициируемого ионами марганца. Задачей заявляемого способа является создание способа защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца. 14810 1 2011.10.30 Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от развития токсического отека при культивировании в синтетической питательной среде в присутствии ионов марганца, при котором культуру клеток вносят в синтетическую питательную среду, содержащую биологически активную субстанцию, в качестве которой используют стрептокиназу в концентрации 202000 МЕ/мл, и инкубируют при температуре 37 в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью. Стрептокиназа, протеин молекулярной массой 47-55 кДа, синтезируется -гемолитическими стрептококками серологических групп ,ии является одним из наиболее эффективных активаторовчеловека и отдельных видов животных, однако лишена собственной протеолитической или иной гидролазной активности 1. Рольостается неясной. В настоящее время установлено, чтообладает супероксидконвергирующей способностью. Связь супероксид-конвергирующей способностис ее -активаторной функцией представляется весьма вероятной, учитывая полное подавление последней перехватчиками супероксидного радикала 1. Введение стрептокиназы в концентрации 20-2000 МЕ/мл позволяет защищать первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца. Пример 1 Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6) плотностью 2,0-3,0104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в течение 24 часов в синтетической питательной средес добавлением хлористого марганца 10-4 и стрептокиназы 200 МЕ/мл в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 . В качестве контроля используют культуры, которые культивируют в такой же синтетической питательной среде в присутствии 10-4 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-42 70 клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 25(контроль). При внесении в питательную среду совместно с 10-42 стрептокиназы(200 МЕ/мл) гибели клеток не отмечается, объем клеток увеличен только на 7(опыт). Пример 2 Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их в течение 24 часов в синтетической питательной средес добавлением хлористого марганца 10-4 и стрептокиназы. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 10-4 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 24 часа культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в питательной среде с 10-42 75 клеток погибает, в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 28(контроль). При внесении в питательную среду стрептокиназы (2000 МЕ/мл) погибает 14 клеток, объем клеток увеличен на 8(опыт). 14810 1 2011.10.30 Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет защитить первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от токсического отека, инициируемого ионами марганца. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной биологии и медицине. Источники информации 1. Никандров, В.Н. Регуляторные белки функциональные свойства молекул и механизмы их биологического действия / В.Н.Никандров, Н.С.Пыжова // Весц НАН Беларус. Сер. мед.-бял. навук. - 2003. -3. - С. 75-89. 2. Жук О.Н. Морфометрический анализ симпатических нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора и гуанетидина / О.Н.Жук,В.Н.Калюнов, Е.Н.Гулецкая // Весц АН БССР. Сер. бял. навук. - 1986. -1. - С. 56-60. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3