Способ защиты клеток первичных или перевиваемых культур нервной ткани от осмотического отека

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЗАЩИТЫ КЛЕТОК ПЕРВИЧНЫХ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КУЛЬТУР НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ ОСМОТИЧЕСКОГО ОТЕКА(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Жук Ольга Николаевна Никандров Виталий Николаевич Гронская Раиса Ивановна Полукошко Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Биомедицинская химия, 2008. Т. 54. Вып. 2. С. 192-200. РОМАНОВСКАЯ А. и др. Наука и инновации. - 2007. -3. - С. 24-27. Руководство по культивированию нервной ткани. - М. Наука, 1988. - С. 3742.(57) Способ защиты клеток первичных или перевиваемых культур нервной ткани от осмотического отека при инкубировании в течение 1,5 ч в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду , разведенную до содержания в ней 0,45 , в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С, заключающийся в том, что в гипотоническую среду добавляют плазминоген до концентрации 10-7-10-5 М. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани. Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся способа осуществления защиты культивируемых клеток от осмотического отека, развивающегося при содержании их в гипотонической питательной среде. Задачей заявляемого изобретения является создание способа защиты клеток первичных и перевиваемых культур нервной ткани от осмотического отека при содержании их в гипотонической питательной среде. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты клеток первичных или перевиваемых культур нервной ткани от осмотического отека при инкубировании в течение 1,5 ч в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду , разведенную до содержания в ней 0,45 , в атмосфере с 5 -ным содержанием С 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С, заключающийся в том, что в гипотоническую среду добавляют плазминоген в концентрации 10-710-5 М. Плазминоген представляет собой гликопротеин молекулярной массой 85 кДа. Наиболее известна его функция в процессе фибринолиза. Плазминоген также обнаружен в нерв 16745 1 2013.02.28 ной ткани, где показан его синтез клетками микроглии 1. Введение его в питательную среду позволяет ускорить формирование зоны роста органотипической культуры нервной ткани 2. Введение плазминогена в концентрации (10-7-10-5 М) позволяет осуществить протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от осмотического отека,развивающегося при содержании их в гипотонической питательной среде. Пример 1. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома С 6) плотностью 2,03,0104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде , разведенной до содержания в ней 0,45 , с добавлением плазминогена в концентрации 10-6 М в атмосфере с 5 -ным содержанием С 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры,которые выращивают в синтетической питательной среде , разведенной до содержания в ней 0,45 . С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 ч культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 3. При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45) синтетической питательной среде 50 клеток погибают, а в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличивается на 33(контроль). При внесении в питательную среду плазминогена (10-6 М) гибель клеток составляет около 20 , объем клеток увеличен на 14(опыт). Пример 2. Первичная культура клеток нервной ткани. Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, полученную суспензию с плотностью 2,0-3,0104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде , разведенной до содержания в ней 0,45 , с добавлением плазминогена в концентрации 10-6 М в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в синтетической питательной среде ,разведенной до содержания в ней 0,45 . С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 ч культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45) синтетической питательной средепогибает 47 клеток, а в оставшихся развивается отек (гидратация). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 23(контроль). При внесении в питательную среду плазминогена (10-6 М) погибает 14 клеток, объем оставшихся клеток увеличен на 12(опыт). Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет осуществлять протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от осмотического отека, развивающегося при содержании их в гипотонической питательной среде. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной биологии и медицине. Пример 3. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6), выращенную на синтетической питательной среде , высевают плотностью 2,0-3,0104 клеток/см 2 на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде ,разведенной до содержания в ней 0,45 , с добавлением плазминогена в концентрации 10-7 М. 2 16745 1 2013.02.28 В качестве контроля используют сестринские культуры, которые помещают в эту же гипотоническую синтетическую питательную среду без добавления плазминогена. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 ч культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема 3 и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45) синтетической питательной среде 50 клеток погибают, а в оставшихся развивается гидратация (отек). Клетки набухают - объем клеток увеличивается на 33(контроль). Пример 4. Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их в синтетической питательной среде , разведенной стерильной дистиллированной водой до концентрации 0,45 , с добавлением плазминогена в концентрации 10-5 М в атмосфере с 5 -ным содержанием С 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в гипотонический (0,45) питательной среде. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 ч культивирования. Измеряют наибольший и наименьший диаметры клеток для определения их объема 3 и учитывают количество клеток 2. При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45) синтетической питательной средепогибает 47 клеток, а в оставшихся развивается отек (гидратация). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 23(контроль). При внесении в питательную среду плазминогена (10-5 М) погибает 11 клеток, объем оставшихся клеток увеличен на 9(опыт). Источники информации.К.,К.,К.,.,.//. - 1992. - . 308. - . 179-182. 2. Патент РБ 8301, МПК 7 С 12 5/06, 2003. 3. Жук О.Н., Калюнов В.Н., Гулецкая Е.Н. Морфометрический анализ симпатических нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора и гуанетидина // Весц АН БССР. Сер. бял. навук. - 1986. -1.- С. 56-60. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3