Способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической среде

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЗАЩИТЫ ПЕРВИЧНОЙ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ ДЕГИДРАТАЦИИ В ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ СРЕДЕ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Жук Ольга Николаевна Никандров Виталий Николаевич Гронская Раиса Ивановна Полукошко Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Биомедицинская химия. - 2008. Т. 54. Вып. 2. С. 192-200. НИКАНДРОВ В.Н. и др. Достижения медицинской науки Беларуси. Вып. ,2002. - С. 49-50. РОМАНОВСКАЯ А.А. и др. Доклады Национальной академии наук Беларуси. - 2007. - Т. 51. -2. - С. 57-60.(57) Способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической среде, представляющей собой питательную средус 2, заключающийся в том, что используют гипертоническую среду, содержащую стрептокиназу в концентрации 20-2000 МЕ/мл. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани, и позволяет осуществить протекцию указанных культур от развития дегидратации при содержании их в гипертонической синтетической питательной среде . Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от дегидратации при их содержании в гипертонической среде. Задачей заявляемого изобретения является создание способа защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от дегидратации при их содержании в гипертонической среде. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической среде,представляющей собой питательную средус 2, заключающийся в том, что используют гипертоническую питательную среду, содержащую стрептокиназу в концентрации 20-2000 МЕ/мл. 16397 1 2012.10.30 Стрептокиназа - протеин молекулярной массой 47-55 кДа - синтезируется-гемолитическими стрептококками серологических групп ,ии является одним из наиболее эффективных активаторов плазминоген человека и отдельных видов животных,однако лишена собственной протеолитической или иной гидролазной активности 1. Роль стрептокиназы остается неясной. В настоящее время установлено, что стрептокиназа обладает супероксидконвергирующей способностью. Связь супероксидконвергирующей способностис ее плазминогенактиваторной функцией представляется весьма вероятной, учитывая полное подавление последней перехватчиками супероксидного радикала 1. Введение стрептокиназы в концентрации 20-2000 МЕ/мл позволяет осуществить протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от развития осмотического сжатия (дегидратации) при содержании их в гипертонический питательной среде. Пример 1. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6) плотностью (2,03,0)104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной средес добавлением хлористого натрия (2) и стрептокиназы 200 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде, содержащей 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) в хорошо развитой монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (18 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. При внесении в питательную средуодновременно с хлористым натрием стрептокиназы (1000 МЕ/мл) и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел,так и их отростков. Полученные результаты свидетельствуют, что стрептокиназа способна влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 ) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки. Пример 2. Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью (2,5-3,0)104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их до получения монослоя. В опытные культуры вносят(2 ) и стрептокиназу (1000 МЕ/мл). В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 2. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) в хорошо развитой монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (23 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. При внесении в питательную средуодновременно с хлористым натрием стрептокиназы (1000 МЕ/мл) и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраня 2 16397 1 2012.10.30 ет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел,так и их отростков. Пример 3. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6) плотностью (2,03,0)104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной средес добавлением хлористого натрия (2) и стрептокиназы 20 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде, содержащей 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) в хорошо развитой монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (18 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. Внесение в питательную средуодновременно с хлористым натрием стрептокиназы (20 МЕ/мл) при экспозиции в течение 4 суток обеспечивает сохранение монослоя культуры (имеются лишь единичные свободные зоны), сохранение клетками округлой формы и контактирующих между собой отростков. Полученные результаты свидетельствуют, что стрептокиназа способна влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 ) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки. Пример 4. Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома 6) плотностью (2,03,0)104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной средес добавлением хлористого натрия (2) и стрептокиназы 2000 МЕ/мл. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде, содержащей 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) в хорошо развитой монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (18 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. Внесение в питательную средуодновременно с хлористым натрием стрептокиназы (2000 МЕ/мл) и экспозиция в течение 4 суток монослоя культуры обеспечивают сохранение первоначальной архитектоники, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их отростков. Полученные результаты свидетельствуют, что стрептокиназа способна влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 ) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки. Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет осуществлять протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной 3 16397 1 2012.10.30 ткани от развития дегидратации при их содержании в гипертонической синтетической питательной среде. Источники информации 1. Никандров В.Н., Пыжова Н.С. Регуляторные белки функциональные свойства молекул и механизмы их биологического действия // Весц НАН Беларус Сер. мед.-бял. навук. - 2003. -3. - С. 75-89. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4