Способ защиты культивируемой первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической среде

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ЗАЩИТЫ КУЛЬТИВИРУЕМОЙ ПЕРВИЧНОЙ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ ДЕГИДРАТАЦИИ В ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ СРЕДЕ(71) Заявитель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Жук Ольга Николаевна Никандров Виталий Николаевич Гронская Раиса Ивановна Полукошко Елена Федоровна(73) Патентообладатель Государственное научное учреждение Институт физиологии Национальной академии наук Беларуси(56)10290 1, 2008. ЖУК В.М. и др. // Весц Акадэм навук БССР. Серыя бялагчных навук.(57) Способ защиты культивируемой первичной или перевиваемой культуры клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической питательной средес 2 -нымпри культивировании в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С, заключающийся в том, что в питательную среду вносят фактор роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл. Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичной и перевиваемой культур клеток нервной ткани. Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся защиты первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от дегидратации при их содержании в гипертонической среде. Задачей заявляемого изобретения является создание способа защиты первичной и перевиваемой культур клеток нервной ткани от дегидратации при их содержании в гипертонической среде. Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты первичной и перевиваемой культур клеток нервной ткани от дегидратации в гипертонической питательной средес 2 -нымпри культивировании в атмосфере с 5 -ным содержанием 2 и 90 -ной влажностью при температуре 37 С, заключающийся в том,что в питательную среду вносят фактор роста нервов до концентрации 50-100 нг/мл. Фактор роста нервов - протеин молекулярной массой 116-140 кДа - относится к семейству полипептидных биорегуляторов, контролирующих на ауто-, пара- и эндокринном уровнях выживаемость, дифференцировку, поддержание функциональной активности практически всех клеток развивающегося и зрелого организма. Он обладает нейротрофической активностью и обслуживает такие важные функции в нервной ткани, как индукция 15379 1 2012.02.28 выроста нейритов, ориентация растущих нейритов по направлению к источнику фактора роста нервов и способствование выживанию нервных клеток 1. Введение фактора роста нервов в концентрации 50-100 нг/мл позволяет защищать первичные и перевиваемые культуры клеток нервной ткани от развития осмотического сжатия (дегидратации) при содержании их в гипертонический питательной среде. Пример 1 Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома С 6) плотностью 2,03,0104 клеток/см 2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной средес добавлением хлористого натрия (2) и фактора роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде,содержащей 2. С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых культур и составляющих их клеток в течение 4 суток культивирования и учитывают количество клеток. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) в хорошо развитой монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (18 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. Внесение в питательную средуодновременно с хлористым натрием фактора роста нервов в конечной концентрации 50 нг/мл питательной среды и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их отростков. Полученные результаты свидетельствуют, что фактор роста нервов способен влиять на процесс дегидратации, инициируемый повышенным гипертоническим (2 ) раствором хлористого натрия, препятствуя выходу жидкости из клетки. Пример 2 Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0104 клеток/см 2 на покрытые коллагеном покровные стекла и культивируют их до получения монослоя. В опытные культуры вносят(2 ) и фактор роста нервов в конечной концентрации 100 нг/мл питательной среды. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в такой же синтетической питательной среде в присутствии 2. Внесение в синтетическую питательную среду(2 ) в хорошо развитой монослойной культуре вызывает перестройку ее организации. Часть клеток (23 ) в первые же часы гибнет, сохранившиеся сжимаются, теряют округлость формы и становятся вытянутыми, отростки истончаются. Клеточная культура меняет свою архитектонику клетки постепенно перестраиваются в пространстве и собираются в связанные между собою кластеры, отделенные друг от друга свободными зонами, и к исходу 4-х суток на месте равномерного монослоя наблюдаются кружева. Внесение в питательную средуодновременно с хлористым натрием фактора роста нервов в конечной концентрации 100 нг/мл питательной среды и экспозиции в течение 4 суток монослой культуры сохраняет первоначальную архитектонику, клетки имеют типичную морфологию как самих тел, так и их отростков. Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ позволяет осуществлять протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от развития дегидратации при их содержании в гипертонической синтетической пи 2 15379 1 2012.02.28 тательной среде. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной биологии и медицине. Источники информации 1. Калюнов В.Н. Фактор роста нервной ткани. - Мн., 1984. - С. 169-173. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3