Штамм Mycoplasma hyopneumoniae КМИЭВ №42 – штамм-антиген

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского(72) Авторы Тяпша Юрий Иванович Мистейко Михаил Михайлович Финогенов Артем Юрьевич Андросик Николай Николаевич(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма,предназначенного для конструирования набора для диагностики микоплазмоза свиней методом иммуноферментного анализа и вакцины против энзоотической пневмонии свиней. Известен штамм 252934 АТСС коллекции организмов,выращенный в средес рН-6,9 для обнаружения локализация ДНКв легких больных свиней 1. Известно использование штаммаколлекции организмов, который был выделен в среде , состоящей из ППЛО бульона, дрожжевого экстракта, лошадиной сыворотки и антибиотиков 2. Однако эти известные штаммы обладают недостаточными ростовыми и иммуногенными свойствами. Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение штамма, обладающего лучшими ростовыми, иммуногенными свойствами и способного сохранять их при многократных пересевах. Поставленная задача достигается тем, что штамм(КМИЭВ 42) выделялся из патматериала легких 72-х дневного поросенка, больного микоплазмозом спустя два часа после убоя с очагами серозно-катарального воспаления. Отбирали кусочки легких размером 45 см на границе пораженной и визуально нормальной ткани и бронхиальные лимфоузлы. Их растирали в фарфоровой ступке с небольшим количеством кварцевого песка. К измельченной ткани добавляли физиологический раствор в 10004 1 2007.12.30 соотношении 15-110, пенициллин по 250-500 ЕД/мл и раствор уксуснокислого таллия до конечной концентрации 12000. Суспензию встряхивали и выдерживали в течение одного часа при комнатной температуре в затемненном месте. Затем центрифугировали при 1500 оборотов в минуту 15 минут для удаления крупных частиц тканей. Затем суспензию высевали в соотношении 110 в бульон и на агар, состоящие из ППЛО порошка, стерильной лошадиной сыворотки, дрожжевого экстракта, глюкозы, пенициллина, содержащий 100000 ЕД/мл 2,5 мл/л и 5 -ный раствор уксуснокислого таллия 5 мл/л,. рН -7,4-7,6. Таксономическая принадлежность. Класс , род , вид . Культурально-морфологические признаки.на плотной питательной среде растет в виде мелких колоний без центрального уплотнения. Она ферментирует глюкозу и понижает рН жидкой среды, не расщепляет аргинин. На жидкой питательной среде рост наблюдается на 4-7 сутки в виде легкой опалесценции.окрашивается по методу Грамма в красно-розовый цвет, а по методу Романовского-Гимза в розово-фиолетовый. В мазке под иммерсионной системой микроскопавыглядит в виде мелких кокав, валов, палочек размером 150225 нм. Физиолого-биохимические признаки. Для ростаоптимальной температурой является 37 С, рН 7,4-7,6. Подвижность отсутствует. Факультативные анаэробы обладают укороченной электронтранспортной цепью, оканчивающейся флавином и не содержащей, таким образом, хинонов и цитохромов. Каталазоотрицательные. Хемоорганотрофы как основной источник энергии используют сахара, для роста нуждаются в холестероле. Цитологические признаки. Клетки лишены клеточной стенки и окружены только цитоплазматической мембраной. Молекулярно-биологические признаки.является возбудителем энзоотической пневмонии свиней. Доляв ДНК варьирует от 23 до 40 мол.(, ). Величина генома варьирует в диапазоне 5,0-9,0108 Дальтон. Триплетсчитывается как кодон триптофана. Маркерные признаки. Обладает катаболизмом глюкозы, восстанавливает тетразолин в анаэробных условиях, вызывает кислотообразование. Онкогенность. Штаммне является онкогенным. Данные о контаминации. Штаммне контаминирован другими микроорганизмами. Биотехнологическая характеристика. При производстве набора для диагностики микоплазмоза свиней методом иммуноферментного анализа и вакцины против микоплазмоза свиней используются бактериальные клетки. Концентрация бактериальных клетокв среде определяется с помощью стандартов мутности или методом последовательных разведений и подсчета колоний образующих единиц на ППЛО агаре. Количество микробных клеток на бульоне Мартена должно быть 1109-3109 в 1 мл по стандарту мутности или 2106-3106 колоний образующих единиц. При длительном культивировании штаммсохраняет полезные свойства. Штаммпатогенен для свиней, обладает иммуногенными и антигенными свойствами. Чувствителен к следующим антибиотикам тиланик, фрадизин,флорамфеникол, левомицетин, тетрациклин, макролиды, тиамулин, хлортетрациклин, энрофлон, спелинк. 10004 1 2007.12.30 Пример 1. Штамм- (КМИЭВ 42) выращивали на основе среды Мартена с мясной водой следующего состава. Компоненты(мл/л) Среда Мартена 680,5 200 Стерильная сыворотка свиньи (стерилизация -лучами) 100 Экстракт дрожжевой (стерилизация -лучами) 40 -ный раствор глюкозы 10 5 -ный раствор уксуснокислого таллия 5 0,5 -ный водный раствор фенолового красного 2 Раствор пенициллина, содержащий 100000 ЕД/мл 2,5 Для ростаоптимальной температурой является 37 С,рН 7,4-7,6. Рост наблюдается на 4-7 сутки. Пример 2. Штамм- (КМИЭВ 42) выращивали на основе ППЛО бульона. Компоненты(мл/л) ППЛО бульон 680,5 100 Стерильная сыворотка свиньи (стерилизация -лучами) 100 Стерильная сыворотка лошади (стерилизация -лучами) 100 Экстракт дрожжевой (стерилизация -лучами) 40 -ный раствор глюкозы 10 5 -ный раствор уксуснокислого таллия 5 0,5 -ный водный раствор фенолового красного 2 Раствор пенициллина, содержащий 100000 ЕД/мл 2,5 Для ростаоптимальной температурой является 37 С,рН 7,4-7,6. Рост наблюдается на 4-6 сутки. Источники информации 1. ,-. ,-.- . Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3