Штамм Proteus mirabilis – КМИЭВ-44 – штамм-антиген

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского(72) Авторы Андросик Николай Николаевич Ломако Юрий Васильевич Полоз Светлана Васильевна Лукин Олег Александрович Карпович Валентина Константиновна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского(56) Исметуллова Ф.М. Иммунизация глубокостельных коров ассоциированной инактивированной вакциной с целью профилактики диарей новорожденных телят Автореф. дис. - М., 1994. - С. 115.2217494 С 2, 2003.2218395 2, 2003.2209081 1, 2003.(57) Штамм бактерий-Г КМИЭВ-44 - штамм-антиген. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к биологическим препаратам, и может быть использовано для приготовления диагностикумов и вакцин. Известны бактерии рода , участвующие в патологических процессах пищеварительного тракта сельскохозяйственных животных 1. В настоящее время для профилактики протейной инфекции сельскохозяйственных животных, например телят, применяют штаммдля производства вакцины против диареи телят, изготавливаемой в лаборатории болезней молодняка Московской ветеринарной академии совместно с Нижегородским НИИ эпидемиологии и микробиологии Минздрава Российской Федерации 2. Недостатком данного штамма является отсутствие специфического полисахарида, обеспечивающего при изготовлении профилактического препарата протективную способность против протейной инфекции телят, вызванной-Г. Задачей изобретения является селекция штамма-Г, участвующего в патогенезе протейной инфекции телят, обладающего стабильными свойствами, высокой иммуногенностью, который может быть использован для конструирования диагностических и профилактических препаратов. Поставленная задача достигается тем, что в качестве штамма-антигена был селекционирован штамм-Г, обладающий стабильными свойствами и высокой иммуногенностью по отношению к эпизоотическим штаммам, циркулирующим в хозяйствах Республики Беларусь, отличающийся тем, что он является активным в антигенном отношении, не сбраживает мальтозу и амигдалин и не образует индол. 10092 1 2007.12.30 Штамм-Г (КМИЭВ-44) выделен в 2001 году в колхозе Гигант Бобруйского района Могилевской области из печеночной ткани теленка четырнадцатидневного возраста, больного гастроэнтеритом. Штамм получен путем посева на бульон на основе перевара Хоттингера с последующим выделением чистых культур, сбора коллекции штаммов и отбора из них активного в антигенном отношении штамма вида-Г (КМИЭВ-44), отличающийся тем, что он не сбраживает мальтозу и амигдалин и не образует индол. Штамм бактерийдепонирован в коллекции РНИУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского Национальной академии наук Беларуси. Таксонометрическая принадлежность.относится к семейству , роду , вид. Культурально-морфологические признаки.(КМИЭВ-44) при окраске по Граму имеет вид мелких грамотрицательных палочек (0,4-0,61-3 мкм), не образующих капсул и спор. Физиолого-биохимические признаки. Растет на МПБ, бульоне на основе перевара Хоттингера с интенсивным помутнением среды, с образованием поверхностной пленки. На МПА - характерный сливающийся рост без образования отдельных колоний, образование вуалеобразного налета. На средах с содержанием солей желчных кислот (среда Плоскирева, висмут-сульфит-агар, агар Мак-Конки) рост проявляется в О-форме. На висмутсульфит-агаре через 48 ч культивирования колонии имеют грязно-коричневый цвет, а после их снятия на среде остается грязно-коричневая редукционная зона. Штамм-Г (КМИЭВ-44) не ферментирует лактозу, арабинозу, дульцит,не обладает декарбоксилазой лизина и дегидролазой аргинина, не утилизирует малонат, не сбраживает мальтозу и амигдалин и не образует индол. Чувствительность к антибиотикам. Штамм-Г (КМИЭВ-44) высокочувствителен к стрептомицину, энроксилу, гентамицину, карбенициллину, цефалексину,левомицетину, тетрациклину, неомицину, норфлоксацину, умеренно устойчив к доксициклину, пенициллину, устойчив к ампициллину (амписуру), эритромицину (галлимицину), олеандомицину, метицимину, линкомицину, кобактану, амоксициллину (ветримоксину), ристомицину. Вирулентность, иммуногенность. Штамм-Г (КМИЭВ-44) патогенен. При внутрибрюшинном введении вызывает гибель белых мышей массой 14-16 г. ЛД 50 для белых мышей составляет 1,03109 м.к./0,5 мл 18-часовой бульонной культуры. Иммуногенность штамма-Г (КМИЭВ-44) составляет 100 , антигенность - 9,64 2. Пример 1. Для приготовления бульона Хоттингера перевар разводят дистиллированной водой до содержания азота 200 мг . К бульону добавляют 0,5 натрия хлорида и 1 пептона,доводят до 7,4-7,6. Кипятят бульон на огне 30-40 мин в кастрюле с закрытой крышкой. При выкипании уровень жидкости доводят до первоначального. После окончательного установлениябульон кипятят вторично. После кипячения среду оставляют для отстаивания, после чего осторожно сливают с осадка и фильтруют через полотняный фильтр или 3-4 слоя фильтровальной бумаги. Осадок на фильтре не выливают. Разливать бульон сразу не рекомендуется. За время хранения он хорошо отстаивается. По мере надобности бульон фильтруют, разливают по пробиркам. Бульон и агар Хоттингера стерилизуют 30 мин при давлении 1 атм. После стерилизации окончательно проверяют . Пример 2. В бактериологические матрацы разливают по 250 см 3 стерильного мясо-пептонного агара на основе перевара Хоттингера. На застывший агар заливают по 5 см 3 суточной бульонной культуры. Культивируют при 37 С. Через 24 ч выросшую культуру смывают 2 10092 1 2007.12.30 0,85 -ным стерильным раствором натрия хлорида из расчета 50 см 3 на 1 матрац. Концентрацию биомассы доводят по стандарту мутности до 10 млрд. микробных клеток в 1 см 3. Полученную взвесь разливают в 500 см 3 флаконы. Инактивацию проводят с использованием формалина в конечной концентрации 0,4 . Полученный препарат стерилен, безвреден. Пример 3. Препарат, полученный по примеру 1, используется для профилактики протейной инфекции телят. Препарат вводится глубоко стельным коровам в дозах 10 и 15 см 3 внутримышечно с интервалом 10-15 дней. Из 20 животных опытной группы после применения биологического препарата, компонентом которого являлся штамм бактерий-Г (КМИЭВ-44) заболело 1 животное, из 20 животных контрольной группы после применения известного биологического препарата заболело 11 животных, из которых пало 3. Таким образом, штамм-Г (КМИЭВ-44) является активным в антигенном отношении, обладает достаточной иммуногенностью и может быть использован для конструирования диагностических и профилактических препаратов. Источники информации 1. Краткий определитель бактерий Берги / Под ред. Дж. Хоулта. - М. Мир, 1980. С. 188-189. 2. Исмегулова Ф.М. Иммунизация глубокостельных коров ассоциированной вакциной с целью профилактики диарей новорожденных телят Автореф. дис. канд. вет. наук МВА. М., 1994. - С. 15 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3