Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕЛАМИНА В СОЕВОМ ПРОДУКТЕ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Застенская Ирина Алексеевна Белышева Людмила Леонидовна Марусич Нина Ивановна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(57) Способ определения меламина в соевом продукте, заключающийся в том, что экстрагируют меламин из соевого продукта смесью 5 -ного раствора трихлоруксусной кислоты и ацетонитрила, взятых в соотношении 52 или 34, в течение 10 мин при температуре 50 С в ультразвуковой бане, осуществляют очистку и концентрирование полученного экстракта с помощью твердофазной экстракции на картридже,3 /60 , меламин элюируют смесью 1,25 -ного раствора аммиака в метаноле со скоростью 0,5-1,0 см 3/мин, определяют содержание меламина в полученном элюате методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и рассчитывают массовую долю меламина в соевом продукте. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также к пищевой промышленности. 15455 1 2012.02.28 В промышленности меламин используют для получения меламино-формальдегидных и ионообменных смол, ингибиторов коррозии и т.д. По токсичности меламин относится к 2-й группе токсичности. В Республике Беларусь не допускается наличие меламина в соевых продуктах. Однако в доступной научно-технической и патентной литературе заявителем ближайший аналог заявляемого способа не выявлен. Задачей заявляемого способа является создание способа определения меламина в соевых продуктах с высокой чувствительностью и точностью. Поставленная задача решается следующим образом. Предложен способ определения меламина в соевом продукте, заключающийся в том,что экстрагируют меламин из соевого продукта смесью 5 -ного раствора трихлоруксусной кислоты и ацетонитрила, взятых в соотношении 52 или 34, в течение 10 мин при температуре 50 С в ультразвуковой бане, осуществляют очистку и концентрирование полученного экстракта с помощью твердофазной экстракции на картридже, 3 /60 , меламин элюируют смесью 1,25 -ного раствора аммиака в метаноле со скоростью 0,5-1,0 см 3/мин, определяют содержание меламина в полученном элюате методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и рассчитывают массовую долю меламина в соевом продукте. Указанные нами условия экстракции, очистки и концентрирования позволяют достичь максимальной чувствительности и извлечения меламина из соевых продуктов. Пример. Определение меламина в соевом продукте 1. Экстракция Навеску исследуемых образцов 2,000,01 г растирают в фарфоровой ступке с 2-3 г кварцевого песка, затем переносят в пробирку для центрифугирования вместимостью 50 см 3, промывают ступку 5 см 3 5 -ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) два раза и добавляют полученный раствор к пробе, затем в пробирку для центрифугирования добавляют 2 см 3 ацетонитрила. Пробирку плотно закрывают, встряхивают и помещают на 10 мин в ультразвуковую баню при температуре 50 С. Затем пробирку центрифугируют 10 мин со скоростью 4000 об/мин. Отбирают верхний слой в отдельную пробирку, а к осадку добавляют еще 5,0 см 3 5 -ного раствора ТХУ и 1,5 см 3 ацетонитрила, встряхивают, помещают в ультразвуковую баню на 10 мин, затем центрифугируют 10 мин при тех же условиях. Отбирают верхний слой и присоединяют к первой порции. К осадку в третий раз прибавляют 5 см 3 5 -ного раствора ТХУ и 1,5 см 3 ацетонитрила, встряхивают, помещают в ультразвуковую баню на 10 мин, затем центрифугируют 10 мин при тех же условиях. Отбирают верхний слой и присоединяют к первой и второй порциям. Объединенный экстракт фильтруют в мерную колбу вместимостью 25 см 3 через бумажный фильтр синяя лента, который необходимо предварительно смочить 1 см 3 5 -ным раствора ТХУ. Объем доводят до метки 5 раствором ТХУ. 2. Очистка и концентрирование экстракта Для проведения твердофазной экстракции отбирают 5 см 3 экстракта, полученного по п. 1, в пробирку вместимостью 10 см 3, добавляют 5 см 3 дистиллированной воды, раствор тщательно перемешивают. Через подготовленный предварительно картридж пропускают 10 см 3 экстракта из пробирки (п. 2). Затем промывают картридж 5 см 3 дистиллированной воды, а затем 5 см 3 метанола. Высушивают картридж под вакуумом в течение 1-2 мин, а затем элюируют меламин 5 см 3 1,25 -ного раствора аммиака в метаноле со скоростью элюирования 0,51,0 см 3/мин. Полученный элюат упаривают досуха в этой же пробирке на роторном испарителе при температуре 50 С. Сухой остаток растворяют в 1 см 3 подвижной фазы, фильтруют через мембранный фильтрс размером пор 0,45 мкм.Подготовка картриджа Устанавливают картридж (3 /60 , кат.5982-3236) в установку для твердофазной экстракции, включают насос, с помощью крана и секундомера 2 15455 1 2012.02.28 устанавливают скорость элюирования метанола 0,5-1,0 см 3/мин. Через сорбент пропускают 5 см 3 метанола, а затем 6 см 3 дистиллированной воды. 3. Приготовление растворов 3.1. Приготовление 1 раствораВзвешивают 4,000,01 г , помещают в мерную колбу вместимостью 100 см 3,добавляют 50 см 3 дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения щелочи, охлаждают до комнатной температуры и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят в склянке, закрытой притертой полимерной пробкой при комнатной температуре. Раствор стабилен в течение 1 года. 3.2. Приготовление 5,0 -ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) В коническую колбу вместимостью 250 см 3 помещают 5,0000,001 г ТХУ и добавляют (95,0000,001) г дистиллированной воды, перемешивают. Раствор хранят в склянке с притертой пробкой при комнатной температуре. Раствор стабилен в течение 6 мес. 3.3. Приготовление 1,25 -ного раствора аммиака в метаноле В коническую колбу вместимостью 250 см 3 помещают 5,0000,001 г аммиака водного и добавляют 95,0000,001 г метанола, перемешивают. Раствор хранят в склянке с притертой пробкой при комнатной температуре. Раствор стабилен в течение 1 мес. 3.4. Приготовление подвижной фазы В плоскодонный стакан вместимостью 1000 см 3 помещают 2,3430,001 г октансульфоната натрия и 1,9240,001 г лимонной кислоты, растворяют в 850 см 3 дистиллированной воды, с помощью 1 растворадоводят до 3,0. Полученный раствор помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см 3 и доводят объем дистиллированной водой до метки. К 920 см 3 полученного раствора добавляют 80 см 3 ацетонитрила. Подвижную фазу фильтруют через мембранный целлюлозный фильтр. Раствор хранят в склянке из темного стекла с завинчивающейся пробкой при комнатной температуре. Раствор стабилен в течение 1 мес. 3.5. Приготовление стандартных растворов меламина 3.5.1. Приготовление основного стандартного раствора меламина концентрацией 500 мкг/см 3 Навеску 0,10000,0001 г кристаллического меламина вносят в мерную колбу вместимостью 200 см 3, добавляют 100 см 3 метанола и помещают в ультразвуковую баню на 15 мин при комнатной температуре, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой в холодильнике. Раствор стабилен в течение 3 мес. 3.5.2. Приготовление стандартного раствора меламина концентрацией 100 мкг/см 3(раствор ) Отбирают 10,0 см 3 основного стандартного раствора меламина, приготовленного по п. 3.5.1 и помещают в мерную колбу вместимостью 50 см 3, объем доводят до метки подвижной фазой. Раствор хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой в холодильнике. Раствор стабилен в течение 7 суток. 3.5.3. Приготовление стандартного раствора меламина концентрацией 10 мкг/см 3 (раствор Б) Отбирают 10,0 см 3 стандартного раствора меламина (раствор ), приготовленного по п. 3.5.2 и помещают в мерную колбу вместимостью 100 см 3, объем доводят до метки подвижной фазой. Раствор хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой в холодильнике. Раствор стабилен в течение 7 суток. 3.5.4. Приготовление градуировочных растворов меламина Градуировочные растворы меламина концентрацией 0,2, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0 мкг/см 3 готовят по схеме, представленной в табл. 3. Аликвотные части стандартных растворов А и Б меламина переносят в мерные колбы и доводят подвижной фазой до метки при 202 С. 15455 1 2012.02.28 Градуировочные растворы хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой в холодильнике. Растворы стабильны в течение 7 суток. Таблица 1 Схема приготовления градуировочных растворов меламинаградуироОбъем аликвотной части Концентрация меламина Объем мерной вочного стандартного раствора мелав градуировочном колбы, см 3 раствора мина, см 3 растворе, мкг/см 3 1 5,0 (раствор А) 100 5,0 2 2,5 (раствор А) 100 2,5 3 5,0 (раствор Б) 50 1,0 4 5,0 (раствор Б) 100 0,5 5 2,0 (раствор Б) 100 0,2 4. Установление градуировочной характеристики Полученные по п. 3.5.4 градуировочные растворы меламина хроматографируют,начиная с самой низкой концентрации. Условия хроматографирования объем вводимой пробы 20 мкл скорость подачи подвижной фазы 1,5 см 3/мин температура термостата колонки 30 С длина волны 240 нм ширина оптической щели 16 нм ширина пика 0,1 мин 4 нм. Каждый градуировочный раствор хроматографируют не менее 2-х раз, принимая за результат измерения среднее арифметическое параллельных измерений. 5. Построение градуировочного графика Для построения градуировочного графика устанавливают зависимость площади пиков от соответствующей концентрации меламина в градуировочном растворе. Прямая градуировочного графика должна проходить через начало координат и определяться функциональной зависимостью,(1) где - площадь пика меламина- концентрация меламина в градуировочном растворе- коэффициент регрессии. Градуировочный график рассчитывается методом наименьших квадратов. 6. Выполнение измерений Анализ полученного по п. 2 фильтрата проводят на жидкостном хроматографе. Условия хроматографирования такие же, как и при построении градуировочного графика п. 4. Определяют площади пиков, используя компьютерную систему обработки сигналов. Проводят анализ двух параллельных проб. 7. Обработка результатов измерений Расчет содержания меламина , мг/кг, проводят по формуле 13,(2)2 где- концентрация меламина, найденная по градуировочному графику, мкг/см 3- масса навески г 1 - общий объем экстракта, 25 см 3 2 - объем экстракта, взятого для пропускания через картридж, 5 см 3 3 - объем подвижной фазы, взятый для растворения сухого остатка пробы после упаривания, 1 см 3. 4 15455 1 2012.02.28 За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений. Вычисления проводят до третьего знака после запятой и округляют до второго. Результаты определения меламина в соевых продуктах представлены в табл. 2. Таблица 2 Определение содержания меламина в соевом продукте предлагаемым способом Наимено- Температу- Время Внес. Определяе- Извле- Предел об- Смесь раствора экстрак- экстрак- к-во, мое кол-во, чение, наружения, рителей для вание продукта ции, мин мг/кг мг/кг мг/кг экстракции ции, С 2 ТХУ 5 4,88 97,5 ацет-л 16 5 ТХУ 40 10 4,94 98,7 ацет-л 52 10 ТХУ 15 4,94 98,8 ацет-л 34 2 ТХУ 5 4,91 98,2 ацет-л 16 Соевое 5 ТХУ 50 10 5 4,97 99,7 0,2 ацет-л 52 молоко 10 ТХУ 15 4,99 99,8 ацет-л 34 2 ТХУ 5 4,89 97,8 ацет-л 16 5 ТХУ 60 10 5,01 100,2 ацет-л 52 10 ТХУ 15 5,0 100,0 ацет-л 34 5 2,93 97,8 40 10 2,96 98,9 15 2,97 99,0 5 2,96 98,5 Тофу (соевый тво 50 10 3 3,00 99,9 0,2 рог) 15 2,99 99,7 5 2,95 98,4 60 10 3,03 101,0 15 2,99 99,7 5 0,976 97,6 40 10 0,988 98,8 15 0,984 98,4 5 0,984 98,4 Концентрат сое 50 10 1 0,997 99,7 0,2 вого белка 15 0,996 99,6 5 0,985 98,5 60 10 1,0 100,0 15 0,997 99,7 Достигаемый технический результат заявляемого способа заключается в том, что способ позволяет определять меламин в соевых продуктах с высокой точностью и чувствительностью, предел обнаружения меламина в соевых продуктах - 0,2 мг/кг. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5

МПК / Метки

МПК: G01N 33/02, G01N 30/02

Метки: способ, меламина, соевом, продукте, определения

Код ссылки

<a href="https://by.patents.su/5-15455-sposob-opredeleniya-melamina-v-soevom-produkte.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ определения меламина в соевом продукте</a>

Похожие патенты