Питательная среда для выращивания бактерий и способ ее получения

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ БАКТЕРИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ(71) Заявители Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна Билецкий Максим Олегович Горбунова Ирина Александровна(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна Билецкий Максим Олегович Горбунова Ирина Александровна(73) Патентообладатели Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна Билецкий Максим Олегович Горбунова Ирина Александровна(57) 1. Питательная среда для выращивания бактерий, содержащая предварительно приготовленный ферментолизат мяса, солевой раствор и воду, отличающаяся тем, что в качестве ферментолизата мяса содержит протеолитический ферментолизат мяса с содержанием аминного азота 600-680 мг , в качестве солевого раствора - 5 -ный раствор хлорида натрия и содержит очищенную воду с 7,0 при следующем соотношении компонентов, мас.протеолитический ферментолизат мяса 25-50 5 -ный раствор хлорида натрия 5-10 очищенная вода с 7,0 остальное,при этом массовое соотношение компонентов составляет 5114 или 514, или 1019 соответственно. 2. Способ получения питательной среды по п. 1, заключающийся в том, что предварительно готовят протеолитический ферментолизат мяса путем инкубации фарша мяса с протеолитическим ферментом алкалазой с активностью 2,4 единицы Ансона на грамм,взятых в соотношении от 50,2 до 0,510, в присутствии очищенной воды при температуре 45-60 С и 6,0-8,5 в течение 4-24 часов, который затем смешивают с 5 -ным раствором хлорида натрия и очищенной водой с 7,0. 13763 1 2010.10.30 Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к производству питательных сред для культивирования бактерий. Для культивирования бактерий используют сывороточные среды, гидролизаты мяса,мясокостной муки, субпродуктов животных и придатков семенников, гидролизатов крови и др. 1, 2, 4, 5, 6. Включение в состав указанных питательных сред большого количества дорогостоящих компонентов, незначительный выход биомассы делают экономически невыгодным их использование для выращивания микроорганизмов. Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является питательная среда на основе ферментолизата говяжьего мяса 3. Для ее приготовления говяжье мясо освобождают от костей, жира, сухожилий, нарезают мелкими кусочками,опускают в кипящую воду из расчета 1 часть мяса на 2 части воды, кипятят 15-20 минут и пропускают через мясорубку. Смесь мяса и бульона заливают в бутыль (на 2/3 объема),подщелачивают 20 -ным раствором гидрокарбоната натрия до 7,8-8,0 и добавляют 10(к объему смеси) поджелудочной железы, очищенной от жира, соединительной ткани и дважды пропущенной через мясорубку, или 0,5 панкреотина (и больше - в зависимости от активности). Содержимое бутыли тщательно перемешивают и добавляют 1-3 хлороформа. Бутыль плотно закрывают резиновой пробкой и ставят в термостат при температуре 37 С на 7-10 суток, периодически встряхивая вначале через каждые 15-20 минут, далее - несколько раз в день. Под действием трипсина мясо, ферментируясь,превращается в однородный осадок серовато-желтого цвета, жидкость при этом становится прозрачной с соломенно-желтым оттенком. Полученный перевар фильтруют через бумажный фильтр, разливают в бутыли и стерилизуют при 1 атм 20-30 минут. Основной перевар разводят дистиллированной или водопроводной водой (17), добавляют 0,5 хлорида натрия, 0,1 гидрофосфата калия, устанавливают 7,4-7,6 и кипятят 15-20 минут, фильтруют, разливают в колбы и пробирки и стерилизуют при 1 атм 2030 минут. Однако и этот способ не лишен недостатков низкий выход среды и целевого продукта, высокая ее стоимость. Задача изобретения - повышение биологической активности питательной среды и выхода целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что приготовленный ферментолизат, очищенная вода и раствор натрия хлорида смешиваются в необходимых соотношениях. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда для выращивания бактерий содержит предварительно приготовленный ферментолизат мяса,солевой раствор и воду, при этом в качестве ферментолизата мяса содержит протеолитический ферментолизат мяса с содержанием аминного азота 600-680 мг/ , в качестве солевого раствора - 5 -ный раствор хлорида натрия и содержит очищенную воду с 7,0 при следующем соотношении компонентов, мас.протеолитический ферментолизат мяса 25-50 5 -ный раствор хлорида натрия 5-10 очищенная вода с 7,0 остальное,при этом массовое соотношение компонентов составляет 5114 или 514, или 1019 соответственно. Способ получения питательной среды для выращивания бактерий, заключающийся в том, что предварительно готовят протеолитический ферментолизат мяса путем инкубации фарша мяса с протеолитическим ферментом алкалазой с активностью 2,4 единицы Ансона на грамм, взятых в соотношении от 50,2 до 0,510, в присутствии очищенной воды при температуре 45-60 С и 6,0-8,5 в течение 4-24 часов, который затем смешивают с 5 ным раствором хлорида натрия и очищенной водой с 7,0. 2 13763 1 2010.10.30 Пример 1. Фарш мяса смешивают с протеолитическим ферментом алкалазой с активностью 2,4 /г в присутствии очищенной воды при соотношении компонентов 50,210 в течение 4 часов при температуре 45 С и 6,0. Протеолитический ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 5114. Выход среды составил 9 дм 3 с 1 кг мяса. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 4,4 0,8 3,6 4,7 и 2,0 млрд/см 3 микробных клеток. Пример 2. Фарш мяса смешивают с протеолитическим ферментом алкалазой с активностью 2,4 /г в присутствии очищенной воды при соотношении компонентов 50,110 в течение 10 часов при температуре 45 С и 7,0. Протеолитический ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 5114. Выход среды составил 4,0 дм 3 с 1 кг мяса. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 2,8 0,6 3,0 3,4 и 0,9 млрд/см 3 микробных клеток. Пример 3. Фарш мяса смешивают с протеолитическим ферментом алкалазой с активностью 2,4 /г в присутствии очищенной воды при соотношении компонентов 50,510 в течение 24 часов при температуре 60 С и 7,0. Протеолитический ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 5114. Выход среды составил 9,2 дм 3 с 1 кг мяса. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 4,6 0,85 3,6 4,8 и 2,0 млрд/см 3 микробных клеток. Пример 4. Фарш мяса смешивают с протеолитическим ферментом алкалазой с активностью 2,4 /г в присутствии очищенной воды при соотношении компонентов 4111 в течение 12 часов при температуре 50 С и 7,0. Протеолитический ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 5114. Выход среды составил 6,4 дм 3 с 1 кг мяса. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 3,2 0,5 2,8 3,6 и 0,5 млрд/см 3 микробных клеток. Пример 5. Фарш мяса смешивают с протеолитическим ферментом алкалазой с активностью 2,4 /г в присутствии очищенной воды при соотношении компонентов 60,29 в течение 24 часов при температуре 50 С и 6,5. Протеолитический ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 5114. Выход среды составил 6,6 дм 3 с 1 кг мяса. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 2,9 0,5 2,9 3,5 и 0,5 млрд/см 3 микробных клеток. Пример 6. Протеолитический ферментолизат мяса готовят аналогично примеру 1, но полученный ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 514. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 4,5 0,8 3,5 4,8 и 1,8 млрд/см 3 микробных клеток. 3 13763 1 2010.10.30 Пример 7. Протеолитический ферментолизат мяса готовят аналогично примеру 1, но полученный ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 5213. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 4,5 0,8 3,5 4,7 и 2,1 млрд/см 3 микробных клеток. Пример 8. Протеолитический ферментолизат мяса готовят аналогично примеру 1, но полученный ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 1019. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 4,6 0,8 3,5 4,8 и 1,9 млрд/см 3 микробных клеток. Пример 9. Протеолитический ферментолизат мяса готовят аналогично примеру 1, но полученный ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 1119. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 2,78 0,4 2,65 3,1 и 0,35 млрд/см 3 микробных клеток. Пример 10. Протеолитический ферментолизат мяса готовят аналогично примеру 1, но полученный ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивают в соотношении 4115. Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 2,5 0,35 2,4 3,0 и 0,3 млрд/см 3 микробных клеток. Пример 11. Выращивание сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий производилось на бульоне Хоттингера (прототип). Накопление сальмонелл, пастерелл, стрептококков, эшерихий и рожистых бактерий составило соответственно 2,8 0,4 2,6 3,2 и 0,4 млрд/см 3 микробных клеток. Из представленных экспериментальных данных видно, что для изготовления протеолитического ферментолизата фарш мяса следует смешивать с протеолитическим ферментом алкалазой с активностью 2,4 /г в присутствии очищенной воды при соотношении компонентов 50,2-0,510 в течение 4-24 часов при температуре 45-60 С и 6,0-7,0. При таких условиях выход среды составляет 9,0-9,2 дм 3 с 1 кг мяса. Увеличение или уменьшение в реакционной смеси алкалазы, воды и мяса способствует снижению выхода среды до 4,0-6,8 дм 3 с 1 кг мяса, т.е. в 1,4-2,3 раза. При изготовлении питательной среды для выращивания бактерий разных видов следует протеолитический ферментолизат мяса, 5 -ный раствор хлорида натрия и очищенную воду смешивать в соотношениях 5114, или 514, или 5213, или 1019. При вышеуказанных смешиваниях компонентов отмечается наиболее интенсивный рост и размножение всех изученных бактерий. При других изученных соотношениях компонентов установлено снижение накопления разных видов бактериальных клеток. Источники информации 1. Патент 6292, 2004. 2. А.с. СССР 1237707, 1986. 3. Смирнова Н.И. и др. Руководство к практическим занятиям по ветеринарной микробиологии / Под ред. Н.И. Смирновой. - Минск Вышэйшая школа, 1977. - С. 46-50. 13763 1 2010.10.30 4. Андросов Ф.З., Беляев И.Я., Клочко Р.Т. и др. Справочник ветеринарного лаборанта / Под ред. В.Я. Антонова.- М. Колос, 1981. - С. 20-24. 5. Шагам Н.Л., Раскин Б.М., Мельников В.А. и др. Сравнительное изучение фракционного состава ферментативного и кислотного гидролизатов крови, используемых для конструирования микробиологических сред // ЖМЭИ. - 1981. - С. 8, 89-92. 6. Ярцев М.Я. Разработка технологии производства живых сухих вакцин против пастереллеза птиц, рожи свиней и бруцеллеза животных (экспериментальные исследования и внедрение) Дисс докт. биол. наук. - М., 1990. - С. 224, 406. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5