Среда для производственного культивирования лептоспирозных бактерий и способ ее получения

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВЕННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ БАКТЕРИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ(71) Заявители Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович(73) Патентообладатели Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович(57) 1. Среда для производственного культивирования лептоспирозных бактерий, содержащая сыворотку крови овец или кроликов, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фактор роста и фосфатно-буферный раствор с 7,0-7,4 при следующем соотношении компонентов, мас.сыворотка крови овец или кроликов 5-10 фактор роста 5-10 фосфатно-буферный раствор с 7,0-7,4 остальное,при этом массовое соотношение компонентов составляет 118 или 1118 соответственно,а фактор роста имеет следующий состав, мас.глицерин 0,2 трилон Б 0,01 витамин 1 0,03 витамин 12 0,00036 0,5 -ный раствор биологически активных компонентов торфа остальное. 2. Способ получения среды по п. 1, заключающийся в том, что предварительно готовят фактор роста путем суспендирования навесок глицерина, трилона Б, витаминов 1 и 12 в 0,5 -ном растворе биологически активных компонентов торфа и фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм, затем смешивают сыворотку крови овец 13762 1 2010.10.30 или кроликов, полученный фактор роста и фосфатно-буферный раствор с 7,0-7,4 в массовом соотношении 1118 или 118 соответственно. Изобретение относится к бактериологии, в частности к производственному культивированию лептоспирозных бактерий, используемых для изготовления диагностических и профилактических препаратов. Для культивирования лептоспирозных бактерий используют следующие питательные среды водно-сывороточная среда Ферваорт-Вольфа (1928), Кортгофа (1972), Тарасова(1937), синтетические безбелковые среды Шенберга (1967) и Торнея (1974), Элленгаузена(1967), Элленгаузена для ветеринарных целей (1976), Рассела (1986), твин-альбуминсывороточная среда Эллиса, альбуминовая среда ГНКИ (М.А.Бабич, Ю.М.Дигальцев,1965) и др. 1, 2, 3, 5, 6, 7. Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является среда Любашенко 4. Среду Любашенко готовят путем фильтрации через бумагу и стерилизации при 1 атм в течение 30 минут нехлорированной водопроводной, колодезной или речной воды. После охлажденияводы устанавливают 7,3-7,4 и добавляют 5 сыворотки крови кролика или барана, прогретой при 56 С в течение 1 часа. Среду фильтруют через пластинки СФ в приборе Зейтца при небольшом вакууме (660 мм ртутного столба) и асептически разливают в пробирки. Для проверки на стерильность пробирки выдерживают при 37 С 48 часов. При соблюдении всех необходимых условий производственные штаммы лептоспирозных бактерий вырастают в этой среде через 5-7 суток, накопление их не превышает 8100 млн./см 3 микробных клеток. Задача изобретения - повышение выхода биомассы лептоспирозных бактерий. Поставленная цель достигается тем, что к смеси белковой основы и буферного раствора добавляют фактор роста. В качестве фактора роста лептоспирозных бактерий используют 0,5 -ный раствор биологически активных компонентов торфа, содержащий трилон Б, глицерин и витамины 1 и 12. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что среда для производственного культивирования лептоспирозных бактерий содержит сыворотку крови овец или кроликов и дополнительно фактор роста и фосфатно-буферный раствор с 7,0-7,4 при следующем соотношении компонентов, мас.сыворотка крови овец или кроликов 5-10 фактор роста 5-10 фосфатно-буферный раствор,7,0-7,4 остальное,при этом массовое соотношение компонентов составляет 118 или 1118 соответственно,а фактор роста имеет следующий состав, мас.глицерин 0,2 трилон Б 0,01 витамин 1 0,03 витамин 12 0,00036 0,5 -ный раствор биологически активных компонентов торфа остальное. Способ получения среды для производственного культивирования лептоспирозных бактерий, заключающийся в том, что предварительно готовят фактор роста путем суспендирования навесок глицерина, трилона Б, витаминов В 1 и 12 в 0,5 -ном растворе биологически активных компонентов торфа и фильтрации через мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм, затем смешивают сыворотку крови овец или кроликов, получен 2 13762 1 2010.10.30 ный фактор роста и фосфатно-буферный раствор с 7,0-7,4 в массовом соотношении 1118 или 118 соответственно. Пример 1. Кровь овец дефибринировали, отделяли сыворотку и прогревали при температуре 5658 С в течение 30-60 минут. Инактивированную сыворотку фильтровали через фильтр с величиной пор 0,22 мкм. Фактор роста готовили путем ресуспендирования навесок глицерина, трилона Б, витаминов 1 и В 12 в 0,5 -ном растворе биологически активных компонентов торфа при следующем соотношении компонентов, мас.глицерин 0,2 трилон Б 0,01 витамин 1 0,03 витамин В 12 0,00036 0,5 -ный раствор биологически активных компонентов из торфа остальное. Среду готовили путем смешивания сыворотки крови овец, фактора роста и фосфатнобуферного раствора в соотношении 1118. Среда обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 62432 млн./см 3 микробных клеток. Для оценки антигенной активности лептоспиры каждой серогруппы вводили внутривенно кроликам по 15 млн. микробных клеток. Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп , , , ,исоставил соответственно 11600, 1800, 13200, 11600, 1800 и 1800. Пример 2. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но для приготовления среды сыворотку крови кроликов, фактор роста и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1118. Среда обеспечивала накопление 71535 млн./см 3 микробных клеток лептоспир разных серогрупп. Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп , , , ,исоставил соответственно 11600, 1800, 13200, 11600, 1800 и 1800. Пример 3. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор роста и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 118. Среда обеспечивала накопление 68540 млн./см 3 микробных клеток лептоспир разных серогрупп. Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп , , , ,исоставил соответственно 11600, 1800, 13200, 11600, 1800 и 1800. Пример 4. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови кроликов, фактор роста и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 118. Среда обеспечивала накопление 73845 млн./см 3 микробных клеток лептоспир разных серогрупп. Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп , , , ,исоставил соответственно 11600, 1800, 13200, 11600, 1800 и 1800. 13762 1 2010.10.30 Пример 5. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор роста и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 121276. Среда обеспечивала накопление 29636 млн./см 3 микробных клеток лептоспир разных серогрупп. Пример 6. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор роста и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1123. Среда обеспечивала накопление 32824 млн./см 3 микробных клеток лептоспир разных серогрупп. В ходе экспериментальной работы нами установлено, что при содержании сыворотки животных и фактора роста менее 4 и более 10 существенно снижается интенсивность роста и деления лептоспирозных бактерий. Из представленных экспериментальных данных видно, что для производственного культивирования лептоспирозных бактерий разных серогрупп, используемых для изготовления биопрепаратов против лептоспироза, целесообразно применять питательную среду, содержащую 5-10 сыворотки крови овец или кроликов, 5-10 фактора роста и 80-90 фосфатно-буферного раствора. Питательная среда вышеуказанного состава обеспечивает накопление лептоспир разных серогрупп 592-783 млн./см 3 микробных клеток. Источники информации 1. Волина Е.Г. и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. -1. - С. 3-5. 2. Ситьков В.И. Научные и практические основы промышленного производства и применение вакцин Дисс.д-ра вет. наук. - М., 1997. - С. 58. 3. Зайцев В.В. Ветеринарная медицина Беларуси.- 2005. -1. - С. 14-15. 4. Андросов Ф.З., Беляев И.Я., Клочко Р.Т. и др. Справочник ветеринарного лаборанта / Под ред. В.Я. Антонова.- М. Колос, 1981. - С. 37. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4