Питательная среда для пересева лептоспирозных бактерий и способ ее получения

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПЕРЕСЕВА ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ БАКТЕРИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ(71) Заявитель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович Кондратенко Мария Юльяновна(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(56)7321 1, 2005. ЗАЙЦЕВ В.В. и др. // Ученые записки УО ВГАВМ. - 2007. - Т. 43. - Вып. 2. С. 45-48.26116 , 2007.2202608 2, 2003.2088258 1, 1997.4133717, 1979. ЗАЙЦЕВ В.В. // Ветеринарная медицина Беларуси. - 2004. -3. - С. 8-9.3092 1, 1999.1207140 1, 2000.199860837 2, 1998.(57) 1. Питательная среда для пересева лептоспирозных бактерий, содержащая сыворотку крови овец или кроликов и фосфатный буфер с 7,0-7,4, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фактор биосинтеза специфических антигенов при следующем соотношении компонентов, мас.сыворотка крови овец или кроликов 5,0-10,0 фактор биосинтеза специфических антигенов 5,0 фосфатный буфер с 7,0-7,4 остальное,при этом массовое соотношение сыворотки крови, фактора биосинтеза специфических антигенов и фосфатного буфера составляет 1118 или 2117, а фактор биосинтеза специфических антигенов имеет следующий состав, мас.витамин 1 0,06 витамин 12 0,007 глицерин 0,4 трилон Б 0,02 1,0 -ный раствор липополисахаридпептидной фракции О-антигена бактерий родаилиостальное. 2. Способ получения среды по п. 1, заключающийся в том, что предварительно готовят фактор биосинтеза специфических антигенов путем суспендирования навесок витамина 1, витамина 12, глицерина и трилона Б в 1,0 -ном растворе липополисахаридпептидной фракции О-антигена бактерий родаилии 13453 1 2010.08.30 фильтрации через мембрану с размером пор 0,22 мкм, полученный фактор биосинтеза специфических антигенов смешивают с сывороткой крови овец или кроликов и фосфатным буфером с 7,0-7,4. Изобретение относится к микробиологии, в частности к производству биологических препаратов против лептоспироза. Лептоспиры были выделены в чистой культуре значительно позже (1917), чем многие другие патогенные микроорганизмы. Это связано с их повышенной требовательностью к составу питательной среды. Первые культуры были выращены на сыворотке крови кролика, в последующих работах использовали разведенную сыворотку. Простейшая сывороточная среда представляет собой смесь простерилизованной воды с асептически полученной сывороткой крови кролика или овцы в разных количествах. Известно значительное количество сывороточных сред различного состава 2. Это среды Уленгута, Любашенко, Терских, Кортгофа, а также полужидкая среда Флетчера. Вторая группа сред - это полусинтетические и синтетические белковые и безбелковые питательные среды 3. Наиболее широкое распространение имеют следующие среды синтетическая безбелковая среда Шенберга (1967), синтетическая безбелковая среда Торнея (1974), твинальбуминовая среда Элленгаузена в модификации Джонсона (1967), твин-альбуминовая среда Рассела (1986), среда Элленгаузена (1967), альбуминовые среды 2. Полусинтетические среды имеют сходный состав. Они содержат фосфатный буфер,растворы неорганических солей, витамины 1 и 12, жирные кислоты и бычий альбумин. Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является среда, приготовленная Зайцевой А.В. и Дремач Г.Э 1. Известная среда для культивирования лептоспирозных бактерий содержит сыворотку крови овец или кроликов и дополнительно фосфатный буфер с 7,0-7,4 и 0,15 -ный раствор липополисахаридпептидной фракции -антигена бактерий родаилипри следующем соотношении компонентов, мас.сыворотка крови овец или кроликов 5-10 0,15 -ный раствор липополисахаридпептидной фракции-антигена бактерий родаили 1-5 фосфатный буфер,7,0-7,4 остальное. Среда такого состава обеспечивает высокое накопление лептоспирозных бактерий, но при многократных пересевах они утрачивают биосинтез специфического антигена и отмечается снижение их иммуногенности. Задача изобретения - повышение биологической активности целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что к смеси белковой основы, буферного раствора добавляется фактор биосинтеза специфических антигенов. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда для пересева лептоспирозных бактерий содержит сыворотку крови овец или кроликов и фосфатный буфер с 7,0-7,4, отличается тем, что дополнительно содержит фактор биосинтеза специфических антигенов при следующем соотношении компонентов, мас.сыворотка крови овец или кроликов 5,0-10,0 фактор биосинтеза специфических антигенов 5,0 фосфатный буфер,7,0-7,4 остальное,при этом массовое соотношение сыворотки крови, фактора биосинтеза специфических антигенов и фосфатного буфера составляет 1118 или 2117, а фактор биосинтеза специфических антигенов имеет следующий состав, мас.0,06 витамин 1 витамин 12 0,007 2-антигена бактерий родаилиостальное. Способ получения среды для пересева лептоспирозных бактерий, заключающийся в том, что предварительно готовят фактор биосинтеза специфических антигенов путем суспендирования навесок витамина 1 витамина 12, глицерина и трилона Б в 1,0 -ном растворе липополисахаридпептидной фракции -антигена бактерий родаилии фильтрации через мембрану с размером пор 0,22 мкм, полученный фактор биосинтеза специфических антигенов смешивают с сывороткой крови овец или кроликов и фосфатным буфером с 7,0-7,4. Пример 1 Из яремной вены овец производили забор крови. После образования сгустка форменных элементов и фибрина отделяли сыворотку, прогревали при температуре 56-58 С в течение 30-60 минут. Инактивированную сыворотку фильтровали последовательно через фильтры с величиной пор 1,0, 0,45 и 0,22 мкм. Фактор биосинтеза готовили путем ресуспендирования навесок витаминов 1 12,глицерина и трилона Б в 1,0 -ном растворе липополисахаридпептидной фракции антигена бактерий родаилипри следующем соотношении компонентов, мас.0,06 витамин 1 витамин 12 0,007 глицерин 0,4 трилон Б 0,02 1,0 -ный раствор липополисахаридпептидной фракции О-антигена бактерий родаилиостальное. Среду готовили путем смешивания сыворотки крови овец, фактора биосинтеза и фосфатно-буферного раствора в соотношении 1118. Для оценки антигенной активности лептоспиры пересевали 10-кратно с интервалом 5 суток на приготовленной питательной среде и вводили внутривенно кроликам по 15 млн. микробных клеток. Через 24 суток у иммунизированных животных производили забор крови и учет титров специфических антител в РМА. Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп , , , ,исоставил соответственно 11600,1800, 11600, 1800, 1800 и 11600. Пример 2 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но для приготовления среды использовали сыворотку крови кролика. Сыворотку крови кролика, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1118. Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп , ,исоставил соответственно 11600, 1800, 13200, 11600, 1800 и 11600. Пример 3 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 2117. Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп , ,исоставил соответственно 11600, 1800, 13200, 11600, 1800 и 11600. Пример 4 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови кролика, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 2117. 3 13453 1 2010.08.30 Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп , ,исоставил соответственно 11600, 1800, 11600, 11600, 1800 и 11600. Пример 5 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1123. Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп , ,исоставил соответственно 1400, 1400, 1800, 1400, 1400 и 1800. Пример 6 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови кролика, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1123. Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп , ,исоставил соответственно 1400, 1400, 1800, 1800, 1400 и 1400. Пример 7 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 6341. Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп , ,исоставил соответственно 1400, 1400, 1400, 1800, 1400 и 1400. Пример 8 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови кролика, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 6341. Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп , ,исоставил соответственно 1400, 1400, 1800, 1400, 1400 и 1400. Из представленных данных видно, что лептоспиры всех серогрупп при выращивании на питательной среде, приготовленной путем смешивания сыворотки крови овец и кроликов, фактора биосинтеза и фосфатно-буферного раствора в соотношении 1118 и 2117 не утрачивали антигенной активности (титр 1800 и выше). Смешивание компонентов среды при других соотношениях напротив способствует снижению антигенной активности выращенных лептоспир (титр 1400). Источники информации 1.7321 С 1, 2005. 2. Ситьков В.И. Научные и практические основы промышленного производства и применения вакцин Дисс. д-ра вет. наук. - М., 1997. - С. 29. 3. Андросов Ф.З., Беляев И.Я., Клочко Р.Т. и др.Справочник ветеринарного лаборанта / Под ред. В.Я. Антонова. - М. Колос, 1981. - С. 37. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4