Способ определения пенициллина G в пищевой продукции животноводства

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕНИЦИЛЛИНАВ ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ ЖИВОТНОВОДСТВА(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Масалов Игорь Николаевич Шупилова Екатерина Павловна Шуляковская Ольга Васильевна Половинкин Леонид Васильевич(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(56) Методические указания по арбитражному определению остаточного содержания сульфониламидов, нитроимидазолов, пенициллинов и хлорамфеникола в продукции животноводства методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.1538-4/23. - М., 2008... .. . 2009. - . 877. - . 23. - . 2363-2374.. 2007. - . 30. - . 18. - . 3193-3201... .. . 2010. - . 1217. - . 41. - . 6394-6404... . . . - 2010. - . 396. - . 8. . 3027-3040. Методические указания по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства.3049-84. Методические указания МУК 4.2.02695. Экспресс-метод определения антибиотиков в пищевых продуктах.787986, 1980.(57) Способ определения пенициллинав пищевой продукции животноводства, при котором к анализируемой пробе добавляют пенициллинв качестве внутреннего стандарта,экстрагируют ацетонитрилом, упаривают полученный экстракт в токе воздуха при температуре 60 С, полученный сухой остаток разводят смесью ацетонитрила и воды, взятых в соотношении 7030, перемешивают 15 мин, помещают на 1 мин в ультразвуковую баню,центрифугируют, фильтруют и полученный фильтрат анализируют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе -1200 с масс-спектрометрическим детектором -6410, оснащенном металлической колонкой длиной 150 мм, диаметром 2,1 мм, заполненной неподвижной фазой 18 с зернением 3,5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь ацетонитрила и 0,1 -ного водного раствора муравьиной кислоты, взятых в соотношении 3070 в момент начала анализа, с градиентом по времени, скорость подвижной фазы составляет 0,3 см 3/мин, при этом время удерживания анализируемого компонента пенициллинаи внутреннего стандарта составляет 5,0 и 6,2 мин соответственно. 17824 1 2013.12.30 Изобретение относится к разделу аналитической химии медицинских препаратов и может использоваться для контроля за остаточным содержанием пенициллинав пищевой продукции животноводства. Известен способ определения остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллина и хлорамфеникола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометричееким детектором 1. Определение пенициллинапроизводят следующим образом 100 г анализируемой пробы предварительно подготавливают и измельчают на гомогенизаторе, из полученной средней пробы взвешивают 1 г образца и помещают его в полипропиленовую пробирку. После этого добавляют внутренний стандарт и 3 см 3 ацетонитрила и помещают на 15 мин на шейкер. Затем центрифугируют при 4000 об/мин в течение 15 мин при температуре 4 С, после центрифугирования переливают органический слой в новую полипропиленовую пробирку и упаривают в токе воздуха при температуре 60 С до 0,1-0,2 см 3. К остатку приливают 2 см 3 деионизованной воды, перемешивают и центрифугируют при 4000 об/мин в течение 5 мин при температуре 20 С. Полученный экстракт очищают методом ТФЭ на картридже. Перед нанесением экстракта на картридж последовательно кондиционируют сорбент 2 см 3 метанола и 2 см 3 воды, наносят анализируемый экстракт, промывают картридж 2 см 3 деионизованной воды и сушат в вакууме водоструйного насоса в течение 10 мин. После этого элюируют аналиты 2 см 3 метанола. Элюат помещают на нагревательный модуль и упаривают в токе воздуха при температуре 40 С до 0,1 см 3. К полученному остатку добавляют 0,9 см 3 раствора метанол/вода (60/40), помещают на 1 мин в ультразвуковую баню и фильтруют через мембранный фильтр в виалу, полученный раствор используют для ВЭЖХ/МС/МС анализа. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Общими признаками для заявляемого способа и прототипа являются экстракция пенициллинаорганическим растворителем ацетонитрилом, упаривание органического растворителя и последующее определение пенициллинаметодом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором. Однако способпрототип является длительным по времени (10-12 ч) и трудоемким. Задачей заявляемого изобретения является упрощение способа определения пенициллинав пищевой продукции животноводства за счет исключения из пробоподготовки стадии твердофазной экстракции и повторного упаривания в токе воздуха на нагревательном модуле. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ определения пенициллинав пищевой продукции животноводства, при котором к анализируемой пробе добавляют пенициллинв качестве внутреннего стандарта, экстрагируют ацетонитрилом, упаривают полученный экстракт в токе воздуха при температуре 60 С, полученный сухой остаток разводят смесью ацетонитрила и воды,взятых в соотношении 3070, перемешивают 15 мин, помещают на 1 мин в ультразвуковую баню, центрифугируют, фильтруют и полученный фильтрат анализируют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе -1200 с массспектрометрическим детектором -6410, оснащенном металлической колонкой длиной 150 мм, диаметром 2,1 мм, заполненной неподвижной фазой 18 с зернением 3,5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь ацетонитрила и 0,1 -ного водного раствора муравьиной кислоты, взятых в соотношении 3070 в момент начала анализа, с градиентом по времени, скорость подвижной фазы составляет 0,3 см 3/мин, при этом время удерживания анализируемого компонента пенициллинаи внутреннего стандарта составляет 5,0 и 6,2 мин соответственно. Пример. Для определения содержания пенициллинав образце мяса 100 г анализируемой пробы предварительно подготавливают и измельчают на гомогенизаторе, из полученной 2 17824 1 2013.12.30 средней пробы взвешивают 2 г в полипропиленовую пробирку объемом 50 см 3. К пробе добавляют 50 мм 3 внутреннего стандарта (пенициллин ) концентрацией 100 нг/см 3. После этого к пробе добавляют 6 см 3 ацетонитрила, после чего осуществляют встряхивание пробирки с содержимым в течение 15 мин на вортексе. Далее пробирку с содержимым центрифугируют на скорости 4000 об/мин при температуре 4 С в течение 15 мин. Полученный раствор декантируют в новую полипропиленовую пробирку объемом 15 см 3, которую затем помещают в аппарат для выпаривания и упаривают в токе воздуха при температуре 60 С до получения невыпариваемого остатка, к полученному остатку добавляют 1 см 3 смеси ацетонитрил/вода (30/70), полученный раствор перемешивают 15 мин на вортексе, после чего помещают на 1 мин в ультразвуковую баню, центрифугируют при 4000 об/мин в течение 15 мин при температуре 4 С, после этого полученный экстракт фильтруют в виалу для автосэмплера через шприцевой фильтр-20/15 фирмы -, затем компоненты полученного экстракта разделяют и регистрируют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором на жидкостном хроматографе -1200 с масс-спектрометрическим детектором -6410 с металлической колонкой длиной 150 мм, диаметром 2,1 мм,заполненной неподвижной фазойс зернением 3,5 мкм и аналогичной предколонкой, при этом измерения на масс-спектрометрическом детекторе производят в режиме мониторинга множественных реакций (МКМ), определяемые ионы и основные настройки детектора при определении содержания пенициллинав анализируемой пробе приведены в табл. 1. Таблица 1 Определяемые ионы и основные настройки детектора при определении содержания пенициллинаВещество Энергия соударений эВ 15 10 10 35 В качестве подвижной фазы используют смесь ацетонитрила и 0,1 -ного водного раствора уксусной кислоты в соотношении 3070 соответственно в начальный момент анализа с градиентом, указанным в табл. 2. Таблица 2 Градиент мобильной фазы Время Содержание 0,1 -ного водного раствора уксусной кислоты 70 50 0 0 Подвижная фаза имеет скорость 0,3 см 3/мин, а количественное определение каждого компонента осуществляют посредством методом внутреннего стандарта по соотношению площадей пиков анализируемого вещества и внутреннего стандарта. Линейный диапазон детектирования 1-50 нг. Нижний предел измерения концентрации пенициллинасоставляет 0,5 мкг/кг. Степень извлечения не менее 90 . 3 17824 1 2013.12.30 Аналогичным образом можно проводить определение пенициллинав молоке, яйцах и другой пищевой продукции животноводства. Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что предложенный способ позволяет быстро с высокой чувствительностью, селективностью и точностью определять содержание пенициллинав пищевой продукции животноводства. Кроме этого, исключение из пробоподготовки стадии твердофазной экстракции позволяет отказаться от использования дорогостоящих картриджей и, следовательно, снизить затраты на проведение исследования. Источники информации 1. Методические указания по арбитражному определению остаточного содержания сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллина и хлорамфеникола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.15384/23. - С. 1-18 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4