Способ определения количества внесенной фолиевой кислоты в плодоовощной продукции и хлебобулочных изделиях

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ВНЕСЕННОЙ ФОЛИЕВОЙ КИСЛОТЫ В ПЛОДООВОЩНОЙ ПРОДУКЦИИ И ХЛЕБОБУЛОЧНЫХ ИЗДЕЛИЯХ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Белышева Людмила Леонидовна Соколов Сергей Михайлович Воронцова Ольга Сергеевна Полянских Елена Ильинична(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(57) Способ определения количества внесенной фолиевой кислоты в плодоовощной продукции или хлебобулочных изделиях, при котором осуществляют экстракцию фолиевой кислоты из образца продукта или изделия, очистку и концентрирование полученного экстракта на колонке, заполненной анионитом ФИБАН А-6, и определяют массовую концентрацию фолиевой кислоты методом ВЭЖХ. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также к сельскому хозяйству и пищевой промышленности. Заявителю неизвестен способ определения количества внесенной фолиевой кислоты в плодоовощной продукции и хлебобулочных изделиях, в силу чего не может быть указан объект, являющийся наиболее близким аналогом заявленного способа. Задачей заявляемого изобретения является создание способа, позволяющего быстро и точно определить количество внесенной фолиевой кислоты в плодоовощной продукции и хлебобулочных изделиях Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ определения количества внесенной фолиевой кислоты в плодоовощной продукции и хлебобулочных изделиях, при котором осуществляют экстракцию фолиевой кислоты из образца продукта или изделия, очистку и концентрирование полученного экстракта на колонке, заполненной анионитом ФИБАН А-6, и определяют массовую концентрацию фолиевой кислоты методом ВЭЖХ. 9867 1 2007.10.30 Пример. Определение количества внесенной фолиевой кислоты в плодоовощной продукции и хлебобулочных изделиях 1. Экстракция. Навеску образца массой 20-30 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см 3 , вносят 100 см 3 0,01 М раствора гидроксида натрия, тщательно перемешивают. Устанавливают колбу на перемешивающее устройство для экстракции. Время экстракции 60 мин. Содержимое конической колбы переносят количественно в мерную колбу объемом 200 см 3 и доводят до метки 0,01 М раствором гидроксида натрия. Полученный экстракт переносят в центрифужные стаканы объемом 250 см 3. Вес стаканов уравновешивают с точностью до 0,05 г. Стаканы устанавливают в лабораторную центрифугу для центрифугирования. Условия центрифугирования скорость 5-5,5 тыс. оборотов в мин, время - 20 мин. Надосадочную жидкость дополнительно фильтруют через бумажный фильтр (синяя лента). Замеряют общий объем экстракта. 2. Очистка и концентрирование экстракта. 50 см 3 экстракта, полученного по п. 1, пропускают через хроматографическую колонку, заполненную анионитом ФИБАН А-6, подготовленную соответствующим образом,со скоростью 1 капля в секунду. Элюируют фолиевую кислоту из хроматографической колонки 7 см 3 15 растворас рН 9. Примечание 0,5 г сухого анионита помещают в стеклянную или тефлоновую колонку с 8-10 мм. Колонку заполняют 10 -ным раствором соляной кислоты и выдерживают 15-20 мин, кислоту вымывают дистиллированной водой до рН 7. Далее колонку заполняют 2 н раствороми выдерживают 15-20 мин, затем отмывают от щелочи дистиллированной водой до рН 7. Потом колонку заполняют 10 -ным раствором соляной кислоты и выдерживают 15-20 мин, промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции. Затем пропускают экстракт для очистки и концентрирования через колонку с анионитом ФИБАН А-6. 3. Подготовка к выполнению измерений. 3.1 Подготовка измерительной аппаратуры. Включают хроматограф согласно инструкции по эксплуатации, устанавливают рабочие режимы для детектора и насоса. Прокачивают через колонку смесь буферов в течение 0,5 ч до выхода прибора на режим и стабилизации процессов в колонке. Включают систему регистрации сигналов согласно инструкции по эксплуатации. 3.2 Установление градуировочной характеристики. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади хроматографического пика от концентрации фолиевой кислоты в растворе, устанавливают по 6 точкам в диапазоне от 1,0 до 0,05 мкг/см 3. Градуировочные растворы хроматографируют не менее 5 раз, начиная с самой низкой концентрации. Регистрацию сигнала, обработку и хранение полученной информации проводят с использованием компьютерной системы. Площадь пика стандарта вычисляют общепринятыми методами. Затем строится градуировочная зависимость величины отклика детектора от концентрации фолиевой кислоты. Условия хроматографического анализа объем вводимой в хроматограф пробы 0,02 см 3 расход буфера 0,5 см 3/мин температура колонки 205 С длина волны детектора 286 нм подвижная фаза буферы А и Б. Соотношение буферов А и Б представлено в табл. 1. Время выхода фолиевой кислоты устанавливают при проведении градуировочных работ. 2 9867 1 2007.10.30 Таблица 1 Условия градиентного элюирования Время анализа, мин А- ацетонитрил Б - вода 0 5 95 5 5 95 10 30 70 13 80 20 15 80 20 4. Выполнение измерений. Подготовленную пробу по п. 2 (объем 7 см 3) вводят в прибор в количестве 0,02 см 3. Анализ проводят при тех же условиях, что и калибровку (см. п. 3.2.). Вычисление площади пика фолиевой кислоты в пробе проводится системой регистрации, обработки и хранения спектрометрической информации. 5. Обработка результатов измерений. Массовую концентрацию фолиевой кислоты в образцах обогащенной плодоовощной продукции и хлебобулочных изделиях вычисляют по формуле 12 100 ,34 где- массовая концентрация фолиевой кислоты в пробе, мкг/100 г 1 - общий объем экстракта, см 3 2 - объем элюата, пропущенного через хроматографическую колонку, см 3- масса навески пробы, г С - концентрация фолиевой кислоты, найденная по градуировочному графику,мкг/см 3 3 - объем экстракта, взятого для элюирования, см 3 4 - объем элюата, взятого для хроматографирования, см 3 100 - коэффициент пересчета концентрации фолиевой кислоты на 100 г продукта. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, рассчитанных до третьего и округленных до второго десятичного знака. Результаты определения количества внесенной фолиевой кислоты в плодоовощной продукции и хлебобулочных изделиях предлагаемым способом представлены в табл. 2. Таблица 2 Определение количества внесенной фолиевой кислоты в плодоовощной продукции и хлебобулочных изделиях Способ Количество используемых Время Извлечение фолиевой определения реактивов анализа, ч кислоты,1. Ацетонитрил 2. Анионит ФИБАН А-6 Предлагаемый 3. Соляная кислота 2 97 4. Гидроксид натрия 5. Фолиевая кислота Таким образом, достигаемый технический результат заявляемого способа заключается в точном и быстром определении количества внесенной фолиевой кислоты в плодоовощной продукции или хлебобулочных изделиях при небольшом использовании дорогостоящих реактивов. 3 9867 1 2007.10.30 Источники информации 1.. - 1999. - . 82,1. - . 119-127. 2. Жданов Ю.И. и др. Медицинская наука и ее связь с практическим здравоохранением. Тезисы докладов республиканской научно-практической конференции. - Витебск, 1998. С. 41. 3. Экспериментальная витаминология. - Мн. Наука и техника, 1979. - С. 353-389. 4.1065779 А 1, 1984. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4