Способ определения лимонной кислоты в кондитерских изделиях

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ В КОНДИТЕРСКИХ ИЗДЕЛИЯХ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Филонов Валерий Петрович Белышева Людмила Леонидовна Полянских Елена Ильинична(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(57) Способ определения лимонной кислоты в кондитерских изделиях, при котором осуществляют экстракцию лимонной кислоты из исследуемого образца дистиллированной водой в ультразвуковой бане в течение 15 минут при температуре 50-60 С, экстракт фильтруют, определяют количественное содержание лимонной кислоты в фильтрате методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием спектрометрического детектора и рассчитывают массовую концентрацию лимонной кислоты в исследуемом образце. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также к пищевой промышленности. В настоящее время расширяется ассортимент кондитерских изделий, в которые, кроме естественного содержания лимонной кислоты, дополнительно с целью улучшения вкуса вносится лимонная кислота как пищевая добавка 330. В связи с этим возникает необходимость в проведении анализа такой продукции. В доступной научно-технической и патентной литературе заявителем ближайший аналог заявляемого способа не выявлен. Задачей заявляемого изобретения является создание экспресс-способа определения лимонной кислоты в кондитерских изделиях с высокой точностью. 14242 1 2011.04.30 Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ определения лимонной кислоты в кондитерских изделиях, при котором осуществляют экстракцию лимонной кислоты из исследуемого образца дистиллированной водой в ультразвуковой бане в течение 15 мин при температуре 50-60 С,экстракт фильтруют, определяют количественное содержание лимонной кислоты в фильтрате методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием спектрофотометрического детектора и рассчитывают массовую концентрацию лимонной кислоты в исследуемом образце. Указанные нами условия экстракции позволяют достичь максимального извлечения лимонной кислоты из кондитерских изделий. Пример. Определение лимонной кислоты в кондитерских изделиях. 1. Экстракция. Навеску продукта массой 5-10 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см 3,добавляют 60-70 см 3 дистиллированной воды, помещают в ультразвуковую баню на 15 мин при температуре 50-60 С. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры и доводят общий объем до метки дистиллированной водой, содержимое колбы тщательно перемешивают, фильтруют через складчатый фильтр. Перед вводом в хроматограф фильтрат пропускают через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Полученный таким образом фильтрат в количестве 0,005 см 3 вводят в хроматограф. 2. Приготовление растворов. 2.1. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой концентрацией 10 . 5,7 см 3 ортофосфорной кислоты плотностью 1,7 г/см 3 переносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 и доводят дистиллированной водой до метки при температуре(202) С. 2.2. Приготовление элюирующего раствора. 2.2.1. Приготовление раствора натрия фосфорнокислого однозамещенного концентрацией 0,02 моль/дм 3 (2,0-2,1). В химический стакан вместимостью 1 дм 3 взвешивают (3,120,001) г натрия фосфорнокислого однозамещенного, растворяют в 800-850 см 3 дистиллированной воды, измеряют показательраствора с помощью иономера и доводят его до значения 2,0-2,1, используя раствор ортофосфорной кислоты с массовой концентрацией 10 . Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см 3 и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор фильтруют через тефлоновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. 2.2.2. Приготовление смеси раствора натрия фосфорнокислого однозамещенного и ацетонитрила в соотношении 99,50,5 по объему. 995 см 3 раствора натрия фосфорнокислого однозамещенного переносят в емкость для элюента, добавляют 5 см 3 ацетонитрила и тщательно перемешивают. 2.3. Приготовление градуировочных растворов. 2.3.1. Приготовление основного градуировочного раствора А лимонной кислоты с массовой концентрацией 10 мг/дм 3. В стакан вместимостью 50 см 3, предварительно заполненный 20-30 см 3 элюирующего раствора, вносят навеску лимонной кислоты массой (0,10,01) г. Результат взвешивания фиксируют с точностью до 0,0001 г. Навеску количественно переносят элюирующим раствором в мерную колбу объемом 1000 см 3, перемешивают до полного растворения лимонной кислоты и доводят объем до метки элюирующим раствором при температуре (202) С. Точную концентрацию лимонной кислоты рассчитывают с учетом содержания основного вещества по формуле 10 4 , где- массовая концентрация лимонной кислоты в градуировочном растворе, мг/дм 3 2 14242 1 2011.04.30- масса навески лимонной кислоты, г- содержание основного вещества лимонной кислоты,- объем мерной колбы, см 3 104 - коэффициент пересчета размерности. Раствор годен в течение 7 суток при хранении в холодильнике при температуре от 3 до 8 С. 2.3.2. Приготовление рабочих градуировочных растворов лимонной кислоты. Готовят четыре рабочих градуировочных раствора путем разбавления основного раствора А элюирующим раствором. Для приготовления рабочих градуировочных растворов лимонной кислоты с концентрацией 5,0 10,0 25,0 50,0 мг/дм 3 берут 2,5 5,0 12,5 25,0 см 3 раствора А в мерную колбу вместимостью 50 см 3 и доводят объем до метки элюирующим раствором. Точное значение концентрации лимонной кислоты в рабочих градуировочных растворах рассчитывают с учетом точного значения концентрации в основном градуировочном растворе. В качестве рабочего раствора 5 используется основной градуировочный раствор А. Рабочие растворы 1-4 используют свежеприготовленными. 3. Установление времени удерживания лимонной кислоты. Для определения времени удерживания лимонной кислоты 0,005 см 3 рабочего градуировочного раствора с концентрацией 50 мг/дм 3, приготовленного по п. 2.3.2, хроматографируют не менее 5 раз. Вычисляют среднее арифметическое из величин времени удерживания лимонной кислоты. В табл. 1 представлены условия хроматографирования лимонной кислоты и время удерживания. Таблица 1 Условия хроматографирования и время удерживания лимонной кислоты Наименование параметра Количественное значение параметра Скорость потока элюента 0,3 см 3/мин Температура термостата колонки(350,1) С Длина волны детектирования /ширина полосы 220/40 нм Объем вводимой пробы 0,005 см 3 Время удерживания лимонной кислоты 6,30,2 мин 4. Установление градуировочной характеристики. Для определения рабочего диапазона концентраций и линейности функции градуировки выполняют начальную градуировку хроматографа. Ее проводят по рабочим градуировочным растворам лимонной кислоты, хроматографируя каждый раствор не менее двух раз. Параметры градуировочной зависимости рассчитывают путем анализа линейной регрессии скорректированных площадей пиков. 5. Выполнение измерений. Анализ полученного фильтрата по п. 1 проводят на жидкостном хроматографе. Условия хроматографирования такие же, как и при построении градуировочного графика по п. 4. Проводят анализ двух параллельных проб исследуемого образца. Каждая параллельная проба хроматографируется не менее двух раз. Если рассчитанная массовая концентрация лимонной кислоты в испытуемой пробе превышает градуировочный диапазон, пробу разбавляют элюирующим раствором, подбирая коэффициент разбавления таким образом,чтобы полученное значение массовой концентрации кислоты попадало в диапазон градуировки, и повторяют измерение. 6. Обработка результатов измерений. Массовую концентрацию лимонной кислоты в пробе (г/кг) рассчитывают по формуле 10 3 14242 1 2011.04.30 где- массовая концентрация лимонной кислоты в хроматографируемом растворе пробы,мг/дм 3- объем, в котором растворена навеска, см 3- масса навески, г 10-3 - коэффициент пересчета в г/кг. Расчет массовой концентрации лимонной кислоты проводят до третьего десятичного знака с последующим округлением до второго десятичного знака. За результат анализа принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Результаты определения содержания лимонной кислоты в кондитерских изделиях представлены в табл. 2. Достигаемый технический результат заявляемого способа заключается в том, что способ является экспресс-методом и позволяет определить лимонную кислоту в кондитерских изделиях с высокой точностью за 35 мин. Таблица 2 Определяемое содержание лимонной кислоты в кондитерских изделиях предлагаемым способом Содержание, г/кг Температура Время эксНаименование Извлечение,экстракции, тракции, Расчетные Внесенное Опред-е по продукта Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4