Среда для выращивания лептоспирозных бактерий

(51)12 1/20 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ БАКТЕРИЙ(71) Заявители Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович(72) Авторы Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович(73) Патентообладатели Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович(57) Среда для культивирования бактерий рода , содержащая сыворотку крови овец или кроликов, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фосфатный буферрН 7,0-7,4 и 0,15 раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена бактерий родаилипри следующем соотношении компонентов, мас.сыворотка крови овец или кроликов 5-10 0,15 раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена бактерий родаили 15 фосфатный буфер, рН 7,0-7,4 остальное. Изобретение относится к микробиологии, в частности - к производственному культивированию лептоспирозных бактерий, используемых в диагностике и изготовлении вакцин. Для культивирования лептоспирозных бактерий используют следующие питательные среды вводно-сывороточная среда Ферваорт-Вольфа (1928), Кортгофа (1932), Тарасова(1937), синтетические безбелковые среды Шенберга (1967) и Торнея (1974), Элленгаузена(1967), Элленгаузена для ветеринарных целей (1976), Рассела (1986), твин-альбуминсывороточная среда Эллиса, альбуминовая среда ГНКИ (Бабич М.А., Дигальцев Ю.М.,1965) и др. Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является среда Любашенко 1. Среду Любашенко готовят путем фильтрации через бумагу и стерилизации при 1 атм. в течение 30 мин нехлорированной водопроводной, колодезной или речной воды. После охлаждения рН воды устанавливают 7,3-7,4 и добавляют 5 сыворотки крови кролика или барана, прогретой при 56 С в течение 1 ч. Среду фильтруют через пластинки СФ в приборе Зейтца при небольшом вакууме (660 мм ртутного столба) и асептически разливают в пробирки. Для проверки на стерильность пробирки выдерживают при 37 С 48 ч. 7321 1 2005.09.30 При соблюдении всех необходимых условий штаммы лептоспирозных бактерий вырастают в этой среде через 5-7 суток, накопление их не превышает 8-100 млн/см 3 микробных клеток. Цель изобретения - повышение биологической активности целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что к смеси белковой основы и буферного раствора добавляют стимулятор. В качестве стимулятора роста лептоспир используют 0,15 -ный раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена эшерихиозных или сальмонеллезных бактерий. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что среда для культивирования бактерий родасодержит сыворотку крови овец или кроликов и дополнительно фосфатный буфер с рН 7,0-7,4 и 0,15 раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена бактерий родаилипри следующем соотношении компонентов, мас.сыворотка крови овец или кроликов 5-10 0,15 раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена бактерий родаили 1-5 фосфатный буфер, рН 7,0-7,4 остальное. Пример 1. Для приготовления фосфатного буфера 1/15 раствора двузамещенного фосфата натрия и однозамещенного фосфата калия данные вещества смешивали в соотношении 73,смесь разводили дистиллированной водой в соотношении 110. рН устанавливали 7,0-7,4 добавлением первого или второго растворов и стерилизовали при температуре 120 С в течение 60 мин. Кровь барана дефибринировали, отделяли сыворотку, прогревали при температуре 5658 С в течение 30-60 мин. Прогретую сыворотку фильтровали через стерилизующие фильтры. Сыворотку крови овец, 0,15 -ный раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена из сальмонеллезных бактерий и фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 5194. Среда обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 508 млн/см 3 микробных клеток. Вакцина, приготовленная из данной культуры, вызывалау кроликов в титре 1800. Пример 2. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 -ный раствор липополисахаридполипептидной фракции -антигена эшерихиозных бактерий и фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 2117. Среда такого состава обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 524 млн/см 3 микробных клеток. Вакцина, приготовленная из данной культуры, обеспечивала проявление иммунной реакции у кроликов в 1680. Пример 3. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но при изготовлении среды использовали сыворотки крови кроликов. Накопление лептоспирозных бактерий составило 508 млн/см 3 микробных клеток. Вакцина, приготовленная из данной культуры, обеспечивала у кроликов 1640. Пример 4. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 -ный раствор липополисахаридполипептидной фракции -антигена эшерихиозных бактерий и фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 1118. 2 7321 1 2005.09.30 Накопление лептоспирозных бактерий составило 500 млн/см 3 микробных клеток. Вакцинированные кролики давали 1580. Пример 5. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 -ный раствор липополисахаридполипептидной фракции -антигена эшерихиозных бактерий и фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 10189. Накопление лептоспирозных бактерий составило 520 млн/см 3 микробных клеток. Вакцинированные кролики давали 1540. Пример 6. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 -ный раствор липополисахаридполипептидной фракции -антигена эшерихиозных бактерий и фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 6341. Накопление лептоспирозных бактерий составило 95 млн/см 3 микробных клеток. Пример 7. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, 0,15 -ный раствор липополисахаридполипептидной фракции -антигена эшерихиозных бактерий и фосфатный буфер смешивали при соотношении компонентов (мас. ) 51119. Накопление лептоспирозных бактерий составило 100 млн/см 3 микробных клеток. В ходе экспериментальной работы нами установлено, что при содержании сыворотки животных в питательной среде менее 5 и более 10 существенно снижается интенсивность роста и деления лептоспирозных бактерий. При содержании в питательной среде менее 10,15 -ный раствор липополисахаридполипептидной фракции О-антигена эшерихиозных бактерий его стимулирующее действие на размножение лептоспир практически не проявлялось. Присутствие О-антигена из сальмонелл и эшерихий в питательной среде более 5 приводило к диссоциации и частичному лизису лептоспир, концентрация которых составляла 95-100 млн/см 3. Из представленных данных видно, что для производственного культивирования лептоспирозных бактерий, используемых для изготовления диагностических и профилактических препаратов, целесообразно применять питательную среду, содержащую 5-10 сыворотки крови овец или кроликов, 1-5 липополисахаридполипептидной фракции Оантигена из эшерихиозных или сальмонеллезных бактерий и 85-94 фосфатного буфера. Питательная среда вышеуказанного состава обеспечивает накопление лептоспир 500640 млн/см 3 микробных клеток. Источники информации 1. Андросов Ф.З., Беляев И.Я., Клочко Р.Т. и др. Справочник ветеринарного лаборанта / Под ред. В.Я. Антонова. - . Колос, 1981. - С. 37. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.