Среда для сублимации грамположительных бактерий и способ ее получения

(51)12 1/04 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДА ДЛЯ СУБЛИМАЦИИ ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ(71) Заявители Зайцев Владимир Владимирович Дремач Геннадий Эдуардович(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Дремач Геннадий Эдуардович(73) Патентообладатели Зайцев Владимир Владимирович Дремач Геннадий Эдуардович(57) 1. Среда для сублимации грамположительных бактерий, содержащая белковую основу и криопротектор, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы содержит 3 -ный щелочно-перекисный гидролизат сыворотки крови и ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови, содержащие по 400-500 мгаминного азота, в соотношении массовых частей 163, а в качестве криопротектора - защитную композицию следующего состава, мас.трилон Б 1,6-2,0 фосфолипиды 0,02-0,025 никотиновая кислота 0,002 желатин 10,0 сахароза остальное,при этом соотношение массовых частей белковой основы и криопротектора составляет 11. 2. Способ получения среды для сублимации грамположительных бактерий, заключающийся в смешивании белковой основы, содержащей 3 -ный щелочно-перекисный гидролизат сыворотки крови и ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови, содержащие по 400-500 мгаминного азота, в соотношении массовых частей 163 и защитной композиции следующего состава, мас.трилон Б 1,6-2,0 фосфолипиды 0,02-0,025 никотиновая кислота 0,002 желатин 10,0 сахароза остальное,при этом белковую основу и защитную композицию и смешивают в соотношении массовых частей 11. 7331 1 2005.09.30 Изобретение относится к микробиологии, в частности к производству сухих живых вакцин из грамположительных бактерий. В настоящее время достаточно широко применяются защитные среды для сублимации микроорганизмов, в состав которых входят такие компоненты, как раствор лактозы, сыворотка крови, обезжиренное молоко (4, 2, 6, 7), углеводы, гидролизат казеина (5, 8), глицериновый буфер с добавлением пептона (1). Известна сахароза-желатиновая среда с 0,1 агар-агара (2, 9, 10). Наиболее близким техническим решением к предлагаемому способу является защитная среда следующего состава (3) пептон - 5 , сахароза - 10 , желатин - 1,5 ,калийфосфатный буфер - 83,5 . Указанная среда не обеспечивает достаточную защиту бактерий в первый месяц после сублимации, так как жизнеспособность сохраняют около 50 микроорганизмов. Снижение жизнеспособности бактерий приводит к снижению иммуногенности вакцин. Задача изобретения - повышение биологической активности целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что приготовленные 3 -ный щелочноперекисный гидролизат сыворотки крови, ферментативный гидролизат форменных элементов крови животных, ферментативный гидролизат сыворотки крови, содержащие 400500 мгаминного азота, и защитную композицию смешивают в соотношении 16310. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что среда для сублимации грамположительных бактерий содержит белковую основу и криопротектор, отличающаяся тем, что в качестве белковой основы она содержит 3 -ный щелочно-перекисный гидролизат сыворотки крови и ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови, содержащие по 400-500 мгаминного азота в соотношении массовых частей 163, а в качестве криопротектора - защитную композицию следующего состава, мас.трилон Б 1,6-2,0 фосфолипиды 0,02-0,025 никотиновая кислота 0,002 желатин 10,0 сахароза остальное,при этом соотношение массовых частей белковой основы и криопротектора составляет 11. Способ получения среды для сублимации грамположительных бактерий, заключающийся в смешивании белковой основы, содержащей 3 -ный щелочно-перекисный гидролизат сыворотки крови и ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови, содержащие по 400-500 мгаминного азота, в соотношении массовых частей 163 и защитной композиции следующего состава, мас.трилон Б 1,6-2,0 фосфолипиды 0,02-0,025 никотиновая кислота 0,002 желатин 10,0 сахароза остальное,при этом белковую основу и защитную композицию смешивают в соотношении массовых частей 11. Пример 1. Среду для сублимации грамположительных бактерий готовили путем смешивания 3 -ного щелочно-перекисного гидролизата сыворотки крови, ферментативных гидролизатов форменных элементов и сыворотки крови, содержащих 400 мгаминного азота, и защитную композицию в соотношении 16310. Защитную композицию готовили путем смешивания ингредиентов в следующем соотношении, вес.2 7331 1 2005.09.30 трилон Б 1,6 фосфолипиды 0,02 никотиновая кислота 0,002 желатин 10,0 сахароза остальное. Среда обеспечивала жизнеспособность и репродуктивную активность у 95,2 рожистых бактерий. Пример 2. Среду для сублимации готовили, как в примере 1, но защитную композицию получали путем смешивания ингредиентов в следующем соотношении, вес.трилон Б 2,0 фосфолипиды 0,025 никотиновая кислота 0,002 желатин 10,0 сахароза остальное. Среда обеспечивала жизнеспособность и репродуктивную активность у 94,6 рожистых бактерий. Пример 3. Среду для сублимации готовили, как в примере 1, но защитную композицию получали путем смешивания ингредиентов в следующем соотношении, вес.трилон Б 1,4 фосфолипиды 0,01 никотиновая кислота 0,001 сахароза остальное. Жизнеспособность и репродуктивная активность рожистых бактерий составила 44,1 . Пример 4. Среду для сублимации готовили, как в примере 1, но защитную композицию получали путем смешивания ингредиентов в следующем соотношении, вес.трилон Б 2,1 фосфолипиды 0,03 никотиновая кислота 0,003 желатин 12,0 сахароза остальное. Жизнеспособность и репродуктивная активность рожистых бактерий составила 62,4 . Пример 5. Среду для сублимации готовили, как в примере 1, но 3 -ный щелочно-перекисный гидролизат сыворотки крови, ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови животных, содержащие 400-500 мгаминного азота, и защитную композицию смешивали в соотношении 25211. Среда обеспечивала жизнеспособность у 62,8 рожистых бактерий. Пример 6. Среду для сублимации готовили, как в примере 1, но 3 -ный щелочно-перекисный гидролизат сыворотки крови, ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови животных, содержащие 400 мгаминного азота, и защитную композицию смешивали в соотношении 0,573,59. Среда обеспечивала жизнеспособность у 42,2 рожистых бактерий. 3 7331 1 2005.09.30 Пример 7. Среду готовили, как в примере 1, но использовали ферментативные гидролизаты форменных элементов и сыворотки крови животных, содержащие 500 мгаминного азота. Среда обеспечивала жизнеспособность у 94,8 рожистых бактерий. Предлагаемая среда используется для сублимации культур и живых вакцин из грамположительных бактерий, в том числе рожистых бактерий. Предлагаемая рецептура среды обеспечивает сохранение жизнеспособности и иммуногенности грамположительных бактерий, включая рожистые бактерии, на 94,6-95,2 . Источники информации 1. Рубченков П.Н. Выживаемость пастерелл штамма К после регидратации и в аэрозольном состоянии//Ветеринария. - 1985. -1. - С. 36. 2. Ярцев М.Я. Разработка технологии производства живых сухих вакцин против пастереллеза птиц, рожи свиней и бруцеллеза животных (экспериментальные исследования и внедрение) Дис.докт. биол. наук. -., 1990. - С. 77. 3. Ярцев М.Я. Разработка технологии производства живых сухих вакцин против пастереллеза птиц, рожи свиней и бруцеллеза животных (экспериментальные исследования и внедрение) Дис.докт. биол. наук. - ., 1990. - С. 312. 4..///.., . - , . - 1961. - . 3. - . 1-76. 5.,.// . .. 1970. - . 16. -8. - . 751-757. 6.21609921, 2000. 7.0259739 , 1988. 8.2338244 , 1999. 9.1510350 , 1996. 10.26006741 , 1989. Национальный центр интеллектуальной собственности. 20034, г. Минск, ул. Козлова, 20.