Вакцина поливалентная инактивированная против лептоспироза свиней и способ получения вакцины

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ВАКЦИНА ПОЛИВАЛЕНТНАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА СВИНЕЙ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ(71) Заявитель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(72) Авторы Зайцев Владимир Владимирович Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович Кондратенко Мария Юльяновна Шашкова Юлия Аркадьевна(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(56) ПАНИН А.Н. и др. Ветеринария. 2002. -1. - . 21-24.555664, 1983.32966 , 2008.2096042 1, 1997. ГАЙСЕНОК С.Л. и др. Сельское хозяйство - проблемы и перспективы Сб. научн. тр. - Гродно, 2006. - Т. 3. . 225-230. ЗАЙЦЕВ В.В. и др. Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных. Международная научно-практическая конференция. - Минск,2003. - . 117-118. ЗАЙЦЕВ В.В. и др. Ученые записки УО ВГАВМ, 2007. Т. 43. Вып. 2. . 48-51.828459, 1983.100456, 1955.(57) 1. Вакцина поливалентная инактивированная против лептоспироза свиней, содержащая инактивированный и концентрированный лептоспирозный антиген из штаммов лептоспир серогрупп , , , а и е и адъювант, отличающаяся тем, что содержит антиген, полученный концентрированием до 4 млрд. микробных клеток/см 3 инактивированной смеси культур указанных штаммов,выращенных до концентрации 400-780 млн. микробных клеток/см 3 и взятых в равных частях, и масляный адъювант и дополнительно содержит иммуномодулятор и стабилизатор при следующем соотношении компонентов, мас.инактивированный поливалентный лептоспирозный антиген, содержащий 4 млрд. микробных клеток/см 3 15,0 иммуномодулятор 0,4-2,0 стабилизатор 13,0-14,6 масляный адъювант остальное,при этом иммуномодулятор имеет следующий состав, мас.липополисахаридпептидная фракция О-антигена бактерий родаили 5,0 вода очищенная остальное,а стабилизатор имеет следующий состав, мас.глюкоза 50,0 вода очищенная остальное. 13452 1 2010.08.30 2. Способ получения вакцины поливалентной инактивированной против лептоспироза свиней, включающий смешивание компонентов, отличающийся тем, что предварительно готовят антиген путем смешивания в равных частях культур штаммов лептоспир серогрупп , , , а и е, выращенных глубинным культивированием в ферментере газо-вихревого типа при температуре 28 С в течение 60-72 часов на оптимизированной питательной среде, содержащей фактор роста,до концентрации 400-780 млн. микробных клеток/см 3, инактивирования полученной смеси и концентрирования до 4 млрд. микробных клеток/см 3, антиген смешивают с иммуномодулятором, стабилизатором и масляным адъювантом в массовом соотношении 15(0,42,0)(13,0-14,6)(68,4-71,6) соответственно. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к производству препаратов против лептоспироза. От момента создания первых вакцин Э. Дженнера против оспы человека (1796) и вакцин Пастера против сибирской язвы (1881) и других вакцинопрофилактика стала незаменимым средством в борьбе с инфекционными болезнями животных и человека. Первую вакцину против лептоспироза предложили в 1916 году , ,в Японии для профилактики лептоспироза у шахтеров. До 1978 года для профилактики лептоспироза животных применяли поливалентную фенольную вакцину. С 1978 года была внедрена в производство депонированная вакцина ВГНКИ, которая при однократном введении вызывала формирование иммунитета большей напряженности и продолжительности, чем фенольная вакцина при двукратной инъекции. В настоящее время для профилактики лептоспироза животных применяют концентрированную и сухую вакцины 3, 4, 5. Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является вакцина против лептоспироза животных лиофилизированная 1, 2. В известном способе лептоспирозные бактерии выращивают на твин-альбуминовой среде до 350-500 млн. микробных клеток/см 3. Лептоспирозные бактерии выращивали путем глубинного культивирования. В процессе культивирования перемешивание растущей культуры проводят в течение 5 мин по два раза в сутки при 50-60 об/мин мешалки. Культуру лептоспир концентрировали до получения концентрации клеток 1,5-2,0 млрд. микробных клеток/см 3. Защитную среду добавляют к концентрированной культуре лептоспир в соотношении 11. Защитную среду используют следующего состава 20 сахарозы, 4 желатина, 1 пептона, 75 фосфатного буфера. К смеси концентрированной культуры лептоспир и защитной среды добавляют простерилизованный 6 -ный гидрат окиси алюминия в количестве 20 к объему вакцины, дополнительно добавляют раствор мертиолята из расчета 1 г на 10 л вакцины. Далее вакцину перегружают в сублиматор с предварительно охлажденным до минус 60-65 С конденсатором. Камеру с вакциной вакуумируют до предельного остаточного давления 4-6 Па. Через 2-3 ч после вакуумирования включают подогрев полок, при этом конечная температура полок 30 С достигалась в течение 3-4 ч и поддерживалась автоматически в данном режиме до конца процесса сушки. В течение 30-35 ч происходит сублимация влаги при температуре продукта от -40 до-20 С. Затем следует быстрое нарастание температуры продукта от -20 до 24 С за 1012 ч. Далее идет досушивание вакцины при ее конечной температуре 24-26 С в течение 22-24 ч. Общее время сушки составляет 72-76 ч. После окончания процесса высушивания камеру установки заполняют сухим очищенным азотом. Вакцину переносят в бокс, флаконы укупоривают стерильными пробками УЛ-1 и обкатывают алюминиевыми колпачками. 13452 1 2010.08.30 Вакцина такого состава не обеспечивает высокого иммунного ответа у животных, метод ее изготовления сложный и нетехнологичен. Цель изобретения - повышение биологической активности целевого продукта, упрощение и удешевление технологии. Поставленная цель достигается тем, что штаммы лептоспир серогрупп , , ,ивыращивают глубинным методом в течение 60-72 ч в ферментере газо-вихревого типа при температуре 28 С на оптимизированной питательной среде, содержащей фактор роста до концентрации клеток 400780 млн./см 3. Далее культуры лептоспир разных серогрупп смешивают в равных соотношениях,инактивируют. Смесь инактивированных культур лептоспир разных серогрупп концентрируют методом ультрафильтрации до содержания 4 млрд. микробных клеток/см 3, и смешивают с иммуномодулятором и стабилизатором, и эмульгируют в масляном адъюванте. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что вакцина поливалентная инактивированная против лептоспироза свиней, содержащая инактивированный и концентрированный лептоспирозный антиген из штаммов лептоспир серогрупп , , ,ии адъювант, отличается тем, что содержит антиген, полученный концентрированием до 4 млрд. микробных клеток/см 3 инактивированной смеси культур указанных штаммов, выращенных до концентрации 400780 млн. микробных клеток/см 3 и взятых в равных частях, и масляный адъювант и дополнительно содержит иммуномодулятор и стабилизатор при следующем соотношении компонентов, мас.инактивированный поливалентный лептоспирозный антиген, содержащий 4 млрд. микробных клеток/см 3 15,0 иммуномодулятор 0,4-2,0 стабилизатор 13,0-14,6 масляный адъювант остальное,при этом иммуномодулятор имеет следующий состав, мас.липополисахаридпептидная фракция О-антигена бактерий родаили 5,0 вода очищенная остальное,а стабилизатор имеет следующий состав, мас.глюкоза 50,0 вода очищенная остальное. Способ получения вакцины поливалентной инактивированной против лептоспироза свиней, включающий смешивание компонентов, отличается тем, что предварительно готовят антиген путем смешивания в равных частях культур штаммов лептоспир серогрупп, , ,и , выращенных глубинным культивированием в ферментере газо-вихревого типа при температуре 28 С в течение 6072 ч на оптимизированной питательной среде, содержащей фактор роста, до концентрации 400-780 млн. микробных клеток/см 3, инактивирования полученной смеси и концентрирования до 4 млрд. микробных клеток/см 3, антиген смешивают с иммуномодулятором, стабилизатором и масляным адъювантом в массовом соотношении 15(0,4-2,0)(13,014,6)(68,4-71,6) соответственно. Пример 1. Лептоспирозные бактерии серогрупп , , ,ивыращивали глубинным методом в ферментере газо-вихревого типа при температуре 28 С в течение 60-72 ч на оптимизированной питательной среде, содержащей фактор роста, до концентрации 400-780 млн. микробных клеток/см 3. 13452 1 2010.08.30 Далее смешивали в равных частях инактивированные и концентрированные до 4 млрд. микробных клеток/см 3 лептоспирозные бактерии серогрупп , и . Вакцину поливалентную инактивированную против лептоспироза свиней готовили путем смешивания инактивированного и концентрированного лептоспирозного антигена,адъюванта, иммуномодулятора и стабилизатора при следующем соотношении компонентов, мас.инактивированный поливалентный лептоспирозный антиген, содержащий 4 млрд. микробных клеток /см 3 15,0 иммуномодулятор 0,4 стабилизатор 13,0 масляный адъювант остальное,при этом иммуномодулятор имеет следующий состав, мас.липополисахаридполипептидная фракция О-антигена бактерий родаили 5,0 вода очищенная остальное,а стабилизатор имеет следующий состав, мас.глюкоза 50,0 вода очищенная остальное. Поливалентный инактивированный лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 150,41371,6. На активность вакцину проверяли путем установления ее антигенных свойств. Для этого пяти кроликам массой 2,5 кг препарат вводили внутримышечно однократно в дозе 0,75 см 3. Через 24 дня после введения вакцины у кроликов брали кровь, готовили из нее сыворотку и определяли титр антител в РМА. Реакцию ставили с лептоспирами всех серогрупп, которые входят в состав вакцины. Титром считали наибольшее разведение сыворотки, при котором реакция оценивалась не менее чем на 2 креста. Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп , ,составил 1800, а с лептоспирами серогруппи- 1200. Пример 2. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 15214,668,4. Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп , ,составил 1800, а с лептоспирами серогруппи- 1200. Пример 3. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 150,414,670. Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп , ,составил 1800, а с лептоспирами серогруппи- 1200. Пример 4. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 1521370. 13452 1 2010.08.30 Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп , ,составил 1800, а с лептоспирами серогруппи- 1200. Пример 5. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 140,31273,7. Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп , ,составил 1400, а с лептоспирами серогруппи- 1100. Пример 6. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 1432360. Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп ,составил 1400, с лептоспирами серогруппи- 1100, а с лептоспирами серогруппысоставил 1200. В ходе проведенной экспериментальной работы нами установлено, что снижение содержания в составе вакцины лептоспирозного антигена, снижение или повышение иммуномодулятора и стабилизатора способствует снижению активности вакцины. Повышение содержания лептоспирозного антигена в составе вакцины более 15 не способствует повышению активности вакцины, но приводит к ее удорожанию. Источники информации 1. Панин А.Н., Малахов Ю.А., Соболева Г.Л., Ситьков В.И., Сурмило А.П. Вакцина против лептоспироза животных лиофилизированная // Ветеринария. - 2002. -1. - С. 2124. 2. Ситьков В.И. Научные и практические основы промышленного производства и применения вакцин Дисс д-ра вет. наук. - М., 1997. -58 с. 3. Ветеринарные препараты Справочник / Сост. Ю.Ф.Борисевич, Л.В.Кириллов / Под ред. Д.Ф.Осидзе. - М. Колос, 1981. - С. 201-211. 4. Патент России 2030915, 1990. 5. Сусский Е.В. Вакцина против лептоспироза животных концентрированная Автореф. дис канд. вет. наук. - М., 1997. - 20 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5