Серебросодержащий антимикробный агент широкого спектра действия с антигерпетической активностью

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СЕРЕБРОСОДЕРЖАЩИЙ АНТИМИКРОБНЫЙ АГЕНТ ШИРОКОГО СПЕКТРА ДЕЙСТВИЯ С АНТИГЕРПЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ(71) Заявитель Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем(72) Авторы Бореко Евгений Иванович Ковальчук Татьяна Вячеславовна Логинова Наталья Васильевна Полозов Генрих Иванович Шадыро Олег Иосифович Чернявская Анна Анатольевна(73) Патентообладатель Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем(57) Применение комплекса серебрас 2-(4,6-ди-трет-бутил-2,3-дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой формулы 15000 1 2011.10.30 в качестве антимикробного агента широкого спектра действия, дополнительно имеющего активность в отношении вируса герпеса простого и характеризующегося низкой токсичностью. Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве антимикробного агента широкого спектра действия. Одним из актуальных направлений современной медицинской химии является поиск и синтез новых субстанций и разработка на их основе эффективных лекарственных препаратов для борьбы с микробными и вирусными инфекционными заболеваниями, которые являются причиной более 20 от общего числа летальных исходов. Особое внимание направлено на развитие комбинированной химиотерапии инфекций (применение одновременно двух антимикробных препаратов или более) и разработку фиксированных лекарственных форм нескольких химиотерапевтических средств, что обусловлено следующими факторами 1) трудностями терапии тяжелых форм инфекций 2) свойствами возбудителя заболевания и особенностями патогенеза инфекционного процесса (в том числе с хроническим течением) 3) необходимостью оптимизации схем лечения и применения препаратов. Кроме того, разработка новых лекарственных средств широкого спектра действия приобретает первостепенное значение в связи с ростом частоты инфекций, обусловленных штаммами бактерий и вирусов, резистентными к применяемым лекарственным средствам 1. Установлено, что комплексообразование с иноми серебрабиоактивных органических соединений позволяет преодолеть выявленную пока лишь в редких случаях резистентность микроорганизмов по отношению к серебру 2. Связывание ионов серебрав комплексы позволяет расширить спектр фармакологического действия серебросодержащих препаратов вследствие изменения их липофильно-липофобных характеристик, растворимости и структуры по сравнению с исходными органическими соединениями, в том числе и лекарственными веществами 3. Известны комплексы серебра(1), проявляющие антибактериальные свойства. Среди них комплекс серебрас сульфадиазином 4 является наиболее применяемым в медицинской практике антибактериальным средством при лечении ран и ожогов 5. Одним из основных недостатков применения лекарственных средств, содержащих комплекс серебра с сульфадиазином в качестве активной субстанции, является развитие характерных для сульфаниламидных препаратов системных побочных явлений (лейкопения, головная боль,диспепсия), а также жжения, зуда, коричневато-серого окрашивания кожи, кожных аллергических реакций (кожная сыпь, фотосенсибилизация). Выявлена антибактериальная активность комплексов серебрас различными лигандами аминокислотами 7, производными тетразола 8, имидазола 9, салициловой 10,11, никотиновой 12 и малоновой 13 кислот. Отсутствуют сведения о проявлении антивирусных свойств комплексов серебрас органическими лигандами. Задачей изобретения является разработка нового эффективного полифункционального химиотерапевтического агента широкого спектра действия для применения в комплексной терапии сложных инфекций, включающего не только антибактериальную, но также и антигерпетическую активность. Поставленная задача достигается применением комплекса серебрас 2-(4,6-ди-третбутил-2,3-дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой формулы в качестве антимикробного агента широкого спектра действия, дополнительно имеющего активность в отношении вируса герпеса простого и характеризующегося низкой токсичностью. Заявляемое соединение было синтезировано авторами и выявлена его антибактериальная активность в отношении следующих тест-культур Е.( 25922), .( 9027), В.( 6633), .(209-), .(коллекция БелГИДУВ) 14. В результате расширения спектра тест-культур в фармакологическом скрининге авторами установлено, что комплекс серебрас 2-(4,6-ди-трет-бутил-2,3 дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой проявляет высокую активность в отношении вируса простого герпеса и наряду с этим характеризуется низкой токсичностью. Сущность изобретения иллюстрируется примерами. Пример 1. Испытание антивирусной активности комплекса серебрас 2-(4,6-ди-трет-бутил-2,3 дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой выполняют методом оценки цитопатического эффекта на монослойной культуре клеток рабдомиосаркомы человекачеловека с вирусом герпеса простоготипа (ВГП-1). Критерием антивирусного действия считают среднеэффективную концентрацию соединения (50) - концентрацию, подавляющую цитопатогенное действие вируса на 50 . Максимальную переносимую концентрацию(МПК) изучаемого вещества определяют как его максимальную концентрацию с отсутствием морфологических изменений неинфицированных клеток после 48 часов инкубации. Отношение МПК/50 показывает диапазон нетоксических концентраций с антивирусным действием (таблица 1). Как видно, комплекс серебрас 2-(4,6-ди-третбутил-2,3-дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой высокоактивен в отношении вируса герпеса простого и нетоксичен для культуры клеток. В результате показатели его противовирусного действия свидетельствуют о более высокой активности в сравнении с известным противовирусным средством - бутаминофеном 15 Таблица 1 Противовирусные свойства заявляемого вещества Соединение 15000 1 2011.10.30 Пример 2. Для испытания острой токсичности суспензию комплекса серебрас 2-(4,6-ди-третбутил-2,3-дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой готовят растиранием навески субстрата в керамической ступке с добавлением небольшого количества 2,5 крахмального геля. По достижении гомогенности смеси добавляют новые порции крахмального геля, снова растирают, доводят до необходимого объема и тщательно перемешивают. Образовавшуюся пастообразную массу вводят белым беспородным мышам (самцы) массой 25-30 г. внутрижелудочно с помощью шприца и зонда, изготовленного из инъекционной иглы. Количество вводимого вещества в пределах одной испытываемой дозы регулируют объемом суспензии пропорционально массе животного. Наблюдение ведут в течение 10 дней, регистрируя признаки отравления и гибель. Признаками интоксикации, проявляющимися вскоре после введения высоких доз комплекса серебрас 2-(4,6-ди-трет-бутил 2,3-дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой, являются угнетенное общее состояние и глубокое редкое дыхание. Результаты учета гибели животных приведены в таблице(таблица 2). Вычисление ЛД 50 выполняют с использованием компьютерной программы,основанной на пробит-анализе и взвешенной линейной регрессии 16. Вычисленное значение ЛД 50 комплекса серебрас 2-(4,6-ди-трет-бутил-2,3 дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой составляет 1869,4 (1470,12377,3) мг/кг (в скобках - доверительный интервал при 95 вероятности). В соответствии с полученными данными и согласно классификации ГОСТ 12.1.007-76 комплекс серебрас 2-(4,6-дитрет-бутил-2,3-дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой относится к веществам 5 класса (малотоксичные вещества, ЛД 501000 мг/кг). Таблица 2 Гибель животных в зависимости от дозы комплекса серебрас 2-(4,6-ди-третбутил-2,3-дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой Количество животных Вычислено Пробит всего погибли 4700 3,672098 1 1 0,9851728 7,174677 3000 3,477121 3 3 2,603151 6,115664 2000 3,30103 5 3 2,81627 5,159226 1800 3,255273 4 1 1,85768 4,910694 1600 3,20412 4 1 1,427026 4,632859 1400 3,146128 4 1 0,9903228 4,317877 1000 3,0 6 1 0,4199767 3,524181 800 2,90309 4 0 0,0905308 2,997818 400 2,60206 2 0 0,0007585 1,362777 Таким образом, комплекс серебрас 2-(4,6-ди-трет-бутил-2,3-дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой характеризуется широким спектром антимикробной активности, а также активностью в отношении вируса простого герпеса, и имеет низкую токсичность. Для практического использования комплекса серебрас 2-(4,6-ди-трет-бутил-2,3 дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой в качестве субстанции нового лекарственного средства требуется разработка лекарственной формы, проведение лабораторных и клинических испытаний эффективности и безопасности. Доза, мг/кг 15000 1 2011.10.30 3.//. 1991. - . 36. - . 18. 4. Патент 2 422 688. 5. Патент 3 761 590. 6. Машковский М.Д. Средства для лечения и профилактики инфекционных заболеваний //Лекарственные средства Пособие для врачей. 14-е изд., испр. и доп. - М., 2001. Гл. 12. - С. 220-372. 7.К.,. ,-,// .(3)22 (2// . . . - 2004. - . 98. - . 13611366. 11...,// . . . - 1995. - . 58. - . 255-267. 12...2-,// . . . . - 2000. - . 73. - . 1143-1152. 13...,// . - 1995. - . 14. - . 1359-1367. 14. Чернявская А.А., Логинова Н.В., Полозов Г.И., Шадыро О.И., Шеряков А.А., Бондаренко Е.В. Синтез и антимикробная активность комплексов серебраи медис 2(4,6-ди-трет-бутил-2,3-дигидроксифенилсульфанил)уксусной кислотой// Хим.-фарм. журн. 2006. - Т. 40. -8. - С. 7-9. 15. Патент РБ 6503, МПК 7 261 31/05,61 31/22, 2004. 16.К.Р.5050 // . Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 5