Способ вызывания эрекции полового члена у самца животного, способ лечения эректильной дисфункции у самца животного и фармацевтическая композиция.

СПОСОБ ВЫЗЫВАНИЯ ЭРЕКЦИИ ПОЛОВОГО ЧЛЕНА У САМЦА ЖИВОТНОГО, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭРЕКТИЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ У САМЦА ЖИВОТНОГО И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ(57) 1. Способ вызывания эрекции полового члена у самца животного, предусматривающий введение указанному животному пептида формулы 2,где Х - -аминоизобутирил, -аминобутирил или водород,А - -2-метилтриптофан, (2-нафтил)аланин или -триптофан,В - -2-метилтриптофан, (2-нафтил)аланин, -триптофан или отсутствует,С - -2-метилтриптофан, фенилаланин или отсутствует, - лизин или аргинин, означает декстроизомер,или его фармацевтически приемлемой, кислотно-аддитивной соли в количестве, эффективном для того, чтобы вызывать указанную эрекцию. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пептид вводят интраназально, внутрилегочно или внутриглазно. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пептид вводят защечно, подъязычно или перорально. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пептид представляет собой 2,2,2,2 или его фармацевтически приемлемые соли. 5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пептид вводят в дозе от 0,2 до 2,0 мг/кг массы тела животного. 6. Способ лечения эректильной дисфункции у самца животного, предусматривающий введение указанному животному пептида формулы 2,где Х - -аминоизобутирил, -аминобутирил или водород,7847 1 2006.02.28 А - -2-метилтриптофан, (2-нафтил)аланин или -триптофан,В - -2-метилтриптофан, (2-нафтил)аланин, -триптофан или отсутствует,С - -2-метилтриптофан, фенилаланин или отсутствует,-лизин или аргинин, означает декстроизомер,или его фармацевтически приемлемой, кислотно-аддитивной соли в количестве, эффективном для того, чтобы вызывать эрекцию полового члена. 7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что пептид вводят интраназально, внутрилегочно или внутриглазно. 8. Способ по п. 6, отличающийся тем, что пептид вводят защечно, подъязычно или перорально. 9. Способ по п. 6, отличающийся тем, что пептид представляет собой 2,2,2,2 или его фармацевтически приемлемые соли. 10. Способ по п. 6, отличающийся тем, что пептид вводят в дозе от 0,2 до 2,0 мг/кг массы тела животного. 11. Способ по п. 6, отличающийся тем, что пептид представляет собой 2,2 или его фармацевтически приемлемые соли. 12. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью вызывать эрекцию полового члена у самца животного, содержащая пептид, представляющий собой 2,в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель. Изобретение касается пептидов, которые могут вводиться с целью лечения эректильной дисфункции. Этиология эректильной дисфункцииили импотенции является сложной и ее, как правило, делят на первичную или более распространенную вторичную дисфункцию. Основной причинойявляется сосудистое нарушение, другие распространенные причины включают гормональные нарушения, употребление наркотиков и неврологические нарушения. Средства лечениямогут быть разделены на центральные или периферические инициаторы, центральные или периферические кондиционирующие агенты и другие средства. В качестве подробного обзора по данной теме с обсуждением роли нейротрансмиттеров и нейропептидов см. статью А.и ,,47235-255, 1995. В плане классификации способов лечения см. статью и соавт.,., 9115-121, 1997. Среди нейропептидов, обладающих центральным действием при индукции эрекции полового члена, наиболее известными являются пептиды / и окситоцин. Однако данные пептиды с центральной активностью не имеют специфического действия и не могут быть использованы вследствие серьезных побочных эффектов. Известно, что непептидильные продукты используют для лечения . Среди них алпростадил (1) применяют наружно, а апоморфин и сильденафил вводят подъязычно или перорально. Все известные агенты имеют серьезные недостатки, такие как свойства вызывать рвоту (апоморфин) и сердечно-сосудистые подобные эффекты (сильденафил). 2 7847 1 2006.02.28 Пептиды для лечения эректильной дисфункции уже известны и описаны в заявках САА-2158425 (.),94/22460(.), - 5214030( ) и статье. и соавт., Синтетический меланотропный пептид инициирует эрекции у мужчин с психогенными эректильными дисфункциями - перекрестное исследование двойным слепым методом с контролем плацебо (-,), , , . - Т. 160, 1998 (1998-08).- С. 389-393, 0029229520022-5347. Заявка 97/22620( .) включает пептиды общей формулы (при А, , ,, В 2 при В - , ). Отличием от общей формулы данной заявки является стереохимическая структура С-концевогов группе 2. В заявках 5955421 ( .) и 5932548 ( .), как соответствующем предшествующем уровне техники, описаны пептид 222- 2 и его терапевтическое применение. Очевидно, что требуется способ лечения, который является настолько специфическим,насколько это возможно, вызывает минимум побочных эффектов и является простым в применении. При решении данной задачи было обнаружено, что маленькие пептиды, которые не принадлежат ни к какому из ранее известных классов пептидов, влияющих на эрекции полового члена, могут вызывать эрекции полового члена у самцов животных при инъекции в паравентрикулярное ядро гипоталамуса или при системном (внутривенном или подкожном) введении таким животным. В данном описании используют следующие сокращения- декстроэнантиомер,-аминоизобутирил, ТХМ - транексамил (т.е. 4-(аминометил) циклогексанкарбонил),изонипекотинил,- -аминобутирил,- имидазолилацетил,- 2-метил-Тр,- - -(2-нафтил)аланин, Тр - триптофан,- фенилаланин,- лизин,- аргинин, Н - водород, Н 2 - концевой амид. Объектом изобретения является способ вызывания эрекции полового члена у самца животного, предусматривающий введение указанному животному пептида формулы 2,где- -аминоизобутирил, -аминобутирил или водород,А - -2-метилтриптофан, (2-нафтил)аланин или -триптофан,В - -2-метилтриптофан, (2-нафтил)аланин, -триптофан или отсутствует,С - -2-метилтриптофан, фенилаланин или отсутствует, - лизин или аргинин, означает декстроизомер,или его фармацевтически приемлемой, кислотно-аддитивной соли в количестве, эффективном для того, чтобы вызывать указанную эрекцию. В способе по изобретению пептид вводят интраназально, внутрилегочно или внутриглазно, а также защечно, подъязычно или перорально. Предпочтительно пептид представляет собой 2,2,2,2 или его фармацевтически приемлемые соли. Предпочтительно пептид вводят в дозе от 0,2 до 2,0 мг/кг массы тела животного. Другим объектом изобретения является способ лечения эректильной дисфункции у самца животного, предусматривающий введение указанному животному пептида формулы 7847 1 2006.02.28 где- -аминоизобутирил, -аминобутирил или водород,А - -2-метилтриптофан, (2-нафтил)аланин или -триптофан,В - -2-метилтриптофан, (2-нафтил)аланин, -триптофан или отсутствует,С - -2-метилтриптофан, фенилаланин или отсутствует, - лизин или аргинин, означает декстоизомер,или его фармацевтически приемлемой, кислотно-аддитивной соли в количестве, эффективном для того, чтобы вызывать эрекцию полового члена. В заявленном способе лечения пептид вводят интраназально, внутрилегочно или внутриглазно, а также защечно, подъязычно или перорально. Предпочтительно пептид представляет собой 2,2,2,2 или его фармацевтически приемлемые соли. Предпочтительно пептид вводят в дозе от 0,2 до 2,0 мг/кг массы тела животного. Более предпочтительно, что пептид представляет собой 2,2 или его фармацевтически приемлемые соли. Еще одним объектом изобретения является фармацевтическая композиция, обладающая способностью вызывать эрекцию полового члена у самца животного, содержащая пептид, представляющий собой 2,2,в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель. Если это желательно, могут быть использованы любые фармацевтически приемлемые соли пептидов, соответствующих данному изобретению. Данные соли должны включать без ограничения перечисленным соли, полученные при добавлении органических или неорганических кислот, такие как, например, гидрохлорид, гидробромид, фосфат, сульфат,ацетат, сукцинат, аскорбат, тартрат, глюконат, бензоат, малат, фумарат, стеарат и памоат. Вышеупомянутые пептиды могут быть приемлемым образом получены согласно принятым способам химии пептидов путем твердофазного синтеза с использованием аминокислот ( - флуоренилметоксикарбонил), как описано в монографиииТвердофазный синтез пептидов ( ,, 1989) или в монографии .Химический синтез пептидов( , , 1994). Твердофазный синтез начинают с С-конца пептида. Подходящий исходный материал может быть приготовлен, например, путем присоединения требующейся защищенной аминокислоты к хлорметилированной смоле, гидроксиметилированной смоле, бензгидриламинной смоле (ВНА) или пара-метилбензгидриламинной смоле (-Ме-ВНА). В качестве примера доступной хлорметилированной смолой является м 1, изготавливаемая, , . Получение гидроксиметилсмолы описано в работеи соавт., . .3815997, 1970 и она коммерчески производится., , . После исходного присоединения защитную группу -аминокислоты можно удалить с помощью различных кислотных реагентов, содержащих трифторуксусную кислотуили гидрохлорную кислоту , растворенную в органических растворителях, при комнатной температуре. После удаления защитной группы -аминокислоты оставшиеся защищенные аминокислоты могут быть постадийно присоединены в желательном порядке. 4 7847 1 2006.02.28 Реакция каждой защищенной аминокислоты может быть, как правило, проведена в приблизительно трехкратном избытке с использованием подходящей карбоксил-активирующей группы, такой как дициклогексилкарбодиимидили диизопропилкарбодиимид ,растворенной, например, в метиленхлориде (22), диметилформамидеили их смесях. После завершения образования желательной аминокислотной последовательности желательный пептид можно отщепить от смолы-носителя воздействием такого реагента,как фторид водорода , который отщепляет не только пептид от смолы, но также защитные группы боковых цепей. При использовании хлорметилированной смолы или гидроксиметилированной смолы обработкаприводит к образованию пептида с концевой кислотой в свободной форме. При использовании смолы ВНА или р-Ме-ВНА обработкаприводит непосредственно к образованию пептида с концевым амидом в свободной форме. Вышеописанные пептиды могут быть введены системно, подъязычно, защечно, перорально, интраназально, внутрилегочно или внутриглазно в дозах между 0,02 и 2 мг/кг массы тела в соответствующим образом приготовленной форме с фармацевтически приемлемыми наполнителями или в виде водных растворов, или как твердые порошки в микронизированной форме. Другие лекарственные формы, хотя они специально не перечислены, известны компетентным специалистам в данной области и входят в объем данного изобретения. Лекарственные препараты для лечения эректильной дисфункции или вызывающие эрекцию у самцов животных, в том числе человека, могут содержать пептид, соответствующий данному изобретению, или его фармацевтически приемлемую соль или комбинации пептидов, соответствующих данному изобретению, или их фармацевтически приемлемых солей, необязательно в смеси с носителем, наполнителем, доставляющим средством, разбавителем, матриксом или покрытием для задержанного выхода. Примеры данных носителей, наполнителей, доставляющих средств и разбавителей можно найти в Справочнике по фармацевтическим наукам Ремингтона, 18 изд., под ред. ,, , , 1990. Примеры Следующие примеры представлены только в качестве иллюстрации предпочтительных вариантов осуществления данного изобретения и не предназначены для ограничения объема охраны и содержания изобретения, как легко понять компетентным специалистам в данной области. Следующие примеры иллюстрируют активность четырех пептидов, которые являются репрезентативными в ряде предпочтительных вариантов осуществления изобретения(4) 2. Перед получением препарата для соответствующего биологического теста синтезированные пептиды очищают до степени чистоты 95 с помощью колоночной хроматографии. Процедуры тестирования. Процедуру, описанную в статье и соавт.,,328115-123, (1997), адаптируют в основном следующим образом. Животные. Во всех экспериментах используют самцов крыс(массой 200-220 г)( , , ). Животных помещают в клетки группами по 4-6 особей при 24 С, влажности 60 , освещении от 07.00 до 19.00 ч, без ограничений в воде и стандартном лабораторном корме. Эксперименты проводят между 09.00 и 13.00 ч. Фармацевтические соединения.(СН 2)5 Ту(Ме)2-О 8 вазотоцин и -конотоксин- приобретают в фирме. . (. , , ), метиловый сложный эфир -нитро-1-аргинина 5 7847 1 2006.02.28 аргинина и дизолципин (МК-801) - в фирме(. , , ), цис-флупентиксол - в фирме(, , ) и морфин- - в(, ). Микроинъекции в латеральные желудочки и в паравентрикулярное ядро гипоталамуса . Направляющие канюли из нержавеющей стали (размер 22, 0,71 мм), предназначенные для унилатерального введения в , стереотаксическим способом имплантируют (, ) при анестезии с помощью хлоралгидрата за два дня до начала экспериментов (координаты 0,2 мм впереди брегмы, 0,4 мм сбоку относительно средней линии и 2,00 мм вентрально относительно твердой мозговой оболочки). Каждую крысу используют только один раз. Для иинъекций используют канюли одного размера. В случае инъекций все субстанции вводят в объеме 10 мкл физиологического раствора в течение 1 мин через внутреннюю канюлю (размер 28), которая выступает на 1 мм ниже конца направляющей канюли и соединена полиэтиленовой трубкой с Гамильтоновским шприцем объемом 10 мкл, который приводится в действие с помощью микрометрического винта. Контрольные животные получают 10 мкл физиологического раствора. После инъекции конец канюли оставляют в области инъекции в течение 30 с, что обеспечивает распространение введенного раствора. В случаеинъекций все субстанции вводят в объеме 0,3 мкл физиологического раствора в течение 2 мин через внутреннюю канюлю, которая выступает на 5,3 мм ниже конца направляющей канюли и соединена полиэтиленовой трубкой с Гамильтоновским шприцем объемом 10 мкл, который приводится в действие с помощью микроинфузионного насоса . Контрольные животные получают 0,3 мкл физиологического раствора в . После микроинъекции конец канюли оставляют в области инъекции в течение 30 с,что обеспечивает распространение введенного раствора. Исследования поведения. После получения кривых зависимости от дозы каждый пептид или физиологический раствор вводят в виде микроинъекции в течение 2 мин вкрыс, которым имплантированы постоянные направляющие канюли. Физиологический раствор, -конотоксин, морфин, (СН 2)5(Ме)2 О 8 вазотоцин, - МК 801 или цис-флупентиксол инъецируют в течение 2 мин за 10 или 15 мин до физиологического раствора вкрыс, которым имплантированы постоянные направляющие канюли. - инъецируют в течение 1 мин за 10 или 15 мин до физиологического раствора или тест-пептида. Вскоре после введения животных помещают по одному в плексигласовые клетки(303030 см) и проводят наблюдение в течение 60 мин, в этот период времени наблюдатель, который не осведомлен о введениях в целях устранения субъективных оценок,подсчитывает эпизоды эрекций полового члена. Гистологические данные. В конце экспериментов животных умерщвляют путем декапитации, головной мозг немедленно удаляют и сохраняют в 2 формальдегиде в течение 10-12 дней. Для локализации области инъекции поперечные срезы головного мозга толщиной 50 мкм, полученные с помощью замораживающего микротома, окрашивают нейтральным красным и исследуют в фазово-контрастном микроскопе. Область инъекции локализуют, следуя по ходу внутренней канюли в серии срезов головного мозга. В статистическую оценку результатов включают только тех животных, у которых обнаруживают правильно расположенный конец внутренней канюли при введении или в . Статистическая обработка. Статистическую оценку результатов проводят путем одностороннего анализа вариацийдля повторяющихся измерений, с последующим многоранжевым тестомдля сравнения различий между множеством групп. -критерий Стьюдента используют для сравнения различий между двумя группами. р 0,025 считают значимым. 7847 1 2006.02.28 Пример 1 Эффект инъекции данных пептидов вна спонтанные эрекции полового члена. Показывают, что все четыре исследуемых пептида, введенных в , способны повышать доза-зависимым образом число эпизодов спонтанной эрекции полового члена у самцов крыс. Минимальная эффективная доза, которая повышает ответ у более чем 70 леченых животных, составляет 20-50 нг. Максимальный эффект, который индуцирует ответ у более чем 90 животных, обнаруживают при дозе 2-5 мкг. После введения активной дозы ответ начинается через 5-8 мин после лечения и продолжается в течение 50-60 мин. Каждый эпизод эрекции полового члена продолжается 0,5-2 мин и связан с чисткой гениталий или она следует после эпизода. Вышеуказанные дозы также повышают число эпизодов спонтанной зевоты, хотя данный эффект не отмечают как связанный с эрекцией полового члена и не обнаруживают ясной зависимости от дозы. Пример 2 Эффект (СН 2)5 Ту(Ме)2 О 8-вазотоцина на индуцированную данными пептидами,эрекцию полового члена.(СН 2)5 Ту(Ме)2 О 8-вазотоцин, антагонист рецептора окситоцина (в дозе 0,1, 0,5 и 1 мкг),введенный за 10 мин до данных пептидов, снижает доза-зависимым образом увеличение числа эпизодов эрекции полового члена, индуцированных введением 2 мкг данных пептидов в . Напротив, антагонист рецептора окситоцина (в дозе 0,1, 0,5 и 1 мкг) не эффективен при введении вза 10 мин до данных пептидов. Пример 3 Эффект - на индуцированную данными пептидами эрекцию полового члена.-, ингибитор -синтазы (в дозе 10-20 мкг), инъецированный вза 10 мин до данных пептидов, снижает доза-зависимым образом эрекции полового члена, индуцированные введением 2 мкг тест-пептидов в . Аналогичное предупреждение эффекта наблюдают при введении - в дозах 75 и 150 мкг за 10 мин до инъекции 2 мкг тест-пептидов в . Пример 4 Эффект -конотоксина- на индуцированную тест-пептидом эрекцию полового члена. Блокатор канала Са 2 -типа -конотоксин- (в дозе 2 и 5 мкг), инъецированный вза 10 мин до инъекции 2 мкг тест-пептидов в , снижает эрекцию полового члена. Пример 5 Эффект морфина на индуцированную тест-пептидами эрекцию полового члена. Опиат морфин (в дозе 1,5 и 10 мкг), инъецированный вза 15 мин до тестпептидов, снижает доза-зависимым образом эрекции полового члена, индуцированные введением тест-пептидов в дозе 2 мкг в . Пример 6 Эффект МК-801 или цис-флупентиксола на индуцированную тест-пептидами эрекцию полового члена. Антагонист рецептора М-возбуждающих аминокислот МК-801 (в дозе 1 мкг) или антагонист допаминового рецептора цис-флупентиксол (в дозе 10 мкг), введенный вза 15 мин до тест-пептидов, не модифицирует эрекцию полового члена. Пример 7 Системное введение. Эрекцию полового члена наблюдают у всех животных, которым данные пептиды инъецируют (в дозе 50 мкг/50 мкл) подкожно или в яремную вену. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 7