Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения патогенных и условно-патогенных бактерий

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ И УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ(71) Заявитель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(72) Авторы Титов Леонид Петрович Газиумарова Людмила Дмитриевна Ермакова Татьяна Сергеевна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Министерства здравоохранения Республики Беларусь(56) Меджидов М.М. Справочник по микробиологическим питательным средам. - М. Медицина, 2003. - С. 30-35,42-43, 60-61, 64-65, 72-73.2103367 1, 1998.1351975 1, 1987.1703695 1, 1992.2267529 2, 2006. СЕДОВ В.И. Лабораторное дело, 1979.5. - С. 280-281. КАЛИНА Г.П. и др. Лабораторное дело, 1972. -4. - С. 240-243.2283348 1, 2006.94030871 1, 1997.2233885 2, 2004.(57) Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения патогенных и условно-патогенных бактерий, содержащая лактозу, краситель, соль натрия, агар и воду дистиллированную, имеющая 7,20,2, отличающаяся тем, что в качестве красителя содержит конго рот, в качестве соли натрия - натрий сернокислый, в качестве агара - агар бактериологический и дополнительно содержит -аланин и панкреатический гидролизат казеина при следующем соотношении компонентов, г/л лактоза 9,0-10,0 конго рот 1,2-1,3 натрий сернокислый 0,8-1,0 агар бактериологический 9,5-12,0 0,5-0,7-аланин панкреатический гидролизат казеина 30,0-35,0 вода дистиллированная до 1 л. Изобретение относится к медицинской и санитарной микробиологии и может быть использовано при диагностике широкого круга микроорганизмов, как патогенных, так и условно-патогенных энтеробактерий и грамположительных кокков. Ведущими зарубежными фирмами ,и др. выпускаются питательные среды для выделения и первичной идентификации патогенных и условнопатогенных энтеробактерий как из клинических источников ( , на основе из гидролизатов казеина и желатина 1. Отсутствие указанных импортных сред не дает возможности проведения сравнительных исследований. Из российских сред известна дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения возбудителей аэробной раневой инфекции, сухая, производства НПО Питательные среды, Махачкала 2, 4, которая состоит из следующих компонентов панкреатический гидролизат казеина 30,0 лактоза 10,0 конго рот 1,3 агар порошковидный 9,7 рН 7,20,1 вода дистиллированная до 1 л. Недостатком этой среды является ее узкая направленность (для аэробной раневой инфекции) и достаточно скудный рост некоторых представителей патогенных микроорганизмов (бактерий шигеллезно-сальмонеллезной группы, иерсиний, стрептококков). Наиболее близкой к предлагаемой среде является дифференциально-диагностическая среда - агар с конго рот по Либерману 3. Среда, в основном, рекомендуется для выделения дизентерийных бактерий. Вместе с тем на ней растут и колонии других бактерий (кишечная палочка, кокки, грамположительные палочки). Среда содержит мясо-пептонный агар, являющийся источником азотного питания. Среда состоит из следующих компонентов слабо-щелочной 3 мясо-пептонный агар 1 л лактоза 10,0-15,0 г конго рот 10 водный раствор 15,0-20,0 мл. Недостатками этой среды являются использование в ее составе пищевого сырья (мяса),сложность в приготовлении, так как среда лабораторного изготовления, нестандартность,слабые вегетирующие и дифференцирующие свойства. Отсутствие отечественных питательных сред для диагностики патогенных и условнопатогенных микроорганизмов вызывает нарекания со стороны практической службы здравоохранения. Задачей изобретения является создание дифференциально-диагностической питательной среды для выделения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, обеспечивающей стабильность результатов по дифференциации, не уступающей зарубежным аналогам. Поставленная задача решается тем, что дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения патогенных и условно-патогенных бактерий, содержащая источник азотного питания, лактозу, краситель конго рот, агар бактериологический и дистиллированную воду, в качестве источника азотного питания содержит панкреатический гидролизат казеина и дополнительно содержит -аланин и натрий сернокислый при следующем соотношении компонентов, г/л панкреатический гидролизат казеина 30,0-35,0 лактоза 9,0-10,0 конго рот 1,2-1,3 натрий сернокислый 0,8-1,0 0,5-0,7-аланин агар бактериологический 9,5-12,0 вода дистиллированная до 1 л рН 7,20,2. Количественное соотношение компонентов питательной среды и ее рН обеспечивает хорошую первичную дифференциацию патогенных энтеробактерий от других условнопатогенных энтеробактерий и грамположительных кокков уже через 18-24 ч. 2 11975 1 2009.06.30 Изобретение иллюстрируют следующие примеры. Пример 1. Для изготовления среды берут следующие навески ингредиентов, г панкреатический гидролизат казеина 30,0 лактоза 9,0 конго рот 1,2 агар бактериологический 9,5 натрий сернокислый 0,8 0,5-аланин вода дистиллированная до 1 л рН 7,20,2. Навески тщательно перемешивают в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения,кипятят 1-2 мин, автоклавируют при 115 С в течение 20 мин и разливают в стерильные чашки Петри по 20-25 мл. Перед посевом среду подсушивают в термостате с открытыми крышками при (37,01,0) С в течение 30 мин. Предлагаемая среда обеспечивает рост следующих тест-штаммов.(клинический изолят) при посеве 0,1 мл микробной взвеси каждой культуры из разведения 10-6 через 24 ч инкубации при (37,01,0) С. При этом лактозоотрицательные бактерии шигеллезно-сальмонеллезной группы, иерсинии образуют на среде прозрачные, красного цвета колонии диаметром (2,00,5) мм,протей мирибильный, как и вульгарный (роящиеся виды), растет в виде розовых колоний в О-форме (т.е. не роится). Их дальнейшая идентификация осуществляется с помощью общепринятых биохимических тестов. Кишечная палочка (лактоза ) формирует мутные колонии серого цвета (2,50,5)мм в диаметре, клебсиеллы, ярко-желтые выпуклые, сочные, (3,50,5) мм в диаметре. Стафилококки растут на среде в виде непрозрачных, мутных колоний оранжевого цвета с черным центром или без него (2,00,5)мм в диаметре. Стрептококки, мелкие (до 1,5 мм), оранжевого или черного цвета. Дифференциально-диагностические свойства среды проверяют методом посева тестштаммов одного из видов бактерий шигеллезно-сальмонеллезной группы или иерсиний из разведения 10-6 совместно с кишечной палочкой, клебсиеллой, стафилококком или стрептококком (попарно) из такого же разведения. Результаты биологического контроля предложенной среды представлены в табл. 1. Пример 2. Среду готовят в соответствии с примером 1. панкреатический гидролизат казеина 33,0 лактоза 9,5 конго рот 1,25 агар бактериологический 11,0 натрий сернокислый 0,9 0,6-аланин вода дистиллированная до 1 л рН 7,20,2. 3 11975 1 2009.06.30 Результаты биологического контроля представлены в табл. 1 и аналогичны результатам проверки по примеру 1. Пример 3. Среду готовят в соответствии с примером 1 панкреатический гидролизат казеина 35,0 лактоза 10,0 конго рот 1,3 агар бактериологический 12,0 натрий сернокислый 1,0 0,7-аланин вода дистиллированная до 1 л рН 7,20,2. Результаты биологического контроля представлены в табл. 1 и аналогичны результатам проверки по примеру 1. Пример 4. Среду готовят в соответствии с примером 1 панкреатический гидролизат казеина 28,0 лактоза 8,0 конго рот 1,1 агар бактериологический 9,0 натрий сернокислый 0,7 0,4-аланин вода дистиллированная до 1 л рН 7,20,2. Нарушение количественного соотношения компонентов среды ведет к резкому ухудшению ростовых свойств среды. Результаты биологического контроля представлены в табл. 1. Пример 5. Среду готовят в соответствии с примером 1 панкреатический гидролизат казеина 37,0 лактоза 11,0 конго рот 1,4 агар бактериологический 13,0 натрий сернокислый 1,1 0,8-аланин вода дистиллированная до 1 л рН 7,20,2. Результаты биологического контроля представлены в табл. 1 и аналогичны результатам проверки по примеру 4. Из таблицы видно, что предлагаемая питательная среда, приготовленная в соответствии с примерами 1, 2, 3, обладает хорошими ростовыми свойствами, высокой точностью дифференциации патогенных энтеробактерий от других условно-патогенных энтеробактерий и кокков, подавляет роение протея. Нарушение количественного соотношения компонентов среды ведет к резкому ухудшению микробиологических показателей качества предложенной среды. Так, в случае приготовления среды в соответствии с примерами 4, 5 наблюдается резкое уменьшение числа и диаметра колоний бактерий шигеллезно-сальмонеллезной группы, иерсиний, стафилококков и стрептококков, а также роение тест-штамма протея мирабильного. Предлагаемая среда по примеру 1 752,5-3,0 красные прозрачные 571,0-1,5 красные прозрачные 682,0-2,5 красные прозрачные 652,5-3,0 серые 8,03,0-4,0 желтые 462,0-3,0 оранжевые с черным центром или без него 581,0-1,5 оранжевые с черным центром или без него 70 розовые О-формы 2 78 2,5-3,0 красные прозрачные 56 1,0-1,5 красные прозрачные 70 2,0-2,5 красные прозрачные 68 2,5-3,0 серые 77 3,0-4,0 желтые 48 2,0-3,0 оранжевые с черным центром или без него 58 1,0-1,5 оранжевые с черным центром или без него 68 розовые О-формы 3 4 5 76 60 64 2,5-3,0 1,0-1,5 1,5-2,0 красные красные красные прозрачные прозрачные прозрачные 57 36 39 1,0-1,5 до 1,0 красныекрасные прокрасные и -формы зрачные 70 68 60 2,0-2,5 до 1,0 1,0-1,5 красные красные красные прозрачные шероховатые 68 50 47 2,5-3,0 2,5-3,0 2,5-3,0 серые серые серые 74 47 49 3,0-4,0 2,0-3,0 2,0-3,0 желтые желтые желтые 46 36 38 2,0-3,0 1,0-1,5 1,0-1,5 оранжевые оранжевые оранжевые или с черным цен- или черные черные тром или без него 62 30 33 1,0-1,5 точечные до 1,0 оранжевые с черные черные черным центром или без него 65 39 70 розовые розовые розовые Н-форО-формы О и Н-формы мы (роение) цифры в таблице показывают количество выросших колоний. Сравнительные данные роста культур на разработанной среде-прототипе представлены в табл. 2. Из таблицы видно, что как чувствительность, так и скорость роста на предлагаемой среде выше по сравнению со средой-прототипом, на ней полностью подавляется роение бактерий протея. Таким образом, по сравнению со средой-прототипом предлагаемая питательная среда имеет ряд преимуществ сокращает время инкубации до 24 ч вместо 48 ч на среде-прототипе, что позволяет ускорить предварительный диагноз улучшены дифференцирующие свойства, резко подавлено роение Р.очень проста в приготовлении, более стандартна, т.к. выпуск ее осваивается в виде сухого порошка. 5 11975 1 2009.06.30 Таблица 2 Сравнительные данные роста культур на разработанной среде и среде-прототипе Предлагаемая среда Тест-штаммы.клинический изолят не ниже 10-7 18-24.клинический изолят не ниже 10 18-24 Е.25922 не ниже 10-7 18-24.клинический изолят не ниже 10 18-24 Источники информации 1., 1996. - С. 72, 156. 2. Газиумарова Л.Д., Афиногенов Г.Е., Абдурашидова З.М. Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения возбудителей аэробной раневой инфекции. Вопросы физиологии метаболизма и идентификации микроорганизмов Сб. науч. тр. - М.,1987. - С. 74. 3. Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии руководство по изготовлению питательных сред для микробиологических институтов и санитарнобактериологических лабораторий. - М. Медгиз, 1950. - С. 139. 4. Справочник по микробиологическим питательным средам / Под ред. М.М. Меджидова. - Махачкала Дагестан. кн. изд-во, 1999. - С. 40. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 6