Способ выращивания гриба дерматофита

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ГРИБА ДЕРМАТОФИТА(71) Заявители Зайцева Виктория Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна(72) Авторы Зайцева Виктория Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна(73) Патентообладатели Зайцева Виктория Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна(56) ЖАРКОВ И.И. Контроль качества и стандартизация биопрепаратов, фармакологических средств, кормовых добавок, применяемых в ветеринарии и животноводстве Сборник научных трудов. - Москва, 1982. - С. 61-68. ЛЕТЯГИН К.П. и др. Контроль и стандартизация средств специфической профилактики и диагностики инфекционных болезней животных Сборник научных трудов. - Москва, 1984. С. 74-79.2074251 1, 1997.(57) Способ выращивания гриба дерматофита на сусло-агаре с концентрацией углеводов 7-8 по Баллингу при 6,6, отличающийся тем, что перед высевом на сусло-агар микроконидии гриба суспендируют в растворе, содержащем натрия хлорид, экстракт дрожжевой, сыворотку крови, воду или гидролизат белков крови при следующем соотношении ингредиентов, мас.натрия хлорид 0,1 экстракт дрожжевой 0,3-0,8 сыворотка крови 3,0-6,0 вода или гидролизат белков крови остальное,а выращивание проводят при температуре 26-28 в течение 5-15 суток. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано при производстве биологических препаратов. Известен способ выращивания дерматофитов ( ) на разных агаризованных средах сусло-агар, агар Чапека, агар Сабуро, агар Плаута, мясопептонный агар и агар с крахмалом 2, 3, 6. Дерматофитвыращивают на сусло-агаре, содержащем акридины в концентрации 10, 50, 100 и 500 мг/дм 3 5, аиинкубируют на сусло-агаре, содержащем 1,0 2,5 и 5,0 г натрия хлорида 4. Наиболее близким решением к предлагаемому способу является способ выращивания дерматофитов на сусло-агаре, содержащем сахара 7 по Баллингу, 1, 2, 3, 5, 10 и 20 сыворотки крови крупного рогатого скота 1. 11353 1 2008.12.30 Сыворотку добавляют в стерильный, расплавленный и охлажденный до 40-45 С сусло-агар и после перемешивания разливают в стерильные чашки Петри слоем толщиной 3-4 мм. Грибные культуры засевают уколом в центр чашки Петри. Посевы инкубируют при 26 С в течение 15 суток. Указанный способ не обеспечивает высокого выхода микроконидий и их жизнеспособности. Задача изобретения - повышение выхода биологической активности целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что посевной материал гриба дерматофита суспендируют в воде, содержащей марганец сульфат или марганец хлорид, натрия хлорид,магния сульфат и сыворотку крови в определенном соотношении. Сущность предлагаемого способа выращивания гриба дерматофита на сусло-агаре с концентрацией углеводов 7-8 по Баллингеру при рН 6,6 заключается в том, что перед высевом на сусло-агар микроконидии гриба суспендируют в растворе, содержащем натрия хлорид, экстракт дрожжевой, сыворотку крови, воду или гидролизат белков крови при следующем соотношении ингредиентов, мас.натрия хлорид 0,1 экстракт дрожжевой 0,3-0,8 сыворотка крови 3,0-6,0 вода или гидролизат белков крови остальное,а выращивание проводят при температуре 26-28 С в течение 5-15 суток. Пример 1 Культуру грибаштамма ТФ-130 суспендировали до содержания 500-600 млн. микроконидий в 1 см 3 растворителя при следующем соотношении ингредиентов, мас.натрия хлорид 0,1 экстракт дрожжевой 0,8 сыворотка крови 3,0 вода остальное. Взвесь микроконидий в растворителе высевали на сусло-агар с концентрацией углеводов по Баллингу 7-8, рН 6,6, в дозе 2-2,5 млн. спор на 1 см 3 среды. Культуру выращивали при температуре 26-28 С в течение 5-15 суток. Титр микроконидий определяли с помощью камеры Горяева. Жизнеспособность микроконидий определяли по общепринятой методике по количеству колоний, выросших на сусло-агаре в чашках Петри. Для этого готовили разведения культуры от 10-1 до 10-6 в физиологическом растворе и высевали приготовленные суспензии по 0,5 см 3 в чашку Петри. Учет результатов производили через 7-10 суток. Суммировали число колоний, выросших на всех чашках Петри, находили среднеарифметическое значение и умножали на 2. Конечный результат соответствовал количеству жизнеспособных микроконидий в 1 см 3 суспензии. С 1 см 3 сусло-агара получили 166,8 млн. спор, в том числе 152,4 млн. жизнеспособных. Пример 2 То же, что в примере 1, но культуру грибаштамма ТФ-130 суспендировали в растворителе при следующем соотношении ингредиентов, мас.натрия хлорид 0,12 экстракт дрожжевой 0,5 сыворотка крови 5,0 вода остальное. С 1 см 3 сусло-агара получили 172,2 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 91 . 2 11353 1 2008.12.30 Пример 3 То же, что в примере 1, но культуру грибаштамма ТФ-130 суспендировали в растворителе при следующем соотношении ингредиентов, мас.натрия хлорид 0,1 экстракт дрожжевой 0,8 сыворотка крови 6,0 вода остальное. С 1 см 3 сусло-агара получили 181,4 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 90,4 . Пример 4 То же, что в примере 1, но растворитель готовили на гидролизате белков крови. С 1 см 3 сусло-агара получили 176,4 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 92,4 . Пример 5 То же, что в примере 1, но для засева использовали культуру грибаштамма 1183. С 1 см 3 сусло-агара получили 188,6 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 94,1 . Пример 6 То же, что в примере 1, но для засева использовали культуру грибаштамма ТФ-130, суспендированную в растворителе при следующем соотношении ингредиентов, мас.натрия хлорид 0,1 экстракт дрожжевой 0,2 сыворотка крови 2,0 вода остальное. С 1 см 3 сусло-агара получили 82,2 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 64 . Пример 7 То же, что в примере 1, но для засева использовали культуру грибаштамма ТФ-130, суспендированную в растворителе при следующем соотношении ингредиентов, мас.натрия хлорид 0,2 экстракт дрожжевой 0,9 сыворотка крови 7,0 вода остальное. С 1 см 3 сусло-агара получили 102 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 68 . Пример 8 (прототип) В среду сусло-агара с содержанием сахара 7 по Баллингу и рН 6,8 вносили 5 нормальной сыворотки крови крупного рогатого скота. Сыворотку добавляли в стерильный,расплавленный и охлажденный до 40-45 С сусло-агар и после перемешивания разливали в стерильные чашки Петри слоем толщиной 3-4 мм. Грибную культурузасевали в центр чашки Петри. Посевы инкубировали при 26 С в течение 15 суток. С 1 см 3 сусло-агара получили 100,8 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 74 . Пример 9 (прототип) То же, что в примере 8, но для засева использовали культуруштамма 1183. С 1 см 3 сусло-агара получили 101,4 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 76 . Пример 10 (прототип) То же, что в примере 8, но для засева использовали культуруштамма ТФ-130. 3 11353 1 2008.12.30 С 1 см 3 сусло-агара получили 100,3 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 67 . Определяли среднее количество клеток в опыте и контроле и рассчитывали индекс спорообразования. Результаты экспериментальных исследований представлены в таблице. Влияние способа выращивания гриба дерматофита на спорообразование Концентрация Индекс споромикроконидий,образования 3 млн/см 1 опыт 181,4 181.1183 9 контроль 101,4 100 Таким образом, предлагаемый способ выращивания гриба дерматофита имеет следующие отличия и преимущества по сравнению с известными универсальность (способен стимулировать спорогенез у разных штаммов гриба дерматофита) технологичность способа, поскольку способен интенсифицировать физиологические процессы клеток без дополнительных затрат питательных сред и энергоносителей безвредность и доступность используемых компонентов применение предлагаемого способа позволит дополнительно без изменения технологии изготовления существенно снизить производственные затраты на изготовление вакцины и увеличить выход ее на 181-186 . Пример Источники информации 1. Жарков И.И. Морфологическая изменчивостьна сывороточном сусло-агаре // Контроль качества и стандартизация биопрепаратов, фармакологических средств, кормовых добавок, применяемых в ветеринарии и животноводстве Сб. науч. трудов. - М., 1982. - С. 61-68. 2. Летягин К.П., Яблочкин Л.М., Мохина Т.Н. Естественная изменчивость// Контроль качества и стандартизация биопрепаратов, фармакологических средств, кормовых добавок, применяемых в ветеринарии и животноводстве Сб. науч. трудов. - М., 1982. - С. 65-68. 3. Летягин К.П, Мохина Т.Н. Влияние температуры на спорогенез дерматофитов // Контроль и стандартизация средств специфической профилактики и диагностики инфекционных болезней животных Сб. науч. трудов. - М., 1984. - С. 74-79. 4. Яблочкин Л.М., Мохина Т.Н., Летягин К.П. Влияние хлористого натрия на рост и спорообразование дерматофитов // Разработка методов проверки биологических свойств производственных штаммов микроорганизмов и диагностических препаратов Сб. науч. трудов. - М., 1983. - С. 41-46. 5. Яблочкин Л.М., Мохина Т.Н., Летягин К.П. Изменчивость, 1908 под влиянием акридинов // Разработка методов проверки биологических свойств производственных штаммов микроорганизмов и диагностических препаратов Сб. науч. трудов. - М., 1983. - С. 46-41. 6.2074251 С 1 1997. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4