Плотная яично-овощная питательная среда Кузнецова для выращивания микобактерий туберкулеза

ПЛОТНАЯ ЯИЧНО-ОВОЩНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА КУЗНЕЦОВА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Кузнецов Олег Евгеньевич Гельберг Илья Самуилович(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(56) Ященко Т.Н. и др. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - М. Медицина, 1973. - С. 149150.2059728 1, 1996.2121000 1, 1998.92014100 , 1996.2192472 2, 2002.325879, 1973.575888, 1979.839254, 1982.1643612 1, 1991. Самилло Г.К. и др. Проблемы туберкулеза. - 1988. -12. - С. 62-63.(57) Плотная яичная питательная среда для выращивания микобактерий туберкулеза, содержащая яйцо куриное цельное, солевой раствор, состоящий из калия однозамещенного фосфорнокислого, магнезии сернокислой, магнезии лимоннокислой, -аспарагина, глицерина и воды дистиллированной, и 2 раствор малахитовой зелени, отличающаяся тем,что дополнительно содержит фильтрат отвара, приготовленного из 300 г фасоли белой,300 г картофеля, 300 г моркови и 2 л воды, при следующем соотношении компонентов яйцо куриное цельное, шт. 10 солевой раствор, мл 300 2 раствор малахитовой зелени, мл 20 фильтрат отвара, мл 300,при этом солевой раствор содержит компоненты в следующем соотношении калий однозамещенный фосфорнокис 0,6 лый, г магнезия сернокислая, г 0,06 магнезия лимоннокислая, г 0,15-аспарагин, г 0,9 глицерин, мл 3,0 вода дистиллированная, мл 300. Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может использоваться для культивирования микобактерий туберкулеза. 8560 1 2006.10.30 Трудности выделения микобактерий туберкулеза (МБТ) из патологического материала связаны с биологическими особенностями возбудителя (медленность роста), а также со снижением жизнеспособности микобактерий в результате применения антибактериальных препаратов для лечения туберкулеза и различных методов обработки при посеве материала. В настоящее время существует большое количество питательных сред для культивирования микобактерий. Однако именно большое количество питательных сред, предлагаемых для выделения микобактерий туберкулеза из патологического материала, говорит о том, что среды далеко не всегда отвечают необходимым требованиям. Это и явилось поводом для создания предлагаемого изобретения. Известна среда Гельберга для выращивания микобактерий туберкулеза, состоящая из 6 цельных яиц, 4 желтков, молока, картофельного отвара и раствора солей, содержащего калий двухосновной фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магнезию сернокислую,пептон и глицерин (Ященко Т.Н., Мечева И.С. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - . Медицина, 1973. - С. 150-151). Недостатком данной среды является трудоемкость в ее производстве и высокая стоимость. Известна среда Новая (Г. Мордовского), состоящая из равных объемов желтков куриных яиц и питательного раствора, в который входят калий одноосновной фосфорнокислый, натрий лимоннокислый, магний сернокислый, гликокол, глицерин (Ященко Т.Н.,Мечева И.С. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - . Медицина, 1973. - С. 151). Недостатком данной среды является высокая стоимость. Наиболее близкой к предлагаемой является среда Левенштейна-Йенсена. (Ященко Т.Н., Мечева И.С. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. - . Медицина, 1973. - С. 149-150). Среда состоит из 1 л яичной массы, полученной из 10-15 яиц, к которой добавляют 600 мл солевого раствора и 20 мл 2 стерильного раствора малахитовой зелени. Солевой раствор содержит калий однозамещенный фосфорнокислый 2,4 г, магнезию сернокислую - 0,24 г, магнезию лимоннокислую - 0,6 г, -аспарагин 3,6 г, глицерин - 12 мл, воду дистиллированную - 600 мл. Недостатком данной среды является ее высокая стоимость. Задача изобретения - создание более дешевой питательной среды с сохранением качества исследования микобактерий туберкулеза. Поставленная задача решается путем создания яичной плотной питательной среды следующего состава 300 мл фильтрата отваров белой фасоли (300 г), картофеля (300 г),моркови (300 г), 300 мл солевого раствора, состоящего из калия однозамещенного фосфорнокислого - 0,6 г, магнезии сернокислой - 0,06 г, магнезии лимоннокислой - 0,15 г,-аспарагина - 0,9 г, глицерина - 3,0 мл, воды дистиллированной - 300 мл, т.е. концентрация солевого раствора в 2 раза меньше, чем в прототипе, 10 цельных яиц и 20 мл 2 малахитовой зелени. При подборе ингредиентов для предлагаемой питательной яичной среды исходили из того, чтобы обеспечить нужное количество и качество белкового состава за счет фасоли и яиц, углеводов за счет картофеля и витаминов за счет моркови. Смесь приготавливают следующим образом. Фасоль (300 г) замачивают в 1 л дистиллированной воды (на 20 часов). Затем доводят объем воды до 2,0 литров и кипятят 20 минут на малом огне с закрытой крышкой. К кипящему отвару добавляют в измельченном виде 300 г картофеля и 300 г моркови и продолжают кипятить еще 20 минут. Горячий отвар фильтруют через стерильный марлевый фильтр в стерильный флакон. 300 мл стерильного остывшего фильтрата прибавляют к 10 гомогенизированным в стерильной колбе яйцам, приливают солевой раствор и 20 мл 2 малахитового зеленого. Тщательно размешав полученный яично-овощной раствор, фильтруют его через стерильный марлевый фильтр в стерильный флакон. Готовую среду разливают в стерильные пробирки (4-5 мл) и 2 8560 1 2006.10.30 сворачивают в свертывателе (трижды доводя температуру до 80 С). Предлагаемая среда хорошо сворачивается, не отстает от стенок пробирок и по внешним свойствам (цвет) напоминает среду Левенштейна-Йенсена, что положительно сказывается на работе врача и фельдшера не создает никаких трудностей при дифференцировке выросших колоний МБТ. Кроме того, приготовленный фильтрат отваров белой фасоли, картофеля и моркови может храниться при 0-4 С в течение 3-х месяцев, не меняя своих свойств. Были проведены сравнительные испытания в отношении роста МБТ яичной среды Кузнецова и среды Левенштейна-Йенсена. Провели 22 сравнительных посева чистой культуры .на среду Кузнецова и на среду Левенштейна-Йенсена. Было установлено, что чистая культура МБТ растет на среде Кузнецова так же хорошо, как и на среде Левенштейна-Йенсена (75 роста на 7-й день, 100 роста на 8-й день инкубации). Цвет и форма колоний МБТ на обеих средах идентичны друг другу (-формы). Массивность роста оценивалась по 3-балльной системе (в плюсах) и отражена в таблице. Среда Кузнецова Левенштейна-Йенсена До 20 колоний МБТ на поверхности среды , выраженный рост , сплошной рост по поверхности среды . Хотя рост на 8-й день наблюдался в 100 случаев в обеих средах, все же массивность роста к 8 дню преобладала на яичной питательной среде Кузнецова. Было произведено 80 сравнительных посевов мокроты от пациентов, страдающих туберкулезом (бактериовыделителей), и установлено следующее скорость первичного роста МБТ на испытуемой яичной среде Кузнецова идентична скорости первичного роста МБТ на среде Левенштейна-Йенсена рост во всех пробирках на обеих средах идентичен друг другу и одновременен. Таким образом, предлагаемая плотная яичная питательная среда Кузнецова обеспечивает культивирование МБТ аналогично среде Левенштейна-Йенсена, и при этом стоимость ее в 2,5-3,5 раза ниже стоимости среды Левенштейна-Йенсена. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3