Стимулятор роста возбудителя туберкулеза и способ выделения возбудителя туберкулеза

Изобретение относится К медицинской И ветеринарной микробиологии И может быть использовано в научно-исследовательских И производственных лабораториях медицинского И ветеринарного профиля.В медицинской И ветеринарной микробиологии Известны стимуляторы роста возбудителя туберкулеза, способы выделения возбудителя туберкулеза, питательные среды для выделения возбудителя туберкулеза, способы ее приготовления.Известен стимулятор роста, содержащий химические реактивы (соединения), в состав которых входят натрий, кислород, водород, углерод 1. Он позволяет сократить время роста микобактерий туберкулеза, но не в достаточной мере.Наиболее близким к заявляемому является известный стимулятор роста, содержащий химические реактивы (соединения), в состав которых входят натрий, кислород, водород,углерод 2. Такой стимулятор также позволяет сократить время роста микобактерий туберкулеза, но тоже не в достаточной мере, кроме того, затраты на его осуществление могут быть снижены.Известен способ выделения возбудителя туберкулеза на питательной среде, предусматривающий приготовление среды, подготовку патологического материала, высев патологического материала на питательную среду с последующим термостатированием З. Такой способ позволяет упростить методику исследований, улучщить условия безопасности, однако он довольно продолжителен.Наиболее близким к заявляемому способу выделения возбудителя туберкулеза на питательной среде является способ, который предусматривает приготовление среды, подготовку патологического материала, высев патологического материала на питательную среду с последующим термостатированием 4. Благодаря такому современному способу,спустя довольно короткий срок после термостатирования, определяется рост всех культур,но он может быть усовершенствован как по сроку определения роста культур, так И по снижению материальных затрат на его осуществление.Известна питательная среда для выделения возбудителя туберкулеза, которая содержит питательные белковую И полисахаридную составные, химические реагенты, растворитель 5. Но она не содержит достаточного набора ингредиентов для ускорения вь 1 деления возбудителя.Наиболее близкой к заявляемой питательной среде является питательная среда для выделения возбудителя туберкулеза, которая содержит питательные белковую И полисахаридную составные, химические реагенты, растворитель 4. Но она также не содержит достаточного набора ингредиентов для ускорения выделения возбудителя.Наиболее близким к заявляемому способу получения питательной среды является способ, который предусматривает измельчение исходных компонентов (составных среды),приготовление смеси из питательной основы И растворителя 4. Однако начало роста колоний возбудителя туберкулеза на этой среде проявляется только через 20-60 суток, а иногда через 3 месяца.Задачей заявляемого изобретения является создание стимулятора роста возбудителя туберкулеза, который за счет нового состава позволил бы ускорить рост микобактерий туберкулеза, что способствовало бы сокращению продолжительности инкубирования материала до 18-24 ч.Задачей заявляемого изобретения является создание способа выделения возбудителя туберкулеза на питательной среде, в которой за счет особых операций, применения особого реагента для обработки посевного материала И особой питательной среды было бы возможным сократить продолжительность инкубирования материала до 20-28 ч, время диагностики туберкулеза И бактериологические исследования в 30-90 раз.Поставленная задача достигается следующим образом.Согласно изобретению, стимулятор роста возбудителя туберкулеза содержит химические соединения, в состав которых входят элементы натрий, кислород, водород, углерод.Новым является то, что он содержит смесь сахарозы, натрия углекислого, а также реактив ВКГ, в состав которого входят натрий, кислород, водород, углерод в массовом соотнощении 3,5126,3245,6124,56 соответственно, растворитель в виде дистиллированной или бидистиллированной воды в следующем соотношении этих компонентовсахароза 2,0-4,0 г натрий углекислый 0,05-0,15 г реактив ВКГ, в состав которого входят натрий, кислород, во дород, углерод О,3-О,5 мл растворитель до 1000 мл (остальное).Реактив ВКГ применяют в виде 7-25 -ного водного раствора.В качестве растворителя применяют дистиллированную или бидистиллированную воду.Соответственно заявляемому изобретению способ выделения возбудителя туберкулеза на питательной среде предусматривает приготовление питательной основы, подготовку патологического материала, высев патологического материала на питательную основу,последующее термостатирование. Новым в заявляемом способе является то, что перед вь 1 севом на питательную основу подготовленный посевной материал обрабатывают стимулятором роста возбудителя туберкулеза, содержащим сахарозу, натрий углекислый, реактив ВКГ, в состав которого входят натрий, кислород, водород, углерод в массовом соотнощении 3,5126,3245,6124,56, на протяжении 24-48 ч при температуре 36-38 С. Затем посевной материал вместе со стимулятором роста возбудителя туберкулеза, которым его обрабатывали, вносят в чащки Петри в дозе 0,5-1,5 мл на питательную основу, содержащую белковую составную в виде сухого ферментативного пептона, полисахаридную составную в виде крахмала картофельного, агар-агар, натрий углекислый, стимулятор кальЦийзависимь 1 х ферментов. Питательную основу готовят непосредственно перед засевом патологического материала, а чащки Петри со средой и посевным материалом не переворачивают и располагают в термостате крыщками вверх.Перед высевом стимулятор роста возбудителя туберкулеза к подготовленному патологическому материалу добавляют в массовом соотнощении от 11 до 121,5 соответственно.Согласно заявляемому изобретению, питательная среда для выделения возбудителя туберкулеза содержит питательные белковую и полисахаридную составные, химические реагенты, растворитель. Белковую составную она содержит в виде сухого ферментативного пептона, полисахаридную составную - в виде крахмала картофельного, кроме того, дополнительно в состав питательной среды входят агар-агар, натрий углекислый, стимулятор кальцийзависимых ферментов, стимулятор роста возбудителя туберкулеза, содержащий сахарозу, натрий углекислый и реактив ВКГ, в состав которого, в свою очередь, входят натрий,кислород, водород, углерод в массовом соотнощении 3,5126,3245,6124,56 соответственно,при следующем соотнощении всех компонентов питательной среды, мас.сухой ферментативный пептон 5-7 агар-агар (агар микробиологический) 1,4-1,6 натрий углекислый 0,005-0,015 крахмал картофельный 1,377-1,577 стимулятор кальцийзависимых ферментов 0,012-0,014стимулятор роста возбудителя туберкулеза, содержащий сахарозу, на трий углекислый, реактив ВКГ, в состав которого входят натрий, ки слород, водород, углерод в массовом соотнощениирастворитель остальное. В качестве стимулятора кальцийзависимых ферментов применяют кальций хлори стый. Стимулятор роста возбудителя туберкулеза применяют в виде водного раствора.Содержание аминного азота в готовой питательной среде составляет не менее 1,8 . В со ответствии с заявляемым изобретением способ получения питательной среды предусмат В 17045 С 12005.06.30ривает приготовление смеси из питательной основы, содержащей питательные белковую и полисахаридную составные, химические реагенты, растворитель. Новым в заявляемом способе является то, что К питательной основе для культивирования микобактерий добавляют стимулирующий раствор в виде стимулятора роста возбудителя туберкулеза для ускорения роста возбудителя туберкулеза в массовом соотношении от 120 до 125 соответственно. Питательную основу готовят путем перемешивания сухого ферментативного пептона, полисахаридной составной в виде крахмала картофельного, агар-агара, натрия углекислого, стимулятора кальцийзависимь 1 х ферментов. Стимулятор роста возбудителя туберкулеза готовят в отдельности путем перемешивания смеси сахарозы, натрия углекислого, а также реактива ВКГ, в состав которого входят натрий, кислород, водород, углерод в массовом соотношении 3,5126,3245,6124,56 соответственно, и растворитель в виде дистиллированной или бидистиллированной воды.Растворимость, прозрачность и окрашенность питательной основы характеризуется прозрачным желтой окраски раствором, который получают после кипячения полностью растворенной навески питательной основы весом 9 г в 100 мл дистиллированной воды при ее перемешивании и кипячении на протяжении 2-3 мин.Перемешивание компонентов осуществляют на протяжении 5-10 мин.Питательную основу в количества 9,0 г размешивают в 100 мл очищенной воды, кипятят 2-3 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, после чего стерилизуют при температуре (121 1 1) С на протяжении 15 мин в паровом стерилизаторе.После стерилизации питательную основу разливают в асептических условиях в стерильные чашки Петри слоем 6-8 мм.Совокупность всех признаков заявляемых изобретений, которые объединены единым творческим замыслом, позволяет получить технический результат, а именно сократить продолжительность инкубирования материала до 18-24 ч, время диагностики туберкулеза, повь 1 сить чувствительность метода, сократить бактериологические исследования в 30-90 раз.За счет совокупности признаков стимулятора роста возбудителя туберкулеза, способа выделения возбудителя туберкулеза, питательной среды для выделения возбудителя туберкулеза, способа ее приготовления создается синергетический эффект, который обусловливает сокращение продолжительности инкубирования материала с одновременным повышением чувствительности метода и, как результат, резкое сокращение продолжительности и объема бактериологических исследований в 30-90 раз.При этом питательная среда предназначена для эффективного культивирования микобактерий туберкулеза, их ускоренного выявления в инфицированном материале (кровь,мокроты, моча и прочее). Эффективность предложенной питательной среды состоит в ее специфичности, ускоренном росте возбудителей туберкулеза в первичных посевах материала. Одновременно с этим увеличивается выход - урожайность микробактерий туберкулеза на питательной среде, что обеспечивает более высокую точность диагностики туберкулеза.В результате исследований установлено, что на среде, принятой за прототип, рост микробактерий появился через 20-60 суток всех культур, взятых на исследование. На предложенной среде через 20-24 часа после термостатирования отмечался рост всех культур. Через 72 ч наблюдался газонный рост колоний микобактерий.Количественное содержание всех компонентов в заявляемых составах, количественные характеристики способов в заявляемых границах являются необходимыми, оптимальными для проявления их положительных свойств и достижения технического результата.Предложенные решения позволяют при высоком уровне чувствительности сократить бактериологические исследования в 30-90 раз.Таким образом, заявляемые решения отвечают критериям новизны и изобретательского уровня.Практическое осуществление заявляемых решений иллюстрируется последующими примерами. При этом примеры приведены по содержанию, характеризирующему единство замысла заявляемых изобретений.Способ выделения возбудителя туберкулеза на питательной среде в соответствии с заявляемь 1 м решением осуществляют в следующей последовательности.Для выделения возбудителя туберкулеза готовят питательную основу, осуществляют подготовку патологического материала для его последующего высева на питательную основу, при этом посевной материал обрабатывают по общеизвестной методике и, кроме того, его обрабатывают стимулятором роста возбудителя туберкулеза. Питательную основу для выделения возбудителя туберкулеза готовят непосредственно перед высевом патологического материала.В качестве контрольной берут питательную среду по прототипу. Контролем служили тесткультуры микроорганизмов МусоЬасгегйиш гиЬегс 111 о 515 Н 37 КУ - возбудитель туберкулеза людей, МусоЬасгегйиш ЬоЫз - возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота. Подготовленный контрольный посевной материал перед высевом обрабатывают стимулятором роста возбудителя туберкулеза, содержащим сахарозу, натрий углекислый, реактив ВКГ, в состав которого входят натрий, кислород, водород, углерод в массовом соотнощении 3,5126,3245,6124,56. Обработку посевного материала осуществляют на протяжении 24-48 ч при температуре 36-38 С.Затем патологический материал (посевной материал - мокроты, кровь, спинномозговая жидкость, части тканей и прочее), так же как и тесткультуры микроорганизмов,перед высевом обрабатывают стимулятором роста возбудителя туберкулеза. К подготовленному в соответствии с общепринятым методом патологическому материалу добавляют стимулятор роста возбудителя туберкулеза в массовом соотнощении 11, после чего термостатируют на протяжении 24-48 ч при температуре 36-38 С и высевают в чащки Петри на питательную основу в дозе 0,5 мл вместе со стимулятором роста возбудителя туберкулеза, которым обрабатывали этот материал. Питательная основа содержит белковую составную в виде сухого ферментативного пептона, полисахаридную составную в виде крахмала картофельного, агар-агар, натрий углекислый, стимулятор кальцийзависимых ферментов. Засеяннь 1 е чащки Петри не переворачивают и располагают в термостате крыщками вверх.Посев патологического материала на питательной среде в чащках Петри выдерживают в термостатах при температуре (36 1 1) С на протяжении 1-5 суток. Отсутствие роста микобактерий после 5 суток считается отрицательным результатом, что подтверждает отсутствие заболевания. По прототипу такой результат можно получить не ранее 60-90 суток.Состав питательной среды содержит питательную белковую основу в виде сухого ферментативного пептона, полисахаридную составную в виде крахмала картофельного. Кроме того, дополнительно в ее состав входят агар-агар, натрий углекислый, стимулятор кальцийзависимых ферментов, стимулятор роста возбудителя туберкулеза при следующем соотнощении всех компонентов, мас.сухой ферментативный пептон (ГОСТ 13805-76) 6 агар-агар (агар микробиологический ГОСТ 17206-84) 1,5 натрий углекислый (ГОСТ 83-79) 0,01 крахмал картофельный (ГОСТ 7699-95) 1,477 стимулятор кальцийзависимых ферментов(кальций хлористый ТУ 6-09-5077-83) 0,013 стимулятор роста возбудителя туберкулеза 15,0 растворитель остальное (до 1000 мл).Содержание аминного азота в готовой питательной среде составляет 1,87 . Питательную среду получают следующим образом.