Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

12 1/02 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Институт микробиологии НАН Беларуси(72) Авторы Капич Александр Николаевич Гвоздкова Татьяна Семеновна Сорока Оксана Николаевна(73) Патентообладатель Институт микробиологии НАН Беларуси(57) Способ получения кетокаротиноидов, предусматривающий культивирование продуцирующего кетокаротиноиды микроорганизма на жидкой питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора, серы, калия, магния и факторов роста, отличающийся тем, что в качестве продуцирующего микроорганизма используют гриб(. .) ., а культивирование гриба осуществляют при рН среды 2,0-3,0.(56)0438182 1, 1991.2053301 1, 1996.93/20183 1.4318987 , 1982.93/20198 1. Изобретение относится к биотехнологии, а именно к микробиологическим способам получения кетокаротиноидов и биомасс микроорганизмов, содержащих кетокаротиноиды,которые могут быть использованы в медицине, животноводстве, пищевой и косметической промышленностях. К кетокаротиноидам относятся каротиноиды, содержащие одну или несколько кето групп в молекуле, например астаксантин, кантаксантин и др. Наличие кето групп в молекулах каротиноидов обусловливает их повышенные антиоксидантные свойства, что делает перспективным их применение в перечисленных отраслях. Известен способ получения кетокаротиноидов, в частности астаксантина, предусматривающий культивирование продуцирующего кетокаротиноиды микроорганизма на жидкой питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора, серы, калия,магния и факторов роста, при этом в качестве продуцирующих микроорганизмов используют природные штаммы дрожжей 1. Недостатком этого способа получения кетокаротиноидов является низкая продуктивность природных штаммов дрожжей. Содержание кетокаротиноидов в их биомассе не превышает 400 мкг/г сухой биомассы дрожжей. 4914 1 Известен также способ получения кетокаротиноидов, в частности астаксантина, предусматривающий культивирование продуцирующего кетокаротиноиды микроорганизма на жидкой питательной среде, при этом в качестве продуцирующих микроорганизмов используют новые штаммы, полученные методом экспериментального мутагенеза и содержащие от 2700 до 8025 мкг астаксантина в г сухой биомассы 2. Недостатком данного способа является также сравнительно низкое содержание кетокаротиноидов в биомассе. Кроме того, выращивание дрожжейпроводят при температуре 18-22 С, при рН среды 4,5-5,4, в среднем в течение 5 суток. Это требует строгого соблюдения стерильности, что обусловливает нестабильность процесса получения кетокаротиноидов. Задачей данного изобретения является увеличение содержания кетокаротиноидов в биомассе микроорганизмов и стабилизация процесса получения содержащей кетокаротиноиды биомассы за счет использования неизвестного ранее в качестве продуцента кетокаротиноидов вида грибов, обладающего повышенным содержанием кетокаротиноидов в мицелии и растущего при низких значениях рН среды, что позволяет осуществлять процесс выращивания гриба в полустерильных условиях, т.е. обеспечивает стабилизацию процесса. Поставленная задача достигается тем, что в качестве продуцирующего микроорганизма используют гриб(. .) .,культивирование гриба осуществляется на жидкой питательной среде при рН 2,0-3,0. Отличие предлагаемого способа заключается в том, что никогда ранее гриб .не предлагался в качестве продуцента каротиноидов и, в частности, кетокаротиноидов. Данное изобретение основано на обнаруженном нами свойстве .активно продуцировать кетокаротиноиды в условиях глубинного культивирования. Кроме того, нами экспериментально установлено, что в отличие от большинства других видов грибов .активно растет и продуцирует кетокаротиноиды при низких значениях рН среды (2,0-3,0), что обеспечивает стабильность процесса производства кетокаротиноидов. Предлагаемый способ получения кетокаротиноидов осуществляется следующим образом. Готовят жидкую питательную среду, содержащую источник углерода, азота, фосфора, серы, калия и магния. Начальный рН среды устанавливают с помощью кислоты в пределах 2,0-3,0. Приготовленную питательную среду разливают по колбам и стерилизуют в автоклаве, после чего охлаждают. В колбы с питательной средой вносят в качестве посевного материала мицелий гриба . , выращенный на жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивирование в колбах осуществляют на качалке при температуре 26-28 С в течение 5-7 суток. Мицелий отделяют фильтрованием, разрушают тем или иным способом и производят экстракцию кетокаротиноидов органическими растворителями. Пример 1. В качестве питательной среды используют глюкозо-пептонную среду следующего состава, г/л глюкоза - 15 пептон - 3,0 КН 2 РО 4 - 0,6 К 2 НРО 422 О - 0,4 472 0,5 кукурузный экстракт - 3,0. Начальный рН доводят раствором серной кислоты до 2,0. Питательную среду разливают по 150 мл в колбы на 500 мл, стерилизуют при 0,75 атм в течение 30 мин, после чего охлаждают до температуры 26 С. Посевным материалом служит мицелий штамма .131, выращенный на жидкой питательной среде аналогичного состава. Для получения посевного материала 300 мл жидкой питательной среды в 1 л колбе засевают смывом одного косяка культуры .131, выращенной на сусло-агаре. Посевной материал измельчают с помощью фарфоровых бус и вносят в питательную среду в количестве 15 мл (10 от объема среды). Колбы ставят на качалку(160 об/мин) и выращивают при температуре 26-28 С в течение 7 суток. Мицелий отделяют фильтрованием на плотной нейлоновой ткани. Полученный мицелий разрушают 4914 1 растиранием с кварцевым песком и экстрагируют кетокаротиноиды ацетоном из расчета 100 мл ацетона на 1 г влажного мицелия. Содержание кетокаротиноидов в биомассе составляет 11640 мкг/г сухого мицелия. Пример 2. Штамм гриба .131 выращивают в колбах на качалке на глюкозопептонной среде с начальным рН 3,0 в течение 5 суток. Мицелий собирают фильтрованием, разрушают растиранием с кварцевым песком и экстрагируют кетокаротиноиды этиловым спиртом. Содержание кетокаротиноидов в биомассе составляет 5950 мкг/г сухого мицелия. Основные 3 фракции кетокаротиноидов, экстрагируемые из мицелия, могут быть разделены методом тонкослойной хроматографии на пластинахв системе растворителей серный эфиргексан (73). Наличие кето групп во всех 3-х фракциях пигментов и их каротиноидная природа подтверждается в тесте с борогидритом натрия. Обработка спиртовых растворов индивидуальных фракций пигментов штамма .131 борогидритом натрия сопровождается гипсохромным сдвигом максимумов поглощения в течение 5 мин на 29 нм (т.е. сдвигом в коротковолновую сторону с 450 нм до 431 нм), что свидетельствует о наличии кето групп в молекулах и их сопряжении с основной цепочкой двойных связей, а проявление характерного трехпикового спектра (тонкой структуры спектра) подтверждает каротиноидную природу данных соединений. Источники информации 1.,//, 1979. .115. - . 173-183. 2.0438182, МПК 12 23/00, 1991. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.

МПК / Метки

МПК: C12P 1/02, C12P 23/00

Метки: кетокаротиноидов, получения, способ

Код ссылки

<a href="https://by.patents.su/3-4914-sposob-polucheniya-ketokarotinoidov.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Способ получения кетокаротиноидов</a>

Похожие патенты