Раствор для создания разграничивающей линии на предметном стекле при иммуногисто(цито)химических исследованиях

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ РАСТВОР ДЛЯ СОЗДАНИЯ РАЗГРАНИЧИВАЮЩЕЙ ЛИНИИ НА ПРЕДМЕТНОМ СТЕКЛЕ ПРИ ИММУНОГИСТО(ЦИТО)ХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр радиационной медицины и экологии человека(72) Авторы Надыров Эльдар Аркадьевич Ачинович Сергей Леонидович Никонович Сергей Николаевич(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр радиационной медицины и экологии человека(57) 1. Раствор для создания разграничивающей линии на предметном стекле при иммуногисто(цито)химических исследованиях, содержащий водоотталкивающий компонент и растворитель, отличающийся тем, что содержит в качестве водоотталкивающего компонента парафиновую среду для гистологической заливки, а в качестве растворителя хлороформ при следующем соотношении компонентов, мас.парафиновая среда для гистологической заливки 20-30 хлороформ 70-80. 2. Раствор по п. 1, отличающийся тем, что содержит парафиновую среду для гистологической заливки, включающую парафин и воск базисный при следующем соотношении компонентов, мас.парафин 80-95 воск базисный 5-20. Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, а точнее к способам подготовки препаратов для иммунотипирования при выполнении иммуногистохимии, иммуноцитохимии и при проведении гистохимических и рутинных гистологических исследований. Известен способ предотвращающий растекание и потерю концентрации реагентов, необходимых для адекватного проведения иммуногистохимического исследования, который заключается в создании на предметном стекле вокруг гистологического среза или участка(ов) цитологического мазка разграничительной линии с помощью специальных карандашей. Целью применения такого карандаша является создание водоотталкивающего барьера, нерастворимого в агрессивных химических растворах, применяемых на этапах 13985 1 2011.02.28 окрашивания препарата. В настоящее время для этих целей используются разграничивающие карандаши фирм-производителей ,и др. на основе комбинации водоотталкивающего компонента и растворителя. Так, в состав карандаша 2002 входит 5-10 дипентена и 60-1001-бромопропана 1. При проведении иммуногистохимического или иммуноцитохимического исследования гистологический срез ткани или участок цитологического мазка последовательно в 4 этапа подвергается воздействию растворов первичных, вторичных антител, стрептавидина и диаминобензидина. Поддержание необходимойсреды для проведения реакции достигается путем промывания предметного стекла после каждого этапа раствором буфера. Наличие детергентов в растворе буфера приводит к размыванию с предметного стекла разграничивающей линии. Недостатками составов известных карандашей являются относительно быстрое размывание разграничивающей линии с последующим растеканием химического реагента за ее пределы, что приводит к потере необходимой концентрации реагента и нарушению адекватности проведения иммуногисто(цито)химической реакции и смешиванию растворов первичных антител при одновременном определении на одном предметном стекле нескольких иммуногисто(цито)химических маркеров высокая стоимость карандашей токсичность химических компонентов, входящих в состав рабочего раствора для разграничивающего карандаша высокая вероятность воспламенения. Задачей предлагаемого изобретения является разработка состава раствора для создания разграничивающей линии из смеси реактивов, обладающих водоотталкивающими свойствами и устойчивых к воздействию детергентов, входящих в состав буферного раствора, но при этом растворимых в ксилоле. Задача решается за счет того, что раствор для создания разграничивающей линии на предметном стекле при иммуногисто(цито)химических исследованиях, содержащий водоотталкивающий компонент и растворитель, в качестве водоотталкивающего компонента содержит парафиновую среду для гистологической заливки, а в качестве растворителя хлороформ при следующем соотношении компонентов, мас.парафиновая среда для гистологической заливки 20-30 хлороформ 70-80. Парафиновая среда для гистологической заливки включает парафин и воск базисный при следующем соотношении компонентов, мас.парафин 80-95 воск базисный 5-20. Для приготовления рабочего раствора смешивают компоненты в указанных пропорциях, в течение 2-3 минут подогревают на водяной бане при 50 С до появления жидкой консистенции. Приготовленный раствор заливается в шприц-тюбик или в рапидограф и хранится при комнатной температуре. Использование хлороформа в качестве растворителя для парафиновой среды обусловлено оптимальным соотношением цена-качество, что выражается в полном растворении парафиновой среды до однородного состояния в течение короткого промежутка времени при температуре до 50 С. Предлагаемое соотношение компонентов обеспечивает оптимальную консистенцию раствора, позволяющую наносить сплошную без разрывов барьерную линию заданной толщины и ширины. Пример 1. Приготовлен раствор для создания разграничивающей линии на предметном стекле при иммуно(цито)гистохимическом исследовании следующего состава (мас. ) парафиновая среда для гистологической заливки - 20, хлороформ - 80. При этом парафиновая среда для гистологической заливки состояла из 95 мас.парафина и 5 мас.воска ба 2 13985 1 2011.02.28 зисного. Приготовленный раствор залит в рапидограф фирмы с толщиной наконечника 1,4 мм. Циркулярную линию наносили однократно без отрыва от предметного стекла. При этом ширина линии варьировала от 1,5 до 1,7 мм. Далее предметное стекло с гистологическим срезом ткани подвергалось в четыре этапа воздействию растворов первичных, вторичных антител, стрептавидина и диаминобензидина, с промежуточной промывкой после каждого этапа раствором -буфера. По завершении последнего этапа обработки толщина барьерной линии осталась без изменений, ее непрерывность была полностью сохранена. Пример 2. Приготовлен раствор для создания разграничивающей линии на предметном стекле при иммуно(цито)гистохимическом исследовании следующего состава (мас. ) парафиновая среда для гистологической заливки - 30, хлороформ - 70. При этом парафиновая среда для гистологической заливки состояла из 80 мас.парафина и 20 мас.воска базисного. Приготовленный раствор залит в рапидограф фирмы с толщиной наконечника 1,4 мм. Циркулярную линию наносили однократно без отрыва от предметного стекла. При этом ширина линии варьировала от 1,5 до 1,7 мм. Далее предметное стекло с гистологическим срезом ткани подвергалось в четыре этапа воздействию растворов первичных, вторичных антител, стрептавидина и диаминобензидина, с промежуточной промывкой после каждого этапа раствором -буфера. По завершении последнего этапа обработки толщина барьерной линии осталась без изменений, ее непрерывность была полностью сохранена. Пример 3. Циркулярную линию с использованием карандашананосили однократно без отрыва от предметного стекла. При этом ширина линии варьировала от 2 до 2,5 мм. Далее предметное стекло с гистологическим срезом ткани подвергалось в четыре этапа воздействию растворов первичных, вторичных антител, стрептавидина и диаминобензидина, с промежуточной промывкой после каждого этапа раствором -буфера. По завершении последнего этапа обработки толщина барьерной линии уменьшилась, причем на некоторых участках была нарушена ее целостность, что привело к растеканию растворов. С применением предлагаемого раствора для создания разграничивающей линии на предметном стекле при иммуно(цито)гистохимическом исследовании были исследованы 50 предметных стекол с гистологическими срезами злокачественных опухолей. Все нанесенные ограничительные линии к окончанию процедуры иммуногистохимического окрашивания сохранили свои барьерные функции. При использовании традиционного ограничительного карандаша фирмы изготовителяполное сохранение линий наблюдалось в 35 стеклах из 50. Предлагаемый раствор прост в приготовлении и применении, легко воспроизводим в лабораториях лечебно-профилактических учреждений, не требует применения дорогостоящих реактивов и специального оборудования, не содержит токсичных и легковоспламеняющихся веществ. Обладает высокими водоотталкивающими свойствами и не размывается химическими растворами во время обработки препарата, что позволяет проводить одновременное определение несколько иммуногисто(цито)химических маркеров на одном предметном стекле при ручной обработке. Предлагаемый раствор также применим при проведении микро- -исследований. Источники информации 1. Инструкция к применению карандаша 2002. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3