Способ определения содержания лактулозы в молоке

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЛАКТУЛОЗЫ В МОЛОКЕ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Белышева Людмила Леонидовна Соколов Сергей Михайлович Воронцова Ольга Сергеевна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(57) Способ определения содержания лактулозы в молоке, отличающийся тем, что пробу испытуемого молока, содержащего лактулозу, и пробу молока, не содержащего лактулозу,термостатируют при температуре 20 С в течение 30 мин, гидролизуют 4,6 М серной кислотой в течение 15 мин в кипящей водяной бане, фильтруют, разбавляют гидролизаты дистиллированной водой в соотношении 12 и измеряют при длине волны 285 нм оптическую плотность разведенного гидролизата пробы испытуемого молока относительно разведенного гидролизата пробы молока, не содержащего лактулозу, находят концентрацию лактулозы С в мг/см 3 по градуировочному графику, после чего рассчитывают содержание лактулозы по формуле 100,1000 где Х - содержание лактулозы в молоке, г/100 см 3. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также к пищевой промышленности. Известен способ определения лактулозы в молоке, основанный на гидролизе лактулозы и лактозы, содержащихся в освобожденном от жира и белка водном экстракте пробы молока, в присутствии гексокиназы с образованием моносахаров - галактозы, глюкозы и фруктозы преобразовании фруктозы под действием -никотинамидадениндинуклеотидфосфата в присутствии гексокиназы, фосфоглюкозоизомеразы и глюкозо-6 фосфатдегидрогеназы и спектрофотометрическом измерении массовой доли образовавшегося -никотинамидадениндинуклеотидфосфата, восстановленной формы, эквивалентного массовой доле фруктозы, и расчете содержания лактулозы по разности оптических плотностей раствора пробы, в которой лактулоза подвергнута гидролизу, и раствора пробы,используемого при определении свободной фруктозы 1. 12802 1 2010.02.28 Способ является прототипом по отношению к заявляемому. Однако указанный способ имеет недостатки. Во-первых, гидролиз проводится в течение 10 часов, затем проводят окисление глюкозы, находящейся в гидролизате, в течение 3 часов, что значительно удлиняет время анализа. Общее время анализа 15 часов. Вовторых, при его применении необходимо использовать большое количество реактивов и дорогостоящих ферментов. Лактулоза является пребиотиком. В настоящее время ею обогащают широкий круг продуктов питания, в том числе и молоко, в связи с чем возникает необходимость в проведении экспресс-анализа такой продукции. Задачей заявляемого изобретения является создание экспресс-способа определения лактулозы в молоке с высокой точностью. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ определения содержания лактулозы в молоке, когда пробу испытуемого молока и пробу молока, не содержащего лактулозу, термостатируют при температуре 20 С в течение 30 мин, гидролизуют 4,6 М серной кислотой в течение 15 мин в кипящей водяной бане, фильтруют, разбавляют гидролизат дистиллированной водой в соотношении 12 и измеряют при длине волны 285 нм оптическую плотность разведенного гидролизата пробы испытуемого молока относительно разведенного гидролизата пробы молока, не содержащего лактулозу, находят концентрацию лактулозы С по градуировочному графику, после чего рассчитывают содержание лактулозы по формуле 100,1000 где Х - концентрация лактулозы в молоке, г/100 см 3. Применение серной кислоты обусловлено в заявляемом способе тем, что кислотный гидролиз упрощает определение лактулозы в молоке, позволяет убрать дорогостоящие ферменты и сократить время анализа при высокой точности определения. Общее время проведения анализа по предложенному способу составляет 2 ч. Пример. Определение лактулозы в молоке. 1. Кислотный гидролиз. Молоко (300-500 см 3) термостатируют при температуре 202 С в течение 30 мин и тщательно перемешивают. В градуированные пробирки вместимостью 10 см 3 помещают 1 см 3 подготовленной пробы, добавляют 7 см 3 раствора 4,6 М серной кислоты, встряхивают. Пробирки помещают в кипящую водяную баню на 15 мин, затем быстро охлаждают под струей холодной воды, проверяют соответствие объема 8 см 3, при необходимости доводят до указанного объема дистиллированной водой. Параллельно готовят раствор сравнения в пробирку помещают 1 см 3 молока, не содержащего лактулозы, добавляют 7 см 3 раствора 4,6 М серной кислоты, встряхивают и далее проводят те же операции, как и при проведении кислотного гидролиза исследуемой пробы молока. Полученные гидролизаты растворяют в дистиллированной воде в соотношении 12. Для этого в пробирку объемом 5 см 3 отбирают 1 см 3 гидролизата и добавляют 2 см 3 дистиллированной воды. Гидролизаты молока предварительно фильтруют через бумажный фильтр. 2. Выполнение измерений. Анализ полученных растворов по п. 1 проводят на спектрофотометре. Для этого полученные по п. 1 растворы помещают в кюветку для спектрофотометрирования. Проводят анализ двух параллельных проб. Измеряют величину оптической плотности при длине волны 285 нм против раствора сравнения. Каждый раствор спектрофотометрируют не менее двух раз. 3. Обработка результатов. 2 12802 1 2010.02.28 Расчет концентрации лактулозыв г/100 см 3 для молока проводят по формуле 100,1000 где С - концентрация лактулозы, найденная по градуировочному графику (мг/см 3) 100 - расчет для 100 см 3 молока 1000 - пересчет мг в г. За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных измерений. Вычисления проводят до третьего десятичного знака и округляют до второго. Допустимое расхождение между параллельными измерениями не должно превышать 1,3 . Таким образом, достигаемый технический результат заявляемого способа заключается в том, что способ позволяет сократить время анализа в 7,5 раза и определять содержание внесенной лактулозы в молоко с высокой точностью. Определение содержания внесенной лактулозы в молоке предлагаемым способом Количество внесенной Определяемое содержание Продукт Извлечение,лактулозы, г/100 г лактулозы, г/100 г Молоко - сырье 0,1 0,1 100 Молоко пастери 0,2 0,198 99 зованное Молоко стерили 0,2 0,196 98 зованное Источники информации 1. ГОСТ 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы. Введ. 01.10.2003. - М. Госстандарт России, 2002. - 8 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3