Способ газохроматографического определения содержания хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов в женском молоке

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ И ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ БИФЕНИЛОВ В ЖЕНСКОМ МОЛОКЕ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Шуляковская Ольга Васильевна Баркатина Елена Николаевна Застенская Ирина Алексеевна Буневич Наталья Викторовна Фдорова Татьяна Аркадьевна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(56) Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде Справочник. - Т. 1. М. ВО Колос, 1992. - С. 19-25. Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. - М. Колос, 1983. С. 10-20.(57) Способ газохроматографического определения содержания хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов в женском молоке, включающий их экстракцию,отличающийся тем, что полученный экстракт хроматографируют на слабополярной колонке ДВ-1701 при давлении газа-носителя гелия на входе в колонку 100 кРа, повышении температуры колонки от 100 до 200 С со скоростью 30 С/мин, от 200 до 260 С 3 С/мин и от 260 до 280 С - 30 С/мин, температуре испарителя 250 С, температуре детектора 380 С, при этом каждый из хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов идентифицируют по времени удерживания, концентрацию каждого в экстракте рассчитывают по площади соответствующего пика, а содержание в молоке - по формуле, где Х - содержание хлорорганического пестицида или полихлорированного бифенила в молоке, мкг/см 3 С - концентрация хлорорганического пестицида или полихлорированного бифенила в экстракте, мкг/см 3- объем полученного экстракта, см 3- объем пробы женского молока, см 3. Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики. Известен способ газохроматографического определения хлорорганических пестицидов в грудном женском молоке, основанный на экстракции хлорорганических пестицидов,очистке экстрактов и их раздельном определении на колонках разной полярности 1. Способ является прототипом по отношению к заявляемому. Однако указанный способ ограничен определением только хлорорганических пестицидов. Задачей заявляемого изобретения является одновременное определение хлорорганических пестицидов (ХОП) и полихлорированных бифенилов (ПХБ). 10972 1 2008.08.30 Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ газохроматографического определения содержания хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов в женском молоке, включающий их экстракцию, при этом полученный экстракт хроматографируют на слабополярной колонке ДВ-1701 при давлении газа-носителя гелия на входе в колонку 100 кРа, повышении температуры колонки от 100 до 200 С со скоростью 30 С/мин, от 200 до 260 С - 3 С/мин и от 260 до 280 С - 30 С/мин, температуре испарителя 250 С, температуре детектора 380 С, при этом каждый из хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов идентифицируют по времени удерживания. Такой прием позволяет варьировать условия хроматографирования, получить хроматограмму с четко разделенными пиками определяемых контаминантов, что способствует повышению селективности и чувствительности определения ХОП и ПХБ. Пример. Газохроматографическое определение содержания хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов в женском молоке. 1. Экстракция. К 5-7 см 3 пробы грудного молока в делительной воронке вместимостью 50-75 см прибавляют 1 см 3 5 -ного раствора оксалата калия и 5 см 3 этанола. Встряхивают в течение 1 мин. Прибавляют 10 см 3 диэтилового эфира, встряхивают 1 мин, добавляют 5 см 3 гексана и снова встряхивают 1 мин. Отстаивают 15 мин, отделяют эфирный слой, упаривают на роторном испарителе под вакуумом при 35-40 С до 0,5 см 3. 2. Очистка и концентрирование экстракта. Остаток по п. 1 растворяют в 30 см 3 гексана, переносят в делительную воронку вместимостью 100 см 3. Для очистки экстракта добавляют серную кислоту концентрацией 95,72 вес.до тех пор, пока кислота не обесцветится. Нижний кислотный слой сливают,а очищенный экстракт промывают сначала дистиллированной водой, затем 1 -ным раствором НСО 3 и снова дистиллированной водой до рН 7. Далее очищенный экстракт количественно переносят в коническую колбу вместимостью 100 см 3, сушат 15 г безводного сульфата натрия, фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 50 см 3, отгоняют растворитель на ротационном испарителе до объема 0,5-1,0 см 3. Последние капли растворителя удаляют с помощью резиновой груши. К сухому остатку пипеткой вместимостью 1 см 3 добавляют 1 см 3 гексана, закрывают притертой стеклянной пробкой. Полученный экстракт в количестве 5 мкл вводят в хроматограф. 3. Приготовление растворов. 3.1. Приготовление основных стандартных растворов хлорорганических пестицидов концентрацией 1 мкг/см 3 (а) и полихлорированных бифенилов концентрацией 0,4 мкг/см 3 (б) а) готовят основной стандартный раствор смеси ХОП концентрацией 1 мкг/см 3. Взвешивают на часовом стекле с точностью до 0,0001 г 10 мг каждого ХОП. Навеску каждого ХОП количественно переносят в мерные колбы вместимостью 100 см 3, добавляют немного гексана. Колбы встряхивают до полного растворения вещества, затем доводят до метки гексаном. Концентрация каждого раствора ХОП составляет 100 мкг/см 3. По 1 см 3 растворов ХОП концентрацией 100 мкг/см 3 вносят в колбу вместимостью 100 см 3, доводят до метки гексаном. Концентрация каждого ХОП в смеси составляет 1 мкг/см 3. Раствор хранится в колбе с притертой пробкой в холодильнике в течение 6 месяцев б) готовят основной стандартный раствор смеси ПХБ концентрацией 0,4 мкг/см 3. По 1 см 3 раствора каждого ПХБ концентрацией 10 мкг/см 3 в изооктане вносят в колбу вместимостью 25 см 3. Доводят раствор до метки гексаном. Раствор может храниться в холодильнике в колбе с притертой пробкой в течение 6 месяцев. 3.2. Приготовление рабочего стандартного раствора смеси ХОП и ПХБ. Готовят рабочий стандартный раствор смеси ХОП и ПХБ концентрацией 0,2 мкг/см. Берут 2 см 3 и 5 см 3 раствора смеси ХОП и ПХБ соответственно пипеткой на 2 см 3 и вносят в мерную колбу вместимостью 10 см 3. Доводят до метки гексаном. Раствор хранится в колбе с притертой пробкой в холодильнике в течение месяца. 2 10972 1 2008.08.30 3.3. Приготовление градуировочных растворов смеси ХОП и ПХБ. Для приготовления градуировочных растворов смеси ХОП и ПХБ в гексане с концентрацией 0,0002 0,0004 0,0016 0,0062 0,0248 берут 0,1 мкг/см 3 рабочего стандартного раствора в мерную колбу вместимостью 10 см 3 микрошприцами на 10 мкл 25 мкл 100 мкл 500 мкл и градуировочными пипетками на 2 см 3 и 5 см 3 вносят 9,8 мкл 20 мкл 78 мкл 310 мкл и 1,24 см 3, 5 см 3 соответственно и доводят до метки гексаном. Растворы могут храниться в холодильнике в течение недели. 4. Установление времени удерживания хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов. Для определения времени удерживания ХОП и ПХБ 5 мкл рабочего стандартного раствора, приготовленного по 3.2, хроматографируют не менее 5 раз. Вычисляют среднее арифметическое из величин времени удерживания ХОП и ПХБ в пробах. Допустимое расхождение времени удерживания определяемых компонентов при хроматографировании двух параллельных проб не должно отличаться более чем на 2 от ранее установленных величин. Если время удерживания ХОП и ПХБ отличается от зафиксированного, проверяют правильность установления температурных режимов программирования колонки и давления газа-носителя. Условия хроматографирования Объем вводимой пробы 5 мкл Давление газа-носителя гелия на входе в колонку 100 кРа Температура колонки 10030 мин 200326030 мин 280/Температура испарителя 250 С Температура детектора 380 С Время удерживания исследуемых ХОП и ПХБ представлено в табл. 1 Таблица 1 Время удерживания исследуемых ХОП и ПХБ Время Время Названия удерживаНазвания изомеров ПХБ удерживаХОП ния, мин ния, мин ГХБ 5,7 ПХБ 28 (2,4,4 - трихлорбифенил) 7,7 ПХБ 52 (2,2,5,5 - тетрахлорбифенил) 6,6 8,6-ГХЦГ гептахлор 8,0 ПХБ 138 (2,2,3,4,4,5 - гексахлорбифенил) 16,0 альдрин 8,7 ПХБ 153 (2,2,4,4,5,5 - гексахлорбифенил) 14,5 ДДТ 16,6 ПХБ 180 (2,2,3,4,4,5,5 - гептахлорбифенил) 19,1 ДДД 15,9 ДДЕ 12,5 5. Установление градуировочных характеристик ХОП и ПХБ и построение градуировочного графика. Хроматографируют градуировочные растворы по 2 раза, начиная с самой низкой концентрации, принимая за результат измерения среднее арифметическое двух параллельных измерений. По полученным хроматограммам измеряют площади пиков, соответствующие концентрациям ХОП и ПХБ в градуировочных растворах. Строят градуировочные графики для каждого ХОП и ПХБ (всего 15 графиков), выражающие зависимость площадей каждого контаминанта (численные значения которых откладывают по оси ) от концентрации соответствующих градуировочных растворов (по 3.3), численные значения которых откладывают по оси . 3 10972 1 2008.08.30 При построении градуировочного графика используют не менее 5 градуировочных растворов, каждый раствор хроматографируют не менее 2 раз и вычисляют среднее арифметическое определяемых площадей. В области анализа используемых градуировочных растворов график имеет линейный характер. Графики проходят через начало координат либо имеют смещение по осина 1-2 от диапазона измерений по этой шкале. 6. Выполнение измерений. Анализ полученных экстрактов проводится на газовом хроматографе. Условия хроматографирования такие же, как и при построении градуировочного графика п. 5. ХОП и ПХБ идентифицируют по времени удерживания. Проводят расчет площади их пиков и по градуировочным графикам, построенным при анализе градуировочных растворов, находят содержание ХОП и ПХБ в гексановом экстракте. 7. Обработка результатов измерений. Содержание ХОП и ПХБ в пробе в мкг/см 3 рассчитывают по формуле, где- содержание хлорорганического пестицида или полихлорированного бифенила в молоке, мкг/см 3 С - концентрация хлорорганического пестицида или полихлорированного бифенила в экстракте, мкг/см 3- объем полученного экстракта, см 3- объем пробы женского молока, см 3. Вычисления проводят с точностью до пятого знака с последующим округлением до четвертого знака. За результат анализа принимают среднее арифметическое определений концентраций ХОП и ПХБ, найденных в двух параллельных пробах. Результаты определения ХОП и ПХБ в грудном женском молоке представлены в табл. 2. Таблица 2 Определение хлорорганических соединений в грудном женском молоке Предел обнару- Предел обнаруСпособ Время Извлечение Извлечение жения ХОП,жения ПХБ,определения анализа, ч ХОП,ПХБ,мг/см 3 мг/см 3 Известный 44,5-46,5 80-100 0,0002-0,005(по прототипу) Предлагаемый 17 85-100 85-100 0,0001 0,0001 Таким образом, заявляемый способ обладает следующими преимуществами позволяет одновременно определять ХОП и ПХБ из одного укола в хроматограф сокращает время анализа в 2,6-2,7 раза увеличивает предел обнаружения ХОП в 2-50 раз повышает точность определения. Источники информации 1. Методические указания по избирательному газохроматографическому определению хлорорганических пестицидов в биологических средах (моче, крови, жировой ткани и грудном женском молоке)3151 - 84 Сб. Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. - М. ВО Колос. - Т. 1. - 1992. С. 19-25 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4