Способ получения антигенного препарата для скрининговых исследований групп риска по туберкулезу

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕННОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ СКРИНИНГОВЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ГРУПП РИСКА ПО ТУБЕРКУЛЕЗУ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(72) Авторы Яковлева Людмила Федоровна Соколов Сергей Михайлович Федорович Сергей Владимирович Лысенко Александр Павлович(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(57) Способ получения антигенного препарата для скринингового исследования групп риска по туберкулезу, заключающийся в том, что суспензируют клетки . 37 в 0,25 растворе фенилового спирта с последующим замораживанием и размораживанием суспензии со сменой раствора фенилового спирта, после чего обрабатывают суспензию клеток ультразвуком частотой 15-35 кГц и мощностью 100 Вт/см 2 в течение 25-30 мин, выделяют фракцию клеточных стенок центрифугированием, суспензируют ее в воде и повторно обрабатывают ультразвуком в течение 25-30 мин. Изобретение относится к иммунной биотехнологии, конкретнее к иммуноферментному анализу, и может быть использовано в лабораторной диагностике. Известен способ получения антигена, характерного для возбудителей бычьего и человеческого вида и не встречающегося у атипичных микобактерий, заключающийся в выделении из культурального фильтрата возбудителя туберкулеза антигена путем осаждения белков сульфатом аммония в 75 насыщении, диализа для удаления солей, хроматофокусировании наколонке, аффинной хроматографии на сефарозе с Коканавалином А и гель-фильтрации на Биогеле Р 100 1. Указанный способ является прототипом к заявляемому. Общими признаками для заявляемого способа и прототипа являются использование бактериальной массы в качестве исходного материала, осаждение фракции, содержащей целевой продукт, и его очистку. Однако способ-прототип обладает недостаточно высокой специфической активностью, в связи с чем возникает частичная денатурация и снижение активности микобактериальных антигенов. Задачей заявляемого способа является повышение стандартности, специфичности и чувствительности указанного антигенного препарата. 11463 1 2008.12.30 Поставленная задача достигается путем того, что предложен способ получения антигенного препарата для скрининговых исследований групп риска по туберкулезу, включающий суспензирование клеток М. 37 в 0,25 растворе фенилового спирта с последующим замораживанием и размораживанием суспензии со сменой раствора фенилового спирта, после чего обрабатывают суспензию клеток ультразвуком частотой 15-35 кГц и мощностью 100 Вт/см 2 в течение 25-30 мин выделяют, фракцию клеточных стенок центрифугированием, суспензируют ее в воде и повторно обрабатывают ультразвуком в течение 25-30 мин. Пример 1. Микобактерии вида 37 выращивают на среде Сотона в течение 8 недель при 37 С, инактивируют внесением в посевы фенола до конечной концентрации 3 . Бактериальную массу отделяют от жидкой среды путем центрифугирования и суспензируют в 0,25 растворе фенилового спирта, замораживают при 40 С в течение 3 ч, оттаивают со сменой раствора. Обрабатывают ультразвуком в течение 25-30 мин (частота 15-35 кГц, мощность 100 Вт/см 2), центрифугируют, осадок удаляют, а надосадочную жидкость центрифугируют при 10000 об./мин, полученный осадок суспензируют в воде и повторно обрабатывают ультразвуком. Оценку чувствительности и специфичности полученного препарата - сониката клеточных стенок (СКС) - проводят в непрямом иммуноферментном анализе (ИФА) по общепринятой методике. При постановке ИФА антигенный препарат - соникат клеточных стенок . 37 - фиксируют на иммунологических панеляхв дозе 1 мкг на лунку в КББ, рН 9,6. Сыворотки крови в разведении 150 10 здоровых доноров (для определения специфичности) и 10 лиц, больных туберкулезом (для определения чувствительности), исследовали с указанным выше антигенным препаратом (таблица). Чувствительность и специфичность антигенного препарата в ИФА Антигенный препарат Чувствительность Специфичность Соникат клеточных стенок 8090 Очищенный антиген с м.м. 20-24 кДа 30100 Как следует из представленных данных таблицы, у очищенного антигена с м.м. 20-24 кДа чувствительность составила 30 , у антигенного препарата - сониката клеточных стенок - чувствительность составила 80 . Следует отметить и наилучшее сочетание активности и специфичности у сониката клеточных стенок. Чем ближе диагностическая чувствительность и специфичность к 100 , тем более эффективен антигенный препарат для скрининговых исследований групп риска по туберкулезу. Оптимальное сочетание активности и специфичности отмечено у сониката клеточных стенок. Таким образом, достигаемый технический результат заявляемого способа позволяет получать антигенный препарат - соникат клеточных стенок, который обладает диагностической чувствительностью и специфичностью и пригоден для стандартных исследований групп риска по туберкулезу. Источники информации 1.// . / Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.